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大量菌株和质粒提供交换
你在还在为科研中无法及时获得质粒和菌株资源而发愁吗？还在为高昂的质粒和菌株费用而苦恼吗？这里有大量质粒和菌株资源可以提供与你交换，且有多种交换方式，总会有一款适合你吧。需要的朋友请联系我的扣扣号（）。验证信息：菌株交换。下面是本人的部分资源，供大家查阅参考。
原核表达菌株：M15、JM109(DE3)、BL21、BL21(DE3)、BL21(DE3)plysS、Rosetta(DE3)、Rosetta(DE3) pLysS、Rosetta2 (DE3)、Rosetta2 (DE3) pLysS、BL21(DE3)gold、BL21(DE3)star、Origami(DE3)、Origami2(DE3)、C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)、C43(DE3) pLysS、BL21(AI)、Rosetta-gami2(DE3)pLysS、Rosetta-gamiB(DE3)pLysS、ArcticExpress™ (DE3)RP、BL21-CodonPlus (DE3)-RIL、BL21-CodonPlus (DE3)-RP、BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL
克隆菌株：DH5a、JM109、TOP10、DH10B、XL1-bule、XL10-gold、XL2-Blue MRF’、SURE、Stbl3、DB 3.1、Mach1™ T1 Phage-Resistant E. Coli、DH5α™ T1 Phage-Resistant E. coli 、OmniMAX2 T1 Phage-Resistant Cells、JM110
毕赤酵母：GS115、KM71、SMD1163、SMD1168、X 33、INVSc1、Pichiapink-1、Pichiapink-4
枯草芽孢杆菌菌株:B.S.168、WB600、WB800、1A75
大肠杆菌：W3110、BW25113
原核表达质粒：PBV220、PET 15b、PET 17b、PET 21b、PET 22b、PET 24b、PET 26b、PET 28a、PET 28b、PET 29a、PET 30a、PET 32a、pET 42b、PGEX 4T-1、PGEX 2T、PGEX 4T-3、pQE30、pGEX-6P-1、pCold I、pCold TF、pET-GST、pET-DsbA、PLLP-OmpA
原核共表达质粒：pAYCYDuet-1、pETDuet-1、pRSFDuet-1、pCDFDuet-1、pCOLADuet-1
Gateway质粒：pDONR221、pENTR 1A、pENTR 3C、pDEST 10、pDEST 17、pDEST 20 N-thromin
荧光蛋白报告载体：pEGFP-N1、pEGFP-N2 、pEGFP-C1、pEGFP-C2
真核表达：pCDNA3.1(+)、pCDNA3.1(-)
克隆质粒：PUC57、PBR322、pBluescript SK(+)、PUC 18、PUC 19、PUC 119、pBluescript II KS(+)、PGEM-7Zf(+)、pSP64、pSP73
酵母表达质粒：pPIC9K、pPIC9、pPIC3.5K、pPICZA、pPICZαA、pGAPZαA、pYES2、pYADE4
枯草芽孢杆菌质粒：pMA5、pMA5 MCS、pHT304、pHCMC05（ECE190）、pMutin4（ECE139）、pSG1154（ECE153）、pHT01、pHT43、pAX01-comK、pAX01
Takara分子伴侣：pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16
大肠杆菌基因敲除：pKD3、pKD4、pKD13、pKD46、PCP20
酵母基因敲除：PUG6、pSH47、pSH63
您好，我查找了QQ，没有找到相应的QQ，有个QQ群，不知道是不是。谢谢您！
想要ｐＣＯＬＤ的载体。 联系方式请再留一下，我也需要某些质粒交换。 捣鼓质粒，到处收集，转手贩卖 你好，想交换，但您的qq号不对，加不上，谢谢 质粒要几个经典的就行了，大多数还是要靠自己设计。 qq加不上。。。。 : Originally posted by baidu1024 at
