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Lee等比较了QFT-G、T-Spot.TB和TsT在ESRD患者中LTBI的诊断,结果显示QFT-G和T-Spot.TB的结果较类似,但TsT和QFT-G、T-Spot.TB的实验结果相差较远。T-Spot.TB的检出率比QFT-G高(分别为46.9%和40.0%)。然而,也有研究显示QFT-G由于有许多不确定性结果,因此不能用于类风湿性关节炎LTBI的检测。
       Bergamini等应用QFT-G、QFT-GIT和T-Spot.TB技术对496个0-19岁的儿童和青少年LTBI进行检测,结果发现2种QFT检测得出的结果更相似,QFT相对于T-Spot.TB在4岁以下儿童中得到的非确定性结果更多。Chun等研究显示,QFT-GIT比TsT在诊断接种过BCG的儿童中LTBI的特异性更强。
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  本试验用于测定机体对结核杆菌有无变态反应。将一定量结核菌素注入皮内,如受试者曾感染结核杆菌,则在注射部位出现迟发型变态反应炎症,是为阳性,未感染结核杆菌则为阴性。此法可用于检测可疑病人是否感染结核菌,接种卡介苗后是否转阳以及检则机体细胞免疫功能。
  结核菌素试验一般使用旧结核菌素(Old-tubercein简称OT),是结核杆菌在肉汽中培养物经加热浓缩的滤液。主要成分是结核蛋白,也含有结核杆菌的其他代谢和培养基成分。稀释1万倍,0.1毫升内含有1个单位(稀释1000倍,0.1ml有10个单位),取OT结核蛋白纯化后称为精制纯蛋白衍生物(Purified protein derivative,简称PPD),取0.00002ml作为一个结核菌素单位,是现今国际制造的标准PPD,称为PPD-S。
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IP10还广泛参于某些病理生理过程,如调节免疫细胞的分化发育、体内的迁移和分布等。IPl0在趋化效应T细胞到Th1型细胞主导的炎症部位中发挥重要作用。Ligllter等发现IP-10相对于IFN-γ来说,不受年龄限制,在5岁以下儿童中阳性率更高,可以作为儿童潜伏性结核检测的辅助标志物。Ruhwald等比较了IP-10、单核细胞趋化蛋白2(MCP-2)和QFT-IT在结核诊断中的价值,结果显示IP-10和MCP-2可以用于结核诊断,结合IP-10和IFN-γ的检测可提高结核检出率。Ruhwald等发现,IP-10和IL-2特别是IP-10可以代替IFN-γ,作为结核感染的诊断标志物。
       TIGRA通过测量IFN-γ的释放量来诊断LTBI。白细胞介素7(IL-7)是一种细胞因子,能够稳定IFN-γ的分泌和提高蛋白产量。Feske等将IL-7加入ESAT-6和CFP-10抗原刺激的淋巴细胞,用来提高EUSA和ELISPOT检测IFN-γ的敏感性。他们以钥孔戚血蓝素作为阴性对照,植物凝集素作为阳性对照。用IL-7提高IFN-γ检测的敏感性可以增强对LTBI的检测,特别是对免疫力低
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评价结核潜伏感染诊断方法的最大问题是缺乏结核潜伏感染的诊断金标准,无法直接测量QFT-GIT、T-Spot.TB和TsT方法的敏感性和特异性。许多研究都比较了QFT-GIT、T-Spot.TB和TST方法在结核诊断中的表现。QFT-GIT和T-Spot.TB结果具有统一性,它们都比TsT更准确降悯。
Dominguez等发现T-Spot.TB在活动性和潜伏性肺结核诊断中都比QFT-GIT更敏感。Chee等发现T-Spot.TB对于诊断肺结核比QFT—GIT更敏感,且QFT-GIT在≥60岁或印度的患者中敏感性明显偏低,而T-Spot.TB在马来西亚和印度人中的敏感性明显低于中国人。de Perio等发现QFT-G、QFT-GIT比TST在卫生工作者LTBI诊断中具有更高的成本效应
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动物试验 将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下,3~4周后若局部淋巴结肿大,结核菌素试验阳转,即可进行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变,并作形态、培养等检查。若6~8周仍不见发病,也应进行解剖检查。 
  快速诊断 一般涂片检查菌数需5x103~4/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果,且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应(PCR)扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定,每ml中只需含几个细菌即可获得阳性,且1?2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题,以免出现假阳性。又细菌L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚,而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA,以致造成PCR假阴性。
