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革兰阳性需氧菌鉴定板及其制备方法
项目编号：
技术简要说明
本发明提供了革兰阳性需氧菌鉴定板。本发明鉴定板上的４７个碳源和氮源组合可鉴定的革兰阳性菌种类有３００余种，可以鉴定葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、阳性杆菌等多种不同种类的细菌，且不需要进行补充实验就可以得出鉴定结果，操作简单，结果准确，因而，有较大的临床应用价值。本发明提供了革兰阳性需氧菌鉴定板的制备方法。
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专利权信息
专利类型：发明
专利申请日：
公开(公告)日：
申请(专利权)人：上海复星佰珞生物技术有限公司;上海复星医药(集团)股份有限公司
申请人：上海复星佰珞生物技术有限公司;上海复星医药(集团)股份有限公司
公开(公告)号：
分类号：C12Q
发明(设计)人：陈弛宇;朱骏娜;邹艳芳
国别省市：31[中国|上海]
总流量：327
录入日期： 18:40
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一种革兰阳性需氧菌鉴定板，其特征在于该鉴定板由反应底物原液和肉汤培养基组成，所述反应底物原液在鉴定板上的位置及其各成分的浓度为：ｇ／ｍｌ　位置　溶液名称　浓度　Ａ１，Ａ７　水　１００％　Ａ２，Ａ８　糊精　４％　
　Ａ３，Ａ９　Ｎ－乙酰－Ｄ－葡糖胺　４％　Ａ４，Ａ１０　Ｎ－乙酰－β－Ｄ－甘露糖胺　４％　Ａ５，Ａ１１　苦杏苷　４％　Ａ６，Ａ１２　Ｌ－树胶醛糖　４％　Ｂ１，Ｂ７　对苯二酚葡萄糖苷　８％　
　Ｂ２，Ｂ８　Ｄ－纤维二糖　４％　Ｂ３，Ｂ９　Ｄ－半乳糖　４％　Ｂ４，Ｂ１０　Ｄ－葡萄糖酸　４％　Ｂ５，Ｂ１１　α－Ｄ－葡萄糖　４％　Ｂ６，Ｂ１２　甘油　４％　Ｃ１，Ｃ７　α－Ｄ－乳糖　
４％　Ｃ２，Ｃ８　乳果糖　４％　Ｃ３，Ｃ９　麦芽糖　４％　Ｃ４，Ｃ１０　麦芽三糖　４％　Ｃ５，Ｃ１１　Ｄ－甘露醇　４％　Ｃ６，Ｃ１２　Ｄ－蜜二糖　４％　Ｄ１，Ｄ７　３－甲基－葡萄糖　
　４％　Ｄ２，Ｄ８　β－甲基－Ｄ－葡糖苷　４％　Ｄ３，Ｄ９　帕拉金糖　４％　Ｄ４，Ｄ１０　Ｄ－阿洛酮糖　４％　Ｄ５，Ｄ１１　Ｄ－棉子糖　４％　Ｄ６，Ｄ１２　Ｄ－核糖　４％　Ｅ１，Ｅ７　
　水杨甙　４％　Ｅ２，Ｅ８　Ｄ－山梨糖醇　４％　Ｅ３，Ｅ９　蔗糖　４％　Ｅ４，Ｅ１０　Ｄ－塔格糖　４％　Ｅ５，Ｅ１１　Ｄ－海藻糖　４％　Ｅ６，Ｅ１２　松二糖　４％　Ｆ１，Ｆ７　木糖
醇　４％　Ｆ２，Ｆ８　丙酮酸甲基酯　４％　Ｆ３，Ｆ９　单甲基琥珀酸　４％　Ｆ４，Ｆ１０　醋酸　２％　Ｆ５，Ｆ１１　α－羟基丁酸钠　２％　Ｆ６，Ｆ１２　α－酮戊酸　２％　Ｇ１，Ｇ７　
Ｌ－乳酸　４％　Ｇ２，Ｇ８　Ｄ－丙氨酸　２％　Ｇ３，Ｇ９　Ｌ－丙氨酸　２％　Ｇ４，Ｇ１０　Ｌ－丙氨酰－甘氨酸　３％　Ｇ５，Ｇ１１　Ｌ－丝氨酸　３％　Ｇ６，Ｇ１２　腺苷　２％　Ｈ１，Ｈ
７　２’－脱氧腺苷　２％　Ｈ２，Ｈ８　肌苷　２％　Ｈ３，Ｈ９　胸腺嘧啶脱氧核苷　２％　Ｈ４，Ｈ１０　尿嘧啶核苷　２％　Ｈ５，Ｈ
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资讯24小时top10注射用氨曲南主要治疗敏感需氧革兰阴性菌所
健康咨询描述：