您好，我查找了QQ，没有找到相应的QQ，有个QQ群，不知道是不是。谢谢您！
想要ｐＣＯＬＤ的载体。 我有pCOLD. QQ找不到啊亲，我的QQ，我需要BS168和pHT01&& 查看话题
感受态制备出现的问题……急啊！有没有人指点一下啊！
我从划线培养的平板中挑取单菌落接种到5mL LB（含氯霉素和盐酸四环素）的培养液中，（顺便说一句，我的菌是Rosetta-gami2（DE3）plysS，本身带有氯霉素、四环素和链霉素抗性，其中氯霉素和其编码稀有氨基酸的质粒有关，所以必须要加的）37℃200rpm培养过夜（12h），取1mL加入100mL LB（含氯霉素和盐酸四环素）的培养液中，37℃ 250rpm振荡培养3h（OD600为0.531），然后冰上冷却20min，取两个预冷的50mL离心管，每管装25mL菌液，4000rpm4℃离心10min，去上清，每管加5mL预冷的0.1M CaCl2悬浮细胞（这里问题比较大，我是用枪头吸打的，后来看到有说最好不要吸打），放入离心机的时候有有一管底部有菌体沉淀，我怀疑是我没有悬浮充分，然后4000rpm4℃离心10min，去上清，每管加1mL预冷的0.1M CaCl2悬浮细胞，冰上放置片刻，最后100微升分装后放入4℃冰箱。
现在要做转化了，可是去拿感受态的时候发现菌怎么都沉在底下啊？在4℃冰箱里放了差不多2个多小时，这是怎么回事啊？因为我是第一次做感受态，不知道是哪里出了问题，是我悬浮菌体的时候操作不当，把菌都弄死了吗？郁闷……有没有高人指点我一下啊！
: Originally posted by friya0910 at
我从划线培养的平板中挑取单菌落接种到5mL LB（含氯霉素和盐酸四环素）的培养液中，（顺便说一句，我的菌是Rosetta-gami2（DE3）plysS，本身带有氯霉素、四环素和链霉素抗性，其中氯霉素和其编码稀有氨基酸的质粒 ... 补充一下，我的CaCl2是买的国产的（鼎国的），称取0.544g溶解在50mLddH2O中，然后0.22微米过滤灭菌后分装，-20℃保存。会不会是氯化钙的问题呢？好纠结啊！大家说说你们制好的感受态会出现菌体沉到底下的情况吗？我感觉应该是悬浮在溶液中才对啊！不过我打算接着做转化试试，但愿能有结果！ 做好感受态，如果有液氮，直接冻存；如果木有，负70冻存。。。
如果感受态出现沉淀，原因很多，不过你转化的时候可以吹吸均匀菌体，然后转。。。个人认为影响不大，如果不然菌的话，那就是感受态效率的问题了，但是低效率做一个转化也是没有什么问题的。。。
祝好运！ 感受态一般都是-80℃保存，没听过4℃保存的。另外，在-80℃保存的时候你的氯化钙里面要放DMSO或者甘油，以防把细胞冻死 : Originally posted by 空谷幽风 at
感受态一般都是-80℃保存，没听过4℃保存的。另外，在-80℃保存的时候你的氯化钙里面要放DMSO或者甘油，以防把细胞冻死 我是看网上说感受态做好以后在4℃放置12-24h会提高转化效率，而且如果立马用的话可以放4℃冰箱的！ : Originally posted by 天使托 at
做好感受态，如果有液氮，直接冻存；如果木有，负70冻存。。。
如果感受态出现沉淀，原因很多，不过你转化的时候可以吹吸均匀菌体，然后转。。。个人认为影响不大，如果不然菌的话，那就是感受态效率的问题了，但 ... 我看网上说感受态在4℃放置12-24h可以提高转化效率的，那感受态沉淀一般都和什么有关啊？不是只有死菌才会沉淀下来的么？ : Originally posted by friya0910 at
我是看网上说感受态做好以后在4℃放置12-24h会提高转化效率，而且如果立马用的话可以放4℃冰箱的！ 不知道你看的这个信息是不是正确，即使正确估计转化效率也不会提高太多，否则那些制感受态的公司不会都要求把感受态放-80℃保存的 : Originally posted by 空谷幽风 at
不知道你看的这个信息是不是正确，即使正确估计转化效率也不会提高太多，否则那些制感受态的公司不会都要求把感受态放-80℃保存的 网上看到的，说先在4度放段时间，然后再放到-80。如果做完感受态后立即加甘油-80冻存的话应该就不会出现感受态沉底的现象了哦，我看看明天的转化情况，不行明天再制一批。不知道你们制感受态用的CaCl2都是进口的还是国产的啊？还有CaCl2有颗粒状和粉末状的，你们一般都用的啥样的啊？ : Originally posted by friya0910 at