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   TIGRA通过测量IFN-γ的释放量来诊断LTBI。白细胞介素7(IL-7)是一种细胞因子,能够稳定IFN-γ的分泌和提高蛋白产量。Feske等将IL-7加入ESAT-6和CFP-10抗原刺激的淋巴细胞,用来提高EUSA和ELISPOT检测IFN-γ的敏感性。他们以钥孔戚血蓝素作为阴性对照,植物凝集素作为阳性对照。用IL-7提高IFN-γ检测的敏感性可以增强对LTBI的检测,特别是对免疫力低下的患者或儿童。
       流式细胞仪IFN-γ释放试验是用PPD、ESAT-6和CFP-10刺激T细胞,然后用流式细胞仪检测IFN-γ阳性的CD4T细胞。这种检测只需要不到一个工作日的时间,可直接从少于1mL全血中检测,结果和T-Spot强相关,比TsT更敏感,特异性高。其步骤如下:在全血中加入PPD、ESAT-6和CFP-10,培养6h,在此过程中CD69上调且产生了许多细胞因子;然后裂解红细胞,收集白细胞;
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  细胞免疫介导的结核菌γ干扰素释放试验(T-cell interferon gamma release assays,TIGRA,又称IFNGRA或GRA)是近年来采用酶联免疫吸附测定(EUSA)或酶联免疫斑点(ELISPOT)法定量检出受检者全血或外周血单个核细胞对结核分枝杆菌特异性抗原的IFN-γ检测释放反应,用于结核菌潜伏感染的诊断。IFN-γ为Thl细胞分泌的一种细胞因子,不但能够反映机体结核的Thl细胞免疫情况,还与体内结核菌的抗原含量密切相关。被结核分枝杆菌抗原致敏的T细胞再遇到同类抗原时能产生高水平的IFN-γ,因此被用于结核潜伏感染的诊断。
       目前美国FDA已批准的基于ELISA的QuantiFERON-TB(GIT-G)和欧洲使用的基于ELISPOT的T-Spot.TB,都是以早期分泌性抗原靶-6(ESAT-6)和培养滤液蛋白-10(CFP-10)为抗原的。其中,QFT-G又出现了一种用试管的改良方法,称为QFT-GIT(QFT-inTube)。ESAT-6和CFP-10都是从短期培养的滤液中分离的低分子量蛋白质,具有良好的免疫原性
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病灶亦以肺部为多见。病菌可以是外来的(外源性感染)或原来潜伏在病灶内(内源性感染)。由于机体已有特异性细胞免疫,因此原发后感染的特点是病灶多局限,一般不累及邻近的淋巴结,被纤维素包围的干酪样坏死灶可钙化而痊愈。若干酪样结节破溃,排入邻近支气管,则可形成空洞并释放大量结核分枝杆菌至痰中。
  1990国外报道各种类型肺结核,40%痰标本检出L型。近年来有人注意到病灶中见有形态不典型的抗酸菌却未见典型结核结节,称之为“无反应性结核”。用结核分枝杆菌L型感染实验动物,也见有同样情况。这是由于结核分枝杆菌L型缺少细胞壁脂质成分,不能刺激结节形成,而仅有淋巴结肿大和干酪样坏死。
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  1990国外报道各种类型肺结核,40%痰标本检出L型。近年来有人注意到病灶中见有形态不典型的抗酸菌却未见典型结核结节,称之为“无反应性结核”。用结核分枝杆菌L型感染实验动物,也见有同样情况。这是由于结核分枝杆菌L型缺少细胞壁脂质成分,不能刺激结节形成,而仅有淋巴结肿大和干酪样坏死。单从病理变化判断,常被误认为慢性淋巴结炎。
有人对155例曾诊断为慢性淋巴结炎蜡块标本作回顾性研究,用卡介苗抗体作免疫酶染色,68.9% 阳性,抗酸染色60%为抗酸颗粒。说明病例中很大一部分与结核分枝杆菌L型有关。临床上对此应予注意,以防漏诊与误诊。
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部分患者结核分枝杆菌可进入血液循环引起肺内、外播散,如脑、肾结核,痰菌被咽入消化道也可引起肠结核、结核性腹膜炎等。国外有报道332例血标本仅2例培养出结核分枝杆菌,但将此标本注入豚鼠皮下 12% 感染结核。说明结核分枝杆菌在血中播散的大多不是一般细菌型,而是一种不易生长的L型。近年有不少肺外结核的新报道,结核分枝杆菌的检出率L型多于细菌型:如儿童结核性脑膜炎10例脑脊液培养,9例培养出L型,细菌型仅1例。
老年性前列腺肥大排尿困难,术后病理切片抗酸菌L型占61.2%,无1例为典型抗酸杆菌。慢性前列腺炎常规培养阴性者,近1/3检出抗酸菌L型。不育症男子精液检查单见抗酸杆菌7%,单见抗酸L型14%, 电镜检查见L型吸附于精子头、尾。以结核分枝杆菌L型感染小鼠,73% 睾丸间质炎症中见有抗酸菌L型。您可在用户中心,查看
(电话归属地:上海市)
【上海解放军部队医院科】咨询热线021- QQ 网址: 地址:上海市立达中学旁上海解放军部队医院,又被称之为上海部队医院,创建于1951年,是集、、教学、科研于一体的大型现代化综合性部队医院,花园式院区布局,倾力保障部队官兵及百姓健康,给广大伤病员提供优美宜人的安静休养环境。医院担负党中央、中央军委和总部首长及部分驻沪部队官兵的任务,承担各军区、军兵种转送的疑难、危重病人的诊治工作,收治全国各地的患者。以泌尿外科、粘膜科、风湿科为特色,为全军两大医学专科研究中心。2010年、2011年连续两年位列复旦大学医院管理研究所发布的全国医院排行榜60强。
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