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微生物的染色技术及显微镜观察
（西域百科）一、细菌的简单染色法 & 1 目的 & 1.1 学习微生物涂片、染色的基本技术。 & 1.2 掌握细菌的简单染色法。 & 1.3 初步认识细菌的形态特征，巩固学习油镜的使用方法和无菌操作技术。 & 2 原理 & 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。& 常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。
& 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 & 染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 & 3 材料 & 3.1& 菌种 & 枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物、面包酵母琼脂斜面培养物。& 3．2& 染色剂 & 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液。 & 3.3& 仪器或其他用具 & 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，玻片搁架、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)，擦镜纸，生理盐水或蒸馏水等。 & 4 流程 & 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检。 & 5 步骤 & 5.1& 涂片 & 取两块洁净无油的载玻片，在无菌的条件下各滴一小滴生理盐水(或蒸溜水)于玻片中央，用接种环以无菌操作，分别从枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌和大肠杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。若用菌悬液(或液体培养物)涂片，可用接种环挑取2～3环直接涂于载玻片上。注意滴生理盐水（蒸馏水）和取菌时不宜过多且涂抹要均匀，不宜过厚。
& 5.2& 干燥 & 室温自然干燥。也可以将涂面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥。但切勿离火焰太近，因温度太高会破坏菌体形态。& 5.3& 固定 & 如用加热干燥，固定与干燥合为一步，方法同干燥。& 涂片、干燥和热固定。& 5.4& 染色 & 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液1～2滴于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。吕氏碱性美蓝染色1～2min，石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)染色约1min 。 & 5.5& 水洗 & 倾去染液，用自来水从载玻片一端轻轻冲洗，直至从涂片上流下的水无色为止。水洗时，不要水流直接冲洗涂面。水流不宜过急、过大，以免涂片薄膜脱落。 & 5.6& 干燥 & 甩去玻片上的水珠自然干燥、电吹风吹干或用吸水纸吸干均可以（注意勿擦去菌体）。 & 5.7& 镜检 & 涂片干后镜检。涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。 & 6 结果 & 绘制单染色后观察到的大肠杆菌和藤黄微球菌的形态图。 & 二、革兰氏染色法 & 1& 目的 & 1.1 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。& 1.2 学习掌握革兰氏染色技术，巩固学习光学显微镜油镜的使用方法。
2& 原理 & 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain & Gram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。& 革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。
& 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
& 3& 材料 & 3.1& 菌种 & 大肠杆菌（Escherichia& coli）约24h营养琼脂斜面菌种一支，枯草芽孢杆菌（Bacillus & subtilis）约16h牛肉膏琼脂斜面菌种一支。 & 3.2& 染色剂 & 结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液。& 3.3& 仪器或其他用具 & 显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、酒精灯、蒸馏水、香柏油、二甲苯。 & 4& 流程 & 涂片→干燥→固定→染色（初染→媒染→脱色→复染）→镜检。 & 5& 步骤 & 5.1& 涂片 & 5.1.1& 常规涂片法 & 取一洁净的载玻片，用特种笔在载玻片的左右两侧标上菌号，并在两端各滴一小滴蒸馏水，以无菌接种环分别挑取少量菌体涂片，干燥、固定。玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。
& 5.2& 初染 & 滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于两个玻片的涂面上，染色1～2min ，倾去染色液，细水冲洗至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。 & 5.3& 媒染& 用卢戈氏碘液媒染约l min ，水洗。 & 5.4& 脱色 & 用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，终止脱色，将载玻片上水甩净。 & 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。脱色时间一般约20～30s。 & 5.5& 复染 & 在涂片上滴加番红液复染约2～3min ，水洗，然后用吸水纸吸干。在染色的过程中，不可使染液干涸。 & 5.6& 镜检 & 干燥后，用油镜观察。判断两种菌体染色反应性。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌（G+），被染成红色的为革兰氏阴性菌（G-）。& 5.7& 实验结束后处理 & 清洁显微镜。先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯。染色玻片用洗衣粉水煮沸、清洗，凉干后备用。
& 三、实验结果 & 1 根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。 & 2列表简述两株细菌的染色结果(菌的形状、颜色和革兰氏染色反应)。 & 四、思考题& 1 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ & 2 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? & 3 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? & 4 不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？ & 5 你认为制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节? & 6 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察? & 7 如果涂片未经热固定，将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又会怎样呢?
