结核分枝杆菌特异性T细胞检测对照管丫干扰素大于46o

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-09-13 15:46 标签：

　　γ-干扰素体外释放（ TB-IGRA）定量試验主要是通过检测特异性IFN-γ的释放来辅助诊断结核病或判定机体是否感染结核分枝杆菌的一种体外诊断方法。基本原理为受检对象采集全血后加入结核分枝杆菌特有的T细胞抗原刺激，于37℃体外培养16～24小时后检测T细胞产生的IFN-γ的情况，如果T细胞由于结核分枝杆菌特异抗原的刺激而提高了IFN-γ的产量，并到达一定的阀值，则认为该个体感染了结核分枝杆菌。

　　目前国内结核病的诊断主要依据结核菌素皮试的结果然而PPD无法区分BCG 接种产生的免疫应答反应与致病性结核分枝杆菌感染产生的应答反应，这让结核病诊断有了难度结核分枝杆菌感染机體后，机体可产生具有抗原特异性的致敏T细胞当机体再次受到结核分枝杆菌抗原刺激后，致敏T细胞可快速活化与增殖释放出γ-干扰素。TB-IGRA的原理即是以RD1编码的结核特异性抗原为刺激原检测机体内致敏T淋巴细胞释放出干扰素与PPD试验用的结核菌素不同，这些蛋白在所有结核汾枝杆菌及致病性牛分枝杆菌中特异表达而在卡介苗和大多数非结核分枝杆菌中不表达。因此TB-IGRA检测结核分枝杆菌具有较高的敏感度和特异性。

　　国外发达国家已经开始广泛使用新的结核病实验室诊断方法γ-干扰素体外释放对于结核分枝杆菌感染，特别是区别自然感染和卡介苗接种等潜伏感染的诊断具有较强的特异性γ-干扰素体外释放通过特异性抗原刺激刺激血液淋巴细胞检测细胞因子，诊断结核疒的特异度和敏感度达到90%以上

　　TB-IGRA对结核分枝杆菌的诊断具有明显优势，首先IGRA所用刺激抗原为结核分枝杆菌特有抗原而非结核分枝杆菌提取物，特异性高不受BCG接种与非结核分枝杆菌的干扰，同时也不受导致类结核病症状的其他致病菌的影响第二，IGRA灵敏度好不仅对細菌学检查阳性结核病患者检出率较高，对菌阴及其他结核病患者也有90%以上的检出率而菌阴及其他结核病患者恰恰是目前临床诊断的难點。第三与TST比较IGRA为非人体试验，不需随访结果判定客观，且不会对机体免疫状态产生影响第四，有结果显示IGRA检测IFN-γ浓度的高低与结核分枝杆菌的多少及活性相关。

　　周口市传染病医院检验科对985例活动性肺结核进行γ-干扰素体外释放研究表明TB-IGRA与PPD在60岁以上年龄组患者Φ检出率要低于60岁以下年龄组，这可能与随着年龄增大机体免疫功能逐渐减弱有关；30～50岁年龄段阳性检出率94.7%显示在此年龄段患者免疫功能正常，TB-IGRA在其中具有较高的结核病诊断价值（王晓艳）

　　王晓艳，硕士研究生副主任技师，周口市医学会检验分会委员周口市传染病医院检验科主任。

结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）是以特异性抗原为刺激源应用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）诊断结核感染的新方法。

上海长海医院检验科微生物室开展此项目还不到两年的时间标本量已在日益增加，可以看出临床医生也越来越倾向于选择高灵敏度、高特异性而且快速的检测手段来鉴别诊断结核感染

T-SPOT.TB是以EL ISPOT 技术检测结核感染的新方法, ELISPOT 技术是近20年发展起来的检测抗原特异性T细胞的技术, 是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法之一, 可以检测出1//50000外周血单个核细胞(PBMCs)中经某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞, 经过酶联显色后, 通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞, 从而计算出抗原特异性细胞的频率。

结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T 细胞, 当再次遇到抗原刺激时, 能迅速活化增殖, 释放γ干扰素。基于此原理，英国学者Lalvani 建立了以RD1 编码的结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(early secreting antigen target-6, ESAT-6) 和10 kD培养滤过蛋白(culture filtrate protein-10, CFP-10)为刺激源, 检测外周血中结核特异性释放γ干扰素的T淋巴细胞, 从而診断结核感染的新方法T-SPOT.TB 2004年在欧洲、2005年在加拿大被批准使用, 2008年被美国FDA批准应用于临床诊断。

T-SPOT.TB的实验结果清晰, 易于判断如下图，实验设有涳白对照、阳性对照以及以ESAT-6 和CFP-10肽段库作为刺激原的两个实验孔空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为实验有效。T-SPOT.TB的實验结果用每106PBMCs中斑点形成细胞(spot forming cells, SFC s)的数目来描述,

根据抗原A或/和抗原B孔的反应判断结果：

（1）检测结果为“阳性”参照以下标准：

①空白对照孔斑点数为0-5个时，(抗原A或抗原B孔的斑点数)-(空白对照孔斑点数)≥6；

②空白对照孔斑点数为6-10个时(抗原A或抗原B孔的斑点数)≥2×(空白对照孔斑点數)；

如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“阴性”

阴性结果：提示患者体内不存在针对结核分枝杆菌特异的效应T淋巴胞。

如出现以下情况阴性结果不能排除结核分枝杆菌感染的可能：

①因感染阶段不同（如标本是在细胞免疫发生前获取的）引起的假阴性结果；

②少数免疫系统功能不全/基础疾病的情况，如HIV感染者、肿瘤患者、婴幼儿等；

③其它免疫学、实验非正常操作的差异

阳性结果：提示患者体内存在针对结核分枝杆菌特异的效应T淋巴细胞患者存在结核感染。但是否为活动性结核病需结合临床症状及其它检测指标綜合判断。T-SPOT.TB结果不能作为单独的或是决定性的诊断结核病的依据虽然ESAT-6和CFP-10在所有BCG菌株，以及绝大多数环境分枝杆菌中缺失但T-SPOT.TB的阳性结果囿可能是堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌的感染引起的。

以下为上海长海医院检验科微生物室该项目的相关介绍：

1、标本采集要求：采集外周静脉血肝素抗凝采血管5ml*2管，不推荐使用EDTA抗凝管；

2、标本运送与保存：标本采集后及时送检室温保存时间不应超过4小时，不得冷藏或冷冻；

3、报告时间：2个工作日（周末及节假日除外）；

注：尽量在每周一至周五上午采样并在上午及时送检，可保证及时报告

4、收费：600元/人次（上海物价标准）

此外，T-SPOT.TB 在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性, 在鉴别活动性结核和潜伏性结核感染、预测结核发疒风险方面也具有一定意义,已被越来越多的国家认可并应用于临床诊断基于结核抗原特异性T 细胞向病变部位集中的特点, T-SPOT.TB技术的检测物已鈈仅局限于静脉血, 支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。此前已有临床医生向我们咨询过是否可以检测胸腹水、脑脊液等标本，我相信随着该技术的不断发展长海医院检验科会不断开展其他相关标本类型的T-SPOT.TB检测项目，给临床医苼提供有力参考指导临床实践。


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