我看网上说感受态在4℃放置12-24h可以提高转化效率的，那感受态沉淀一般都和什么有关啊？不是只有死菌才会沉淀下来的么？ 你是不是忘记加甘油了啊？？？ : Originally posted by yesucao at
你是不是忘记加甘油了啊？？？ 我放4度应该不用加甘油吧，放-80才要加吧！ : Originally posted by friya0910 at
我放4度应该不用加甘油吧，放-80才要加吧！ 如果你立即实验需要的话可以不加，暂时插在冰上就可以了。本人之前做过两次DH5a的感受态，没有你想象中那么难，就是有点费时，转化效率还不错，在你分装之后其他不用的感受态建议还是立即放入-80度冰箱比较好 有几个情况LZ没说清楚：
1.克隆的新鲜程度，从-70℃（分子克隆：p87）新拿出来的甘油管，涂平板选新鲜平板的单克隆，即刚涂布生长过夜的平板；
2.菌体的OD600 值，JM109 或BL21，OD值为0.35，DH5α为0.4，要尽量保证OD
值不要过高，更不能超过0.6；
3.低温处理的时间，做完后冰上保存12 到24h后加甘油分装，并保存于－80℃；
4.试剂和用品，非如果有可能，所有的用品（离心管、摇瓶等等）用新的，如果
使用旧的，要确保干净（分子克隆p87） : Originally posted by gwbk at
有几个情况LZ没说清楚：
1.克隆的新鲜程度，从-70℃（分子克隆：p87）新拿出来的甘油管，涂平板选新鲜平板的单克隆，即刚涂布生长过夜的平板；
2.菌体的OD600 值，JM109 或BL21，OD值为0.35，DH5α为0.4，要尽量 ... 您说的平板什么的全部都是新鲜的，至于OD值，我也不清楚我的菌多少合适，就取了0.5吧，至于用到的离心管都是新的，而且在用之前我都已经高压灭菌过了，我刚才看了一下剩下的菌（因为我摇100mL，除去测OD的一些，制感受态只用了50mL），也没见沉底啊？可为什么我的感受态会沉底呢？是不是我的氯化钙不好啊！不解……不知道有没有人遇到过同样的情况。 我上次做的感受态也沉的，我的菌体太浓，放不久就会分层。 做感受态关键是你前面培养菌液的OD值 怎么样 太大了太小了 都会影响转化效率
氯化钙不会有什么大问题 配所有试剂的水和用过的瓶子都应该用超纯水配或洗过
操作要轻柔 就算你用枪吹打的 也不要对着菌体沉淀吸打 做好后 应该液氮速冻放-80
反正4°肯定不好 应该也是菌体沉淀的原因 1。楼主之后转化结果如何？
2。4C不用加甘油
3。沉淀正常，别人是和你制备不一样，或者观察不仔细，你这样做应该沉淀的。
4。OD值会影响转化效率，你做的OD值绝对不是问题。
5。虽然说做实验要注意细节，但你做的这些情况同样不会有大问题。吹打之类的我都做过对照，除非你的实验是测转化效率要求精度高，否则对于转化来说，不成问题 : Originally posted by friya0910 at
我看网上说感受态在4℃放置12-24h可以提高转化效率的，那感受态沉淀一般都和什么有关啊？不是只有死菌才会沉淀下来的么？ 那么我问你，在4度放置可以提高转化效率的原理何在？
感受态沉淀其实有时候会这样，肯定跟你制作感受态的过程有很大关系的！
不是只有死菌才会沉淀的，你如果做过转化，就会发现，你每次涂布完剩下的菌液放在4度冰箱过上一段时间也会沉淀下来的，沉淀是根据密度而定的。。。并不是死菌就沉淀下来的。。。 : Originally posted by longage.gene at
1。楼主之后转化结果如何？
2。4C不用加甘油
3。沉淀正常，别人是和你制备不一样，或者观察不仔细，你这样做应该沉淀的。
4。OD值会影响转化效率，你做的OD值绝对不是问题。
5。虽然说做实验要注意细节，但你 ... 昨天转的两个质粒，都长了，带有目的片段的长的还行，转pET32a质粒的长的很少，不过我就挑单菌落诱导蛋白表达，也够用了！因为是第一次做，所以出现问题比较担心，现在看来担心是多余的！ : Originally posted by gwbk at
我上次做的感受态也沉的，我的菌体太浓，放不久就会分层。 恩，昨天做的转化还可以，虽然效率不是特别不高，但也够我用的了！ : Originally posted by 天使托 at
那么我问你，在4度放置可以提高转化效率的原理何在？
感受态沉淀其实有时候会这样，肯定跟你制作感受态的过程有很大关系的！
不是只有死菌才会沉淀的，你如果做过转化，就会发现，你每次涂布完剩下的菌液放在4 ... 我也不清楚什么原理，就看网上的论坛里有人这么说来着。因为我是第一次制作感受态，所以出现问题就比较紧张，现在看来这个问题不是大问题，估计改进一下操作就能解决，而且对最后实验结果的影响也不是特别大。Rosetta-gami 2(DE3)感受态细胞抗性、基因型、价格等基本信息_生物风菌株_乐收 >