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西域系西域集团在中国香港注册的投资公司西域科技（中国）有限公司联合相关资本于2004年5月在中国上海设立， 依托西域集团成熟的供应链体系、专业背景及资本后盾，向中国地区客户提供数万种MRO工业品，仪器仪表产品， 并发展上述部分产品租赁业务，大部分财富全球500强及中国本土知名企业已成为西域重要客户。
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中文名称： 香柏油&其他中文名称： 柏木油；桧油；洋杉木油；金松油；雪松醇；雪松油；油镜油&英文名称： Cedarwood oil&香柏油其他英文名称： Cedar Oil&产品规格： FMP&包　　装： 25毫升&香柏油CAS号：级别：FMP折光率(n20D)：1.514～1.516酸值：≤60mgKOH/g冷却试验：合格二甲苯溶解试验：合格性状：无色或微黄色略有粘性液体。系蒸馏柏木而得的芳香油，其中含有油精和柏木脑等成分。对光敏感。溶于10～20份90％乙醇，不溶于水。相对密度(d～0.950。比旋光度-25～-46°。闪点110℃。有刺激性。商品也有以倍半萜烯、松香等配合成的人造香柏油，呈浅黄色挥发性液体用途：生化研究。显微镜油。香料。驱虫剂保存：RT，避光β-内啡肽(βEP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17222 CLIA Kit for Amphiregulin (AREG) 96T Chicken (Gallus)β2-微球蛋白(β2M)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17223 CLIA Kit for Amphiregulin (AREG) 96T S Porcine (Pig)β-1,4-半乳糖转移酶1(β4GALT1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17224 CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1) 96T Homo sapiens (Human)α2-巨球蛋白(α2M)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17225 CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1) 96T Mus musculus (Mouse)α1-微球蛋白(α1M)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17226 CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1) 96T Rattus norvegicus (Rat)α1-抗胰蛋白酶(α1AT)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17227 CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) 96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)P选择素(SELP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17228 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Homo sapiens (Human)P选择素(SELP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17229 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Mus musculus (Mouse)P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17230 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Rattus norvegicus (Rat)P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17231 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17232 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T B Bovine (Cattle)P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17233 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T C Caprine (Goat)P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17234 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Chicken (Gallus)P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17235 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T S Porcine (Pig)POTE锚蛋白域家族成员G(POTEG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17236 CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) 96T Homo sapiens (Human)香柏油Pim-3原癌基因(PIM3)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17237 CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) 96T Mus musculus (Mouse)Pim-2原癌基因(PIM2)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17238 CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) 96T S Porcine (Pig)Pim-1原癌基因(PIM1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) M17239 CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) 96T Rattus norvegicus (Rat)香柏油用途：白色无臭结晶性粉末。有特殊甜味，甜度约为蔗糖的70%。为甘氨酸的1.6倍，属最甜的氨基酸。 在水产动物（虾、蟹）中含量较多，并形成特征性呈味成分。200℃以上开始升华，熔点297℃（分解）。对热及化学性能稳定。易溶于水（17%，25℃），微溶于乙醇（80%冷酒精中0.2%），不溶于乙醚。5%水溶液的ph值5.5~7.0。用途：能改善甜感，增强甜感醇厚度，改进酸感调味效果，能提高腌制品和醋渍品风味，缓和涩味、苦味、辛辣味，防止啤酒老化。能抑制大肠杆菌、革式阳性菌、乳酸菌及好气菌等生长发育。另有异构体L-β-丙氨酸，未见有存在与蛋白质中的报告，含于苹果汁等中，甜度比α型为小。溶解香柏油的一种替代混合剂--《上海医学检验杂志》1996年03期
溶解香柏油的一种替代混合剂
【摘要】：溶解香柏油的一种替代混合剂安徽芜湖弋矶山医院（２４１００１）汪丽儿用无水乙醇和乙醚按２：１体积比混和替代二甲苯，用于使用香柏油后油镜的擦拭，不留香柏油痕迹，镜下清晰不模糊。另外，用此比例混合剂还可用于血膜脱油，脱油后标本复染不影响结果。（范基农摘）溶...
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R446【正文快照】：
溶解香柏油的一种替代混合剂安徽芜湖弋矶山医院（２４１００１）汪丽儿用无水乙醇和乙醚按２：１体积比混和替代二甲苯，用于使用香柏油后油镜的擦拭，不留香柏油痕迹，镜下清晰不模糊。另外，用此比例混合剂还可用于血膜脱油，脱油后标本复染不影响结果。（范基农摘）溶解
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&&& &为了解决用户可能碰到关于"香柏油有毒吗？"相关的问题，突袭网经过收集整理为用户提供相关的解决办法，请注意，解决办法仅供参考，不代表本网同意其意见,如有任何问题请与本网联系。"香柏油有毒吗？"相关的详细问题如下:RT,我想知道:香柏油有毒吗？===========突袭网收集的解决方案如下===========
解决方案1：松油。无色或微黄略有粘性液体，其中含有油精和柏木脑等成伤，该品是调配香皂、油镜油，用作香料和显微镜油，系蒸馏柏木得到的芳香油香柏油别名，尤其在檀香型精中用量较大：金松油、化妆品香精的重要香料、洋松木油解决方案2：应该没有，擦镜的二甲苯才有解决方案3：这个有毒，我在学校学过
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