工具类服务
编辑部专用服务
作者专用服务
基于核酸适体的比色技术检测肿瘤标志物血管内皮生长因子
目的 基于核酸适体和磁珠,提出一种检测肿瘤标志物血管内皮生长因子(VEGF)的比色方法.方法 核酸适体与标记脲酶的单链结合,通过生物素-亲和素的特殊识别作用固定在链霉亲和素修饰的磁珠上;待检测的肿瘤VEGF标志物与适体结合形成茎环结构,使标记脲酶的单链脱落下来;经磁分离,转移上清液,加入到含一定量尿素和酚红试剂的溶液中.利用上清液中的脲酶水解尿素产生氨,使得溶液的pH值升高,导致溶液的颜色变化,通过肉眼或紫外分光光度计分析显色结果.结果 该检测体系在最佳条件下,检测VEGF的线性范围为0.1～10 pmol/L,检测限达0.06 pmol/L.并利用此体系,检测人肺癌患者血清中的VEGF浓度,其结果与ELISA方法检测出的结果基本一致.将本方法与ELISA方法同步盲法测定10例血清样本,结果显示本方法的准确率为90％,表明其具有较高的有效性和敏感性.结论 该检测方法操作简单方便,同时具有较高的灵敏度和选择性,在临床VEGF检测中具有潜在的应用前景.
Abstract：
Objective To develop a novel colorimetric method for detecting the tumor biomarker vascular endothelial growth factor (VEGF) based on aptamer and magnetic beads.Methods The capture aptamer was hybridized to urease functionalized single-stranded DNA (ssDNA) and immobilize on the surface of magnetic beads by specific biotin-avidin binding.In the presence of VEGF,aptamers bound to VEGF to form a specific stem-loop structure to release the urease functionalized ssDNA.After separation,the supernatant was transferred to a tube and urea and phenol red were added.Urease hydrolyzed urea to produce ammonia to cause an increase of the pH value and a color change of phenol red.The results were inspected with either the naked eyes or by a UV spectrophotometer.Results Under optimized conditions,the detection system showed a good linear relationship for VEGF detection in the range of 0.1 to 10 pmol/L with a detection limit as low as 0.06 pmol/L.The results of VEGF detection in the serum of patients with lung cancer were consistent with those using an ELISA Kit.The results of examination of 10 serum samples with this aptamer-based method and ELISA kit showed that the accuracy of this method was 90％.Conclusion This aptamer-based system provides an simple and convenient method for VEGF detection with a high sensitivity and selectivity.
LIU Jingrong
PAN Yunling
ZHAO Yanping
LIU Meicen
CHEN Jinghua
LI Chunyan
作者单位：
福州市第一医院中西医结合肿瘤科,福建福州,350009
福建医科大学药学院,福建福州,350122
年，卷(期)：
Keywords：
在线出版日期：
基金项目：
国家自然科学基金，福州市科技计划项目，福建省科技厅重点项目，福建省自然科学基金，福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划(JA13130)Supported by National Natural Science Foundation of China
本文读者也读过
相关检索词
万方数据知识服务平台--国家科技支撑计划资助项目（编号：2006BAH03B01）(C)北京万方数据股份有限公司
万方数据电子出版社您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
基于适体技术体检测血管内皮生长因子165.pdf72页
本文档一共被下载：
次 ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。
文档加载中...广告还剩秒
需要金币：200 &&
基于适体技术体检测血管内皮生长因子165.pdf
你可能关注的文档：
··········
··········
学位论文独创性声明 本人声明兹呈交的学位论文是本人在导师指导下完成的研究 成果。论文写作中不包含其他人已经发表或撰写过的研究内容，如 参考他人或集体的科研成果，均在论文中以明确的方式说明。本人 依法享有和承担由此论文所产生的权利和责任。 论文作者签名： 签名日期： 学位论文版权使用授权声明 本人同意授权华侨大学有权保留并向国家机关或机构送交 学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人 授权华侨大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有 关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 签 名 日期： 签 名 日期：
万方数据 摘要 摘 要 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF ）是体内重要的 血管生长因子，促进内皮细胞分裂增殖和新血管的生成。VEGF165是VEGF家族 中活性最强的因子，在内皮细胞相关的基础研究、信号途径、临床诊断等方面 具有重要作用，因此如何对其进行准确快速的检测已经成为研究的重点。常用检 测蛋白方法是以抗体为工具，因其本身的缺陷，限制了其应用。核酸适体为一 段寡聚单链DNA或RNA分子，与抗体相比具有较高的特异性和亲和性，同时具 有稳定性好、制备周期短、免疫原性小、靶分子范围广等优点，作为可替代抗 体的适体，在科学研究、临床诊断和治疗中具有很好的前景。 本文首先探讨了以适体替代抗体通过点杂交和Eastern
blotting方法体外检测 非还原状态和还原状态的VEGF165 。并和以抗体做的结果进行比较。另外，本文 还利用基于适体的局部保护原理 Aptamer-Based Regionally
PCR, ARP-PCR
，对VEGF165蛋白进行检测。适体与
正在加载中，请稍后...文档分类：
下载后只包含 1 个 PDF 格式的文档，没有任何的图纸或源代码，
下载前请先预览，预览内容跟原文是一样的，在线预览图片经过高度压缩，下载原文更清晰。
您的浏览器不支持进度条
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩?页未读，继续阅读
播放器加载中，请稍候...