> 详细信息Rosetta-gami 2(DE3)感受态细胞抗性、基因型、价格等基本信息_生物风菌株 发布于： 09:22:26出品公司:
Novagen/ Millipore
感受态细胞名称:
Rosetta-gami 2(DE3), Rosetta-gami2(DE3), Rosetta gami 2 DE3, Rosetta-gami2 DE3
菌株类型:
li
产品目录号:
351-4
培养基:
LB培养基
生长条件:
有氧
基因型:
Rosetta-gami2(DE3)感受态细胞菌株基因型
抗性:
氯霉素，链霉素，四环素
质粒转化条件:
42 ℃热激
应用:
蛋白表达
诱导方法:
IPTG
菌株特点:
Rosetta-gami 2系列菌株是集合了Rosetta 2系列菌株和Origami 2系列菌株的有点，增强了细胞内二硫键的形成和含有在大肠杆菌中稀有密码子的真核细胞蛋白的表达能力。
Rosetta-gami 2(DE3)系列菌株是来源于Origami 2系列菌株。而Origami 2 系列菌株是卡那敏感的K-12细胞菌株，携带有TrxB和Gor基因突变提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。
本菌株含有pRARE2质粒，除了能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有 的AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六个稀有密码子的tRNA外，还提供了第七个稀有密码子CGG的tRNA。同时，pRARE2质粒具有氯霉素抗性。通过提供原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子，增加了真核细胞的在大肠杆菌中的蛋白表达水平。
Rosetta-gami 2(DE3)感受态细胞中的Gor基因突变使得菌株具有四环素抗性。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
亮氨酸生长缺陷型菌株。链接地址：生物风销售载体，基因，质粒，感受态细胞，酵母菌株，欢迎购买质粒，菌株，细胞等，并且提供载体构建，Western blot, 蛋白纯化等生物技术服务，代做各种生物实验.. 联系信息联系人：生物风电话：QQ：相关查询您的位置： &
重组蜘蛛丝蛋白MiSpNT结构域在不同pH环境下的Trp荧光光谱及圆二色谱分析&& 查看话题
Rosetta-gami（DE3）的生长时间
有没有人用过Rosetta-gami（DE3）啊？一般它的生长时间是多少啊？昨天晚上划线培养，到现在也有14h了，还没见长！因为这个菌本身含有三个抗性，培养基中就加了这三种抗生素，分别是卡那霉素，氯霉素和盐酸四环素。在制备这个菌的感受态时要不要添加抗生素啊？
我自己也做过几次感受态，也加了3种抗生素摇菌，菌生长倒是正常，可就是转不进去。有个师姐说只感受态摇菌不要加抗生素（但14个小时还不见长斑，还是有些不正常，是不是抗生素加多了），最后偶直接去公司买了，没再做。 : Originally posted by jingbing94 at
我自己也做过几次感受态，也加了3种抗生素摇菌，菌生长倒是正常，可就是转不进去。有个师姐说只感受态摇菌不要加抗生素（但14个小时还不见长斑，还是有些不正常，是不是抗生素加多了），最后偶直接去公司买了，没 ... 晕……买很贵的！ 不一定，有山寨版的，是国产的，叫Transetta :P : Originally posted by jingbing94 at
不一定，有山寨版的，是国产的，叫Transetta :P 问一下，Tresetta这个表达菌也是能表达稀有密码子的吗？它的抗性是什么啊？ 其实就是一个东西，:D，所以除了名字有点差别，其他都一样 : Originally posted by friya0910 at
有没有人用过Rosetta-gami（DE3）啊？一般它的生长时间是多少啊？昨天晚上划线培养，到现在也有14h了，还没见长！因为这个菌本身含有三个抗性，培养基中就加了这三种抗生素，分别是卡那霉素，氯霉素和盐酸四环素。 ... 原来我用的是Rosetta-gami2（DE3），这个菌不带卡那抗性的！悲催啊！