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N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的研究现状新
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检测尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶与尿微量白蛋白对糖尿病肾病早期诊断的意义
检测尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶与尿微量白蛋白对糖尿病肾病早期诊断的意义
山西医药杂志 2000年第5期第29卷 医学检验
作者：周永年
单位：周永年(山西省民医院 030012)
　　NAG(N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶)是体内广泛存在且较重要的一种溶酶体水解酶，主 要来源于肾近曲小管上皮细胞，以近曲小管含量最高，肾小球也有低活力分布。NAG活性的 测定对于多种肾脏疾患，如：肾移植排异反应，药物或其他疾病引起的继发性肾损害有重要 的临床意义。它可作为肾小管损伤的标志酶。尿微量白蛋白(mAlb)是一种带负电荷的小分子 蛋白，分子量为69 000，半径为3.6 nm，正常情况下仅有少量的mAlb被滤过，而95%的mAlb 又在近曲小管被重吸收，滤过的mAlb增加时，尿中mAlb也增加［1］。研究资料表明 ，糖尿病患者虽无糖尿病肾病的临床表现，但其肾功能已有某些异常改变，用敏感的方法测 定糖尿病性细小血管发生障碍是关键［2］。本文通过对190例及糖尿病患者尿 液NAG、mAlb及血液中血糖(GLUC)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的检测，对尿NAG及mAlb对糖尿 病肾病的早期诊断作一探讨。
　　1　材料与方法
　　1.1　样品收集：收集50例随机尿标本并同时抽空腹血2.5 mL于干燥管，取自门诊健 康体检者，于早8：00～10：00时(排除有肾脏疾病和其他能引起肾功能损害疾病的患者)， 年龄在22～67岁之间。收集经一系列糖尿病检查被确诊为糖尿病患者的随机尿标本并同时抽 取2.5 mL空腹血于干燥试管140例(其中糖尿病早期86例，已发展为糖尿病肾病的54例，来 源于本院住院病)。在2 h内检测完毕。
　　1.2　仪器：日本产Olympus AU600型全自动生化分析仪(检测尿NAG、血GLUC、BUN、Cr)。 美国BECKMAN公司ARRAY360特种蛋白及药物分析仪(检测尿mAlb)。
　　1.3　试剂：尿NAG试剂盒由福建省中外合资蓝波生物技术公司提供。尿mAlb试剂由BECKMAN 公司提供。血GLUC、BUN、Cr试剂盒由Olympus公司提供。
　　1.4　检测方法：尿mAlb用免疫散射比浊法。尿NAG及血BUN用动态连续监测法。GLUC用氧化 酶试剂，终点法。Cr用苦味酸试剂，两点法测定。
　　2　结　　果
　　分别比较组与糖尿病早期组，组与糖尿病肾病组。糖尿病早期血糖浓度＜11.1 mm ol/L者，尿中NAG、mAlb与组比较进行t检验，P＜0.05， 有显著性差异，而BUN、Cr与组比较，P＞0.05，差异无 显著性。已发展为糖尿病肾病组和组NAG、mAlb比较，P＜0.01，差异有极显著性，血BUN、Cr与组比较P＜0.01，差异有显著性。
表1　糖尿病患者与对照比较(±s)
GLUCmmol/L
　　mmol/L
　　μm ol/L
14.6±10.2
73.6± 32.7
糖尿病早期组
28.6±15.3
30.4±21.6
74.2±32.9
