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N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)检测试剂盒(胶体金法)
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【产品结构组成】
玻璃纤维素膜，胶体金标记的抗NT-proBNP抗体，胶体金标记的亲和素；硝酸纤维素膜，鼠抗NT-proBNP抗体，兔抗亲和素抗体，醋酸纤维素，PVC片，Ps塑料。
【产品标准】
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N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)检测试剂盒(胶体金法)
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人 N末端前脑钠肽（NT-proBNP） ELISA 检测试剂盒说明书
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&人（Human）N末端前脑钠肽（NT-proBNP） ELISA 检测试剂盒本试剂仅供研究使用& 标本：血清或血浆试验原理：NT-proBNP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NT-proBNP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将NT-proBNP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NT-proBNP的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）&96孔配置&48孔配置&配制96/48人份酶标板&1块板（96T）&半块板（48T）&即用型塑料膜板盖&1块&半块&即用型标准品：800pg/ml&1瓶（0.6ml）&1瓶（0.3ml）&按说明书进行稀稀空白对照&1瓶（1.0ml）&1瓶（0.5ml）&即用型标准品稀释缓冲液&1瓶（5ml）&1瓶（2.5ml）&即用型生物素标记的抗NT-proBNP抗体&1瓶（6ml）&1瓶（3.0ml）&即用型亲和链酶素-HRP&1瓶（10ml）&1瓶（5.0ml）&即用型洗涤缓冲液&1瓶（20ml）&1瓶（10ml）&按说明书进行稀释底物A&1瓶（6.0ml）&1瓶（3.0ml）&即用型底物B&1瓶（6.0ml）&1瓶（3.0ml）&即用型终止液&1瓶（6.0ml）&1瓶（3.0ml）&即用型自备材料1．&蒸馏水。2．&加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．&振荡器及磁力搅拌器等。安全性1．&避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2．&实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3．&不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1．&试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．&实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．&不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．&使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．&使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．&洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7．&底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8．&加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9．&按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、&血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000&g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、&血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000&g离心30分钟去除颗粒。3、&细胞上清液---1000&g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、&保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1．&标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：800 pg/ml&（6号标准品）&原倍浓度不用稀释直接加入50ul。400 pg/ml&（5号标准品）&100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液200 pg/ml&（4号标准品）&100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液100 pg/ml&（3号标准品）&100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液50 pg/ml&（2号标准品）&100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液25 pg/ml&（1号标准品）&100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0 pg/ml&（空白对照）&原始浓度不用稀释直接加入50ul。2．&洗涤缓冲液（50&）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤1．&使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．&根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3．&加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4．&甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．&每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6．&甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．&每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8．&取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9．&在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案&标准品浓度（pg/ml）&A&800&800&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品B&400&400&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品C&200&200&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品D&100&100&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品E&50&50&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品F&25&25&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品G&0&0&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品H&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品&样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2. 特异性：不与其它细胞因子反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结 果 判 断 与 分 析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的NT-proBNP标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的NT-proBNP含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-800pg/ml4、敏感度： 1.0 pg/ml&