注射用氨曲南主要治疗敏感需氧革兰阴性菌所致的各种感染，这通俗的说法怎么说？能治疗感冒发烧吗？
感谢医生为我快速解答——该
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病情分析：氨曲南具有肾毒性、免疫原性弱以及青霉素类、头孢菌素类交叉过敏少等特点，因此可用于替代氨基糖苷类药物，治疗肾功能损害患者的需氧革兰阴性菌感染；并可在密切观察情况下用于对青霉素、头孢菌素过敏的患者。
指导意见：感冒主要是病毒感染，使用氨曲南是无效的，需要使用抗病毒的药物，如果感冒合并细菌感染，是用头孢和青霉素类过敏或耐药时，才考虑使用。医生询问：
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需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
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3秒自动关闭窗口吴彩虹& (黑龙江省呼玛县人民医院& 165100)
【中图分类号】R446& 【文献标识码】A【文章编号】 (0-02
【摘要】革兰阳性无芽胞厌氧杆菌大致包括9个菌属(包括新增3个菌属)，本文仅介绍5个菌属。A.放线菌属放线菌属(Actinomyces)细菌是革兰阳性无芽胞厌氧丝状杆菌，据1986年第9版《伯杰系统细菌学手册)第二卷所记载，包括12个菌种。
【关键词】革兰阳性无芽胞厌氧杆菌&& 检测
&&&&&&& (一)生态
&&&&&&& 放线菌是人口腔、肠道、女性生殖道正常菌群。不少菌种也是动物口腔或肠道正常菌群，如牛型放线菌(A.bovis)、粘性放线菌(A.viscosus)、住齿放线菌(A.denticolens)，以及豪威放线菌(A.howellii)、受损大麦放线菌(A.hordeovulneris)和猪放线菌(A.suis)，而个别菌种如腐生放线菌(A.humiferus)是肥沃土壤中常住菌之一。
&&&&&&& (二)生物学性状
&&&&&&& 1.形态& 放线菌属细菌形态多样，有直，有弯，不分枝或分枝，多半为革兰阳性丝状杆菌，菌丝可断裂成细长杆菌，形态似假白喉杆菌。菌体呈棒状，染色不均，排列成X、Y、V、栅状或短链。无荚膜，无鞭毛，有些菌种所产生菌丝可缠绕成团，形成小菌落，可在病人的脓汁中出现，呈黄色，又称为硫黄颗粒，是放线菌感染的重要特征之一。
&&&&&&& 2.培养& 除了衣氏放线菌、溶牙放线菌、梅氏放线菌为微需氧菌外，其余多为兼性厌氧菌，故在含5％～10％CO2时生长最好，但生长仍很缓慢，需5～7 d才出现菌落。直径0.5～3mm的典型菌落为粗糙型、灰白色，有些菌如溶牙放线菌形成红色菌落，粘性放线菌形成粘性菌落，不易挑起和乳化。但约有1/3菌落呈光滑型，直径1mm，圆，发亮，微凸，边缘整齐，生长快，2～3 d就出现菌落，也易于挑起和乳化。在液体培养基中沉于管底像一团绒线，这是菌丝沉积物。
&&&&&&& 3.特征多数菌种能发酵葡萄糖等，其发酵糖的主要代谢产物是琥珀酸(S)，或还有少量的乳酸(L)和醋酸(A)，但绝不产生丙酸。液化明胶产生吲哚，触酶试验多为阴性，但硝酸盐还原多数菌种为阳性。生长最适pH值为6.5～7.0。
&&&&&&& (三)致病性和免疫性