糖尿病肾病组
62.3±35.4
168.3±121.2
15.3±11. 4
232.6±172.3
　　3　讨　　论　　随着糖尿病患者生存期的延长，慢性合并症已成为死亡的主要原因，肾脏是糖尿病损害的靶 器官，肾脏的病变也是最常见和最严重的糖尿病慢性并发症之一，糖尿病肾病的主要病理变 化包括肾小球和肾小管的肥大肾小球和肾小管基底膜增厚，肾小球系膜内细胞外基质堆积以 及肾小管间质的硬化［3］。据报道，糖尿病时肾小管的损伤先于肾小球的损伤 ［4］。通过以上检测可以看出，在我们传统检测肾功能的指标无明显变化时，尿NAG及mA lb已有升高，提示肾脏已经受到损害，主要是肾小管的早期损害，而在疾病的发展过程中， 尿NAG及mAlb也随之升高，说明尿NAG与mAlb可作为糖尿病肾病早期诊断的一个灵敏指标。
　　作者简介：周永年，男，1968年9月生，技师，山西省民医院，030012
　　1.陈仁涉.微量白蛋白尿的发生机制、预后及治疗.国外医学临床微生物与检验分册 ,-158
　　2.曾淑芳.尿微量白蛋白、血尿β2-M及THP对早期诊断糖尿病肾病的意义. 中华肾脏病杂志，4-165
　　3.张嘉.转化生长因子β与糖尿病肾病的发生机理制.中华肾脏病杂志，1997，13 ：187-189
　　4.周江华.α1-微球蛋白在糖尿病肾病早期病变诊断中的意义.中华肾脏病 杂志，
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温馨提示：如果您怀疑自己有某种健康问题，可到或尽快去医院就医治疗。N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG-ase）在尿中活性的测定，在临床上应用已有20多年的历史。实践证明，它是能早期发现肾脏损害成绩最好的尿酶。尿中此酶主要来自肾近曲小管上皮细胞，分子量约130-140kd，尿中NAG-ase活性
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N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG-ase）在尿中活性的测定，在临床上应用已有20多年的历史。实践证明，它是能早期发现肾脏损害成绩最好的尿酶。尿中此酶主要来自肾近曲小管上皮细胞，分子量约130-140kd，尿中NAG-ase活性升高，除前列腺炎和精液混入外，是各种肾实质早期损伤的敏感标志物。参阅20多年来中外文献，测定NAG-ase可以提供许多重要的临床信息。
一 生化特性
NAG(EC3.2.1.30)是一种溶酶体酶，广泛分布于人体各组织中，但在前列腺和肾脏近端肾小管中含量最高。NAG分子量约为130-140kd，在正常情况下，血清中NAG不能通过肾小球滤过从尿中排泄。尿中NAG活性升高，除前列腺炎和精液混入外，常是肾脏损害的标志。尿液NAG总活性及其同工酶是目前临床上最常用的测定指标。
1、尿液：留取早晨起第二次尿液10ml，立即送检。尿液不能混入精液及红细胞。作为NAG测定时，一定要同时测定尿中肌酐含量。
2、血液：采空腹血2ml，不抗凝，勿溶血。
三 测定方法
目前用于检测NAG-ase的方法，依所用底物不同，有以下几种；
（1）、4-甲基伞形酮基乙酰氨基葡萄糖苷（4MU-NAG），为荧光法，该法灵敏度高，合成工艺成熟，是多用的参考方法，但需荧光分光光度计，不能普遍应用。
（2）、对硝基苯基-NAG（PNP-NAG），应用最久，目前许多厂家生产的试剂盒多属此种，缺点是酶水解产生的色团PNP呈色域（&max=400nm）易受尿中色素的干扰，需每份样品都作空白而且必须碱化呈色，使操作复杂化，工效低，成本高，还只能做终点法。
（3）、间甲氧基硝基乙烯基-NAG（MNP-NAG），该法底物难溶于水，且色团MNP在碱性液中极易褪色。