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主营产品：猪ELISA试剂盒，牛ELISA试剂盒，小鼠ELISA试剂盒，ELISA试剂盒，大鼠ELISA检测试剂盒，羊ELISA检测试剂盒，鸡ELISA检测试剂盒，鸭ELISA检测试剂盒，植物ELISA检测试剂盒，昆虫ELISA检测试剂盒，猪ELISA检测试剂盒，猴ELISA检测试剂盒，犬ELISA检测试剂盒Clinical Verification of H-FABP Diagnosis Kit and the Performance Indexs of Roche Cobas h232Fast Detection NT-proBNP and cTnT Were Measured and Discussed
作者中文名
南方医科大学
临床检验诊断学
临床验证,Rochecobash232,N-末端脑钠肽,肌钙蛋白T,评价
英文关键词
ClinicalverificationRochecobash232,N-terminalpro-B-typenatriureticpeptide,CardiactroponinT,Performanceindexs
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研究背景脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding proteins, FABPs)是一组低分子量(14KD～15KD左右)结合长链脂肪酸的胞质蛋白,分布于哺乳动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、表皮等组织细胞中,目前已发现九种类型,以其在组织中的分布而命名,它们在蛋白质序列上显示有很大的同源性。各型FABP能够结合各种类型脂肪酸,在脂肪酸的摄取、转运及代谢调节中具有重要作用。调节脂肪酸代谢是各型FABP的共同作用,但在不同组织、不同条件下各型FABP的存在状况及活性均有所不同。由于各型FABP在分布上具有组织特异性,在结构和功能上各有异同,这保证了在不同组织、不同条件下脂肪酸代谢可以有条不紊地进行,同时也为-些疾病的诊断提供了便利。FABP是低分子量可溶性蛋白,在组织细胞受损时可快速释放入血和尿中。心型脂肪酸结的蛋白(heart type fatty acid-binding protein, H-FABP)特异地存在于心肌组织中,约占心脏全部可溶性蛋白质的4%～8%,H-FABP与心肌细胞内的长链脂肪酸相结合,将其从细胞质膜向脂化和氢化部位运输,从而进入能量代谢体系氧化分解最终生成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP),为心肌收缩提供能量。心肌缺血导致心肌细胞坏死,H-FABP从心肌细胞渗漏到血液中,从而使外周血中的H-FABP上升。我们通过观察,其在急性心肌梗死(acute myocardialinfarction, AMI)发生后1-2h立即升高,并持续至12h,保持较高水平和较高的敏感性,在24h左右恢复并接近正常水平,与肌红蛋白(myoglobin, Mb)相似,但由于其在AMI发生早期即出现异常升高,而较Mb、C-反应蛋白(C-reaction protein, CRP)更具心肌特异性,受其他组织影响甚小,国内外很多学者研究也证实了H-FABP与肌红蛋白在AMI诊断上具有基本相同的时效性,但在诊断的敏感性和特异性上优于Mb,因此H-FABP可望成为更理想的诊断AMI的早期生化标志物。为了加快H-FABP在我国的应用和推广,我们研究小组在中央保健专项课题的资助下,联合北京大学生命科学院和香港科技大学完成了抗原H-FABP的克隆、表达和纯化,抗H-FABP单克隆抗体和多抗的制备,H-FABP酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)的建立,以及H-FABP在AMI早期诊断价值评价等研究。AMI是严重危害患者生命的临床急症,快速诊断、及时决策是挽救患者生命的重要保,救护地点检测或床旁检测(point of care testing, POCT)在此类疾病的诊断中有重要价值,因此,近期我们与兰州生物制品研究所联合研发了H-FABP定性床旁快速检测的试剂盒(胶体金法),按照国家食品药品监督局《体外诊断试剂的临床研究技术指导原则》,需对本试剂盒进行临床试验验证。研究目的评价开发的H-FABP定性床旁检测试剂盒与国家食品药品监督局批准上市的同类试剂的临床诊断的等效性及临床符合性。研究方法样本为中国人民解放军第305医院(A机构)和中国人民解放军总医院(B机构)住院、门诊及体检中心就诊人员的血浆或血清,根据入选标准和排除标准共入选240例样本,采用平行、双盲、对照试验标准对试验产品和对照产品进行检测,所得数据应用SPSS13.0软件包进行统计学描述与分析,配对资料采用McNamara’s Test卡方检验,两种试验产品结果的一致性采用Kappa检验,采用双侧检验,认为P$$0.05为差异有统计学意义。研究结果1.1以对比产品为标准,试验产品与对比产品在A、B两家临床试验机构的测定一致率和不一致率的结果显示：两家临床试验机构的测定结果一致性无差异(χ2=0.817,v=1,P=0.366,$$0.05),测定数据可以进行合并分析。1.2以对比产品诊断结果为标准,A机构试验产品与对比产品的结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为100%、95.31%、97.5%；B机构试验产品与对比产品的结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为100%、96.97%、98.33%；两家试验单位数据合并后,试验产品与对比产品的结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为100%、96.16%和97.92%,并对试验产品与对比产品测定结果进行Kappa检验,结果显示两种产品的测定结果的一致性很好(Kappa指数=0.958,检验U=14.857,P=0.000),证明试验产品的质量与对比产品等效。1.3以临床诊断为标准,A机构试验产品与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为98.33%、100%和99.17%；对比产品与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为93.33%、100%和96.67%。B机构试验产品与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为93.33%、100%和96.67%；对比产品与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率、阴性符合率和总符合率为90.00%、100%和95.00%；数据合并后,试验产品与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率为95.84%,阴性符合率为100%,总符合率为97.92%；对比产品与临床诊断结果进行配对分析,阳性符合率91.67%,阴性符合率为100%,总符合率为95.83%。说明试验产品的特异性好、准确性高,临床符合性好。研究结论1、兰州生物研究所生产的H-FABP检测试剂盒(胶体金法)与同类上市产品深圳康保公司生产的H