该用户其他文档
下载所得到的文件列表基于纳米材料修饰的电流型免疫及适体传感器的研究.pdf
文档介绍：
西南大学硕士学位论文基于纳米材料修饰的电流型免疫及适体传感器的研究姓名:管姝申请学位级别:硕士专业:分析化学指导教师:袁若西南大学硕士学位论文摘要基于纳米材料修饰的电流型免疫及适体传感器研究分析化学专业硕士研究生管姝指导教师袁若教授摘要生物传感器是利用生物活性单元(如酶、抗体、核酸、细胞等)与物理化学检测要素组合在一起对被分析物进行检测的装置.电流型生物传感器根据生物化学反应前后的电流变化来检测生物分子的浓度,所以增加电流响应信号,发展灵敏度高、稳定性好的生物分析技术一直是电流型生物传感器研究的一个重要方向。近年来,纳米材料(如纳米粒子、纳米线,纳米管等)已被广泛应用到生物传感器,其具有较大的比表面积,良好的吸附能力和生物兼容性等特点,作为生物活性物质的载体其不仅可提高生物分子的吸附量和稳定性,亦可很好的保持生物分子的生物活性,还能很大程度上改善传感器灵敏度和使用寿命等性能。电化学免疫传感器利用抗原和抗体间的高度特异性结合,将传统的免疫测试方法与近代生物传感技术、电化学分析技术融为一体,既具有免疫反应的高选择性又兼有电化学分析的高灵敏性,被广泛应用于临床诊断领域。将适体作为分子识别元件固定电极上的电化学适体传感器,根据适体与目标分析物结合前后电化学信号的变化来实现对目标分析物检测的分析器件,近年来的发展备受关注。本论文将纳米技术、生物传感技术和电化学分析技术结合用于免疫及适体分析。应用导电纳米聚合物、纳米金、碳纳米管、纳米铂等纳米材料,采用不同方法在电极表面构建功能化生物分子固定界面,制备了一系列性能优良的电化学生物传感器。同时用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、光谱技术、电化学分析技术对电极的组装过程、功能界面进行了表征,对其在生物分析方面的应用进行了探讨。具体而言本文开展了如下工作:1.基于聚2,“二氨基吡啶膜及纳米金修饰的癌胚抗原免疫传感器研究利用导电聚合物2,6一二氨基毗啶(pPA),以癌胚抗原(CEA)弄I:I癌胚抗体(antiCEA)为生物模型分子,采用电聚合技术和共价键合作用,研制新型高灵敏电流型免疫传感器。采用简单快捷的电聚合方法,在玻碳电极(GCE)表面聚合2,6.二氨基毗啶(PA),创建了表面带-Nit3+,导电性能好,结构稳定,呈纳米线状的聚2,6.二氨基吡啶膜(pPA)免疫传感器固定矩阵。在此矩阵上利用戊二醛交联电活性物质硫堇(Thi),再利用硫堇分子丰富的氨基结合具有比表面积大、吸两南大学硕士学位论文摘要鼍I.,——一?II,IEE—Ell—Ell一.....鼍曼曼皇皇曼曼曼附力强、生物相容性好等优点的纳米金(GNPs)。继而利用纳米金吸附固定癌胚抗体(anti-CEA),制得CEA免疫传感器。经过扫描电镜(SEM)等实验表征发现,该电流型免疫传感器简便地创建的聚合物固定矩阵,具有表面纤维网状结构,能较大的增加电极比表面积,为电子的转移提供更多的通道。同时利用其表面大量的正电荷氨基能较好得固定Thi,而采用的GNPs增加了抗体的固定量,并较好的保持了抗体的生物活性。该传感器具有制作过程简单,检测限低,稳定性好以及线性范围宽等特点。2.基于纳米金与碳纳米管j硫堇复合物固定甲胎蛋白的电流型免疫传感器研究利用多壁碳纳米管.硫堇(MWNTs-Thi)复合物和纳米金固定anti-AFP,成功构建了高灵敏的电流型AFP免疫传感器。本研究在电极表面创建固载基质时,选用被视为线性富勒烯分子,拥有独特的分子结构的碳纳米管fiwrcrs),利用它能与含有兀电子的化合物(如硫堇)通过觚非共价键作用相结合,将功能化的MWMfs-1hi膜修饰于玻碳电极表面。该固定矩阵中,碳纳米管空心管状结构作为电活性物质硫堇的载体,可提高硫堇作为媒介体在修饰电极中的固定量,稳定性并改善其电子的传递。同时经硫堇分子修饰的Mw卜rrs’表面得到功能化而带有丰富的氨基,增强了其生物相容性,便于进一步固载纳米粒子、生物分子等。