&&&&&&& 1.对牙面的粘附放线菌中粘性放线菌、衣氏放线菌和溶牙放线菌对牙面有很高的亲和力，它们以高数量粘附在牙面上。牙面获得膜中一些成分，如富脯蛋白和富酪蛋白明显地促进了它们的粘附。此外，它们对组成牙本质和牙骨基质的主要成分胶原也有很强的亲和力，这也促进了它们在根面的粘附。
&&&&&&& 放线茵不仅作为粘附支架，形成谷穗状结构，加速了菌斑形成，且随菌斑的成熟，粘性放线菌的量不断增加。其对粘附起主要作用的结构是菌毛，其中菌毛Ⅱ还介导了与变链球菌、血链球菌、牙龈普氏菌及具核梭形杆菌等细菌的集聚和对上皮细胞的粘附，并且菌毛Ⅱ也能促进粘性放线菌对3一HA的粘附。
&&&&&&& 2.放线菌还产生涎酶(又称神经氨酸酶)也可促进其与其他细菌、上皮细胞及红细胞的粘附。这是因为此酶可使细胞膜上的糖蛋白及糖脂成分发生改变，暴露出半乳糖及相关成分，而半乳糖是放线菌菌毛Ⅱ及其他一些细菌的受体，从而促进了细菌的粘附。近年对放线菌中编码涎酶的基因和序列进行了较深入的研究，已经克隆出此酶的基因(nanH)。它由2703个bp组成，编码产物901个氨基酸，相对分子质量为92 871，等电点为5.72，G+C mol％为71％。
&&&&&&& 3.口腔放线菌与龋病密切相关。口腔放线菌可发酵多种碳水化合物产酸，使菌斑pH值降至5.0以下，且对牙面特别是根面有很高的亲和力。一些放线菌还能合成细胞外多糖和细胞内多糖，这些特性决定了它在龋病中的作用，虽然根部龋的主要致病菌是变链球菌，但是放线菌在致龋过程中的协同作用不能忽视，尤其是放线菌与根面龋的发生关系更密切。除了与口腔致龋有关外，放线菌还能引起面颈部放线菌病。
&&&&&&& (四)微生物学检验
&&&&&&& 本菌属尽管包括12个菌种，但是住齿放线菌(A.denticolens)和豪威放线菌(A.howellii)多分离自牛口腔牙菌斑中，并且猪放线菌(A.suis)和腐生放线菌(A.humiferus)两菌的分类学位置尚未确定。另有3个新增放线菌即杰格放线菌(A.georgiae)、杰锐斯放线菌(A.gerencseriae)和白纳德放线菌(A.bernardiae)。
&&&&&&& B.丙酸杆菌属
&&&&&&& 丙酸杆菌属(Propionbacterium)细菌是革兰阳性无芽胞厌氧杆菌，据1986年第9版《伯杰系统细菌学手册》第二卷所记载，包括两大群共8个菌种。
&&&&&&& 致病性与免疫性
&&&&&&& 丙酸杆菌尤其是疮疱丙酸杆菌主要栖居在人的毛囊、汗腺、皮脂腺管中，产生酶可使皮脂中的类脂形成长链脂肪酸，刺激局部产生炎症并引起皮脂管梗阻形成粉刺或毛囊炎。此外，因为它们正常就栖居皮肤上，所以采血、腰椎穿刺或骨髓穿刺培养时本菌也是最常见的污染菌。丙酸杆菌细胞壁成分中缺少分枝菌酸和阿拉伯半乳聚糖，胞壁脂质中脂肪酸是C15异构酸，具免疫原性，胞壁成分能刺激机体产生相应免疫球蛋白如IgM或IgG等。
微生物学检查
&&&&&&& 根据疾病种类不同采集血液、脓液、伤口或软组织溃疡灶分泌物等标本送检，经厌氧培养分离分纯后可进一步进行菌种鉴定。
&&&&&&& C.优杆菌属
&&&&&&& 优杆菌属细菌(Eubacterium)，有些资料译成真杆菌，其实&Eu&是良好、有益之意，不是真伪之义，故译成优杆菌属更为准确。
&&&&&&& 致病性与免疫性