BackgroundFatty acid binding proteins (FABPs) is a group of low molecular weight (14KD-15the KD or so) cytoplasmic protein, which is combined with long-chain fatty acid. It is distributed in myocardium, small intestine, liver, adipose tissue, brain, epidermis of mammalian tissue cells. There are nine types of FABPs, which are named after their distribution in tissue and they show significant homology in protein sequence. Each kind of FABPs combine different types of fatty acid, thus FABPs play an important role in uptakeing, ransportation and metabolic regulation of fatty acid. Regulating fatty acid metabolism is the common function of all types of FABPs, but presence and activity of each FABP will be different from others under circumstances of different tissue and condition.Because of tissue specificity in distribution and differeces in structure and function among FABPs, on one hand, fatty acid metabolism is able to develop smoothly in different tissues and conditions, on the other hand, it makes diagnosis of some disease easier. FABP is dissolvable protein with low molecular weight,it can be released rapidly to blood and urina when tissue cells get injured.H-FABP exists in myocardium specifically and accounts for4%-8%of all heart bined with long chain fatty acid in cardiocyte, H-FABP transports the fatty acid from cytomemtrane to lipined and hydrogened positions,then translocates into energy metabolism system and produces Adenosine Triphosphate (ATP) by oxygenolysis,which offers enegy for myocardium contraction.Myocardial ischemia cause heart cell necrosis, H-FABP myocardial cells from leaking into the blood, and the peripheral blood H-FABP rise. We through the observation, the acute myocardial infarction (AMI), acute myocardial infarction after1～2h rise immediately, and continues to12h, high level and high sensitivity, in24h or so restore and close to normal, and myoglobin (Mb) similar. But it rise abnormaly at the AMI occurred early, more specificity than the Mb and C-reaction protein (CRP) more myocardial and its influence is very small by other organizations. It is expected to become a more ideal diagnosis of early biochemical markers AMI when many domestic and foreign scholars study also found H-FABP and Mb have the basic same AMI diagnosis the timeliness, but in the diagnosis of sensitivity and specificity is superior to the Mb.In order to speed up the H-FABP application in our country and the promotion, we study group in the central health care for the special subject, joint Beijing university life academy of sciences and the Hong Kong university of science and technology to complete the antigen H-FABP cloning and expression of and purification, resistance to H-FABP monoclonal antibodies and the length of polyclonal antibody preparation, H-FABP ELISA test (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) build, and H-FABP in AMI early diagnosis value evaluation. AMI is serious harm of life in patients with clinical emergency, rapid diagnosis, timely decision is to save lives important protection, rescue site testing or to the bed detection (point of care testing, POCT) in such disease diagnosis in show the important value, therefore, the recent and lanzhou biological products research and development, the joint H-FABP qualitative to the bed of fast detection kits (colloidal gold method), and going to apply for production number, according to state food and drug administration the in vitro diagnostic reagents clinical research technique guiding principle $$, this kit to clinical experiment.ObjectiveEvaluation developed the H-FABP qualitative to the bed detection kit and the state food and drug administration approved the listed the clinical diagnosis of similar reagent of sex and clinical compliance equivalent.MethodSamples were the plasma or serum of in-patient, outpatient and kindergarden personnel from The305th Hospital of PL A and General Hospital of PL A insamples were enrolled according
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