在此复合物膜上通过静电吸附固定纳米金,从而吸附甲胎蛋白抗体。制得了一种性能优良的电流型甲胎蛋白抗原免疫传感器。该传感器制作过程简单、稳定性好,线性范围0.20-200ng/mL,检测限为O.06ng/rnL(S/N=3)a3.基于纳米铂与酶标生物素.亲和素构建的超灵敏凝血酶适体传感器的研究利用纳米铂(Ptm's)、过氧化氢酶标记凝血酶适体,通过其对过氧化氢的催化作用,构建信号放大的新型电流型凝血酶传感器。本研究采用双适体夹心分析模式,以及酶标记催化放大手段。玻碳电极电极表面的电沉积纳米金,可增大电极比表面积,改善电极表面与生物分子之间的电子传输能力,提供良好的组装基质,为凝血酶适体I(TBAI)的巯基自组装提高固定量,改善检测的灵敏度。结合凝血酶后,将制成的含有酶标生物素.亲和素(HRP-Biotin,HRP-Adivin)、纳米铂、凝血酶适体Ⅱ复合纳米粒子,通过适体与凝血酶蛋白的作用,固定于电极表面。在过氧化氢的存在下,适体Ⅱ上标记的PtNPs-HRP复合物共同作用于底物,从而产生催化放大电流信号。所采用的功能化适体II,利用nNPs结合5’末端标记巯基的单链适体Ⅱ,并通过生物素.亲和素体系引入大量的过氧化氢酶,将PtNPs和HRP的催化放大作用有机结合,通过酶催化和底物循环放大作用,极大地增加了响应电流,提高了传感器的灵敏度。该传感器在灵敏度方面显示了较强的优势,凝血酶检测范围为2.3×10以2—1.0×10。9mol/L,相关系数为0.9898,检测限为0.8×10以2mol/L。关键词:免疫传感器适体传感器导电聚合物碳纳米管信号放大西南大学硕士学位论文ABSlRAC&lStudiesonNovelAmperometricImmunosensorandAptasensorBasedonNano..materialsAnalyticalChemis.trymasterPostgraduate-ShuGuanSupervisor-ponent(eg.allzylnes,antibodies,nucleicacids,cell,ac)ponent.AmeperometriebiosensorbasedOilthechangeintheamperometricrcspo/Isebeforeandafterbiochernicalreactiontodetecttheconcentrationofbiomolecule.So,enhancingcurrentresponsessigleanddevelopingofsensitivebioassaytechnologyoneoftheimportanttasksinthestudyofarneperomctriebiosensor.Inrecentyears,nano-materials(eg.Nanoparticles,nanowires,rmnotubcsetc),erda'bitinglargespecificsurfacearea,patibilityandstrongadsorpt1
内容来自淘豆网转载请标明出处. 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
核苷酸适体在靶向给药系统中的应用进展
下载积分：874
内容提示：核苷酸适体在靶向给药系统中的应用进展
文档格式：PDF|
浏览次数：0|
上传日期： 14:39:35|
文档星级：
全文阅读已结束，如果下载本文需要使用
 874 积分
下载此文档
该用户还上传了这些文档
核苷酸适体在靶向给药系统中的应用进展
官方公共微信 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
核酸适体生物传感器
下载积分：133
内容提示：核酸适体生物传感器
文档格式：PDF|
浏览次数：35|
上传日期： 13:41:20|
文档星级：
全文阅读已结束，如果下载本文需要使用
 133 积分
下载此文档
该用户还上传了这些文档
核酸适体生物传感器
官方公共微信