&&&&&&& 优杆菌属菌种加上新增的两个菌种共为36个菌种，其中口腔中可见的有7个菌种，即不解乳优杆菌、砂优杆菌、短优杆菌、缠结优杆菌、胆怯优杆菌、迟缓优杆菌、粘液优杆菌，它们专性厌氧程度高，不少菌株只能在预还原培养基上生长，所有厌氧菌中因为此菌属培养不易，因此它是目前对其致病性、分类学、免疫性研究最落伍的一个菌属。本文只能综合些零星报告供参考。孔氏优杆菌有周毛，能运动，这是其致病原理之一；粘液优杆菌其细胞壁含有肽聚糖，是革兰阳性菌细胞壁的主要成分；有报告36％～50％Crohn病的病人血清含有抗扭曲优杆菌的抗体，可能是Crohn病的病人易于招致优杆菌感染之故。近年发现宫内避孕器常引起缠结优杆菌感染。似乎优杆菌感染与其胞壁肽聚糖(peptidodycan)及表面多糖有关，它们可以刺激吞噬细胞并产生相应的细胞因子，与宿主炎症反应有关系。
&&&&&&& 微生物学检验
&&&&&&& 在《伯杰细菌鉴定手册》(1974)第八版中，优杆菌属只有28个种，到1986年《伯杰系统细菌学手册》第九版内，本属已增加到34个种，近年又有两个新增菌种共36个菌种。标本经分离分纯培养后可进一步鉴定到种。
&&&&&&& D.乳酸杆菌属
&&&&&&& 乳酸杆菌属(Lzwtobacillus)细菌因能发酵糖类产生大量乳酸而命名，属于革兰染色阳性无芽胞厌氧杆菌(有的种为兼性厌氧或微需氧菌)。
&&&&&&& (一)生态
&&&&&&& 致病性与免疫性
&&&&&&& 乳酸杆菌普遍被认为是生理性细菌，少数种为条件致病菌，这些种主要包括干酪乳杆菌鼠李糖亚种、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、詹氏乳杆菌、罕见唾液乳杆菌和加氏乳杆菌。它们致病的主要条件是离开原生活环境（如肠道、口腔或阴道），进入血或淋巴结甚至一些脏器中，引起感染性疾病，而在原生活环境一般认为它们是不致病的。因此对于乳酸杆菌致病性和免疫性等方面研究尚待深入地进行。
&&&&&&& 微生物学检验
&&&&&&& 标本采集后可使用MRS培养基分离培养、分纯，然后进一步鉴定属种。1986年《伯杰系统细菌手册》第二卷中本属共44种，连同亚种共51种，近年新增6个菌种，故本属共50个菌种，连同亚种共57种。
&&&&&&& E．双岐杆菌属
&&&&&&& 人和动物体内主要生理性细菌之一是双歧杆菌属，1986年出版的《伯杰系统细菌学手册》第二卷中本属包括24个菌种，近年新增7个菌种，现共有31个菌种。
&&&&&&& 致病性与免疫性
&&&&&&& 双歧杆菌属于主要的生理性细菌，它基本上对人畜不致闰，个别可以为条件致病菌。它还是形成生物屏障、构成机体抵抗力最主要的正常菌群之一，是人畜肠道常住菌（原籍菌），参与宿主营养、免疫等重要生理作用，具有抗肿瘤、抗感染、抗衰老等生态作用，因此它们是生态制剂、保健食品等的主要添加菌类。
&&&&&&& 微生物学检验
&&&&&&& 本菌属据1986年《伯杰系统细菌鉴定手册》应包括24个种，近年又新增7个菌种共31种。
&&&&&&& 革兰染色阳性无芽胞厌氧杆菌，还有隐秘杆菌属、阿托波菌属、动弯杆菌属、假瘤胃杆菌属等菌属，本书限于篇幅就不一一介绍了。
参 考 文 献
[1]卢青龙，其布热，王振辉，等. 临床分离葡萄球菌耐药性和用药对策［J］. 中国抗生素杂志，2.
[2]俞树荣.微生物学和微生物学检测.北京：人民卫生出版社，5.
[3]周贵民.厌氧菌血培养是值得重视的问题.中华医学检验杂志，9-980.
[4]叶应妩.全国临床检验操作规程.江苏：东南大学出版社，1.
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