（4）、间甲酚紫-NAG（MCP-NAG），该法底物为钠盐可溶于水，但该底物极易自动水解，可使试剂空白超过0.2ABS，稳定性差，不方便使用，而且也只能做终点法。
本公司引进开发的试剂盒，采用氯硝基苯基乙酰氨基葡萄糖苷（CNP-NAG）做底物，用速率法测定。由于色团的pKa为5.5，与NAG-ase的最适反应pH4.8接近，可在反应条件下直接显色，无需再行碱化，具备了速率法测定的条件。但CNP-NAG也有二方面缺点，其一底物溶解性差，其二是底物稳定性不足，非酶水解较重。本公司的产品基本上解决了上述二个问题。
（1）、底物以干粉原型保存，保证试剂盒的稳定性在0-8℃保存达到一年。
（2）、使用时只需将盒内缓冲液倒入相应干粉瓶中，迅速溶解成工作液，工作液在生化分析仪试剂仓内稳定一周。
（3）、采用速率法测定，操作简单、省时，无需逐个测样品空白，也不必碱化呈色，（常用的PNP-NAG法是终点法，逐个测样品空白，而且要加碱才呈色）。
（4）、有足够的灵敏度，可支持临床检出其相应的目标物。
（5）、通过编入参数，可统一减除试剂的空白速率，保证方法学的准确性和精密度。
（6）、本法的正常参考值设二部分：一是一次任意尿测值的参考值，用于过筛试验，不必每份尿都加测肌酐。另一部分是进行肌酐校正后参考值，按每g Cr报告，以澄清过筛试验中可疑样品的结果。
（7）、线性范围：可达200U/gCr，基本覆盖本项目有临床意义的各种肾脏疾病的病理范围。
（8）、从国外引进的，以原酶制作的标准物，进行质量控制保证测值的准确性和稳定性。
通过以上介绍，希望能够引起您对NAG-ase测定的兴趣而倍加关注。我们期待您与我们联手。我们将乐意进行医学上的咨询和测试技术上的支持。
四 临床意义
1、测定尿中NAG-ase（EC.3.2.1.30）的临床价值
NAG-ase是胞内溶酶体酶，参与糖蛋白、糖脂质、甲壳低聚糖的分解代谢，它是糖尿病肾病早期发现和病程监测的重要项目。未控制的糖尿病（FPG在11.1mmol/L或200mg以上）尿酶活性升高，饮食控制和胰岛素治疗1-2个月后，活性下降一半；合并糖尿病肾病和视网膜病的Ⅰ型糖尿病，尿酶活性显著升高，胰岛素治疗，血糖下降的同时也见尿酶活性下降；合并微血管损害的糖尿病人，尿酶升高；而胰腺切除、甲状腺功能亢进，导致继发性糖尿病，不见尿酶升高。&
NAG-ase在近曲肾小管细胞含量最丰富，它在尿中的升高直接反映肾病综合征，肾小球肾炎，高血压肾病以及狼疮性肾炎的发生和发展，并有重要的随访意义。
它和它的同工酶对肾盂肾炎、上下输尿管等尿路感染反应灵敏，可提示病变定位并能抓住抗炎治疗的最佳时机。
它对治疗药物的毒性反应强烈，能有力的支持专业医师及时采取解救措施。（如氨基糖苷类药物特别是对儿童和老人的毒性反应）氨基糖苷类抗生素使用3-4天即可见尿酶活性升高，提示有肾损害。
它能早期发现各种重金属对肾脏的毒害，其时相早于其他肾功能试验。
在肾移植中，它是病人出现排异的灵敏与可靠的指标。
尿中NAG-ase的测定是一个无损伤性检查项目，为此我们郑重推荐二、三级及其以上医院积极开展这个测定，为广大肾病及与肾有关各种疾病的患者造福。
2、测定血清中NAG-ase（EC.3.2.1.52）的临床价值
人体中还存在另一种NAG-ase，也是人体细胞中溶酶体的酸性水解酶。它的酶分类号为EC.3.2.1.52，而尿NAG-ase分类号为EC.3.2.1.30，前者定位在人的血清之中，测定血清中NAG-ase水平可提供与尿NAG-ase完全不同的许多重要的临床信息。从报道过的临床资料看人体有以下三个方面：
（一）它是一个重要的肝功能项目，当肝细胞受到损害时，细胞内溶酶体膜破裂，大量溶酶体内NAG-ase释放入血清，形成溶酶体酶血症。使血清中测值显著升高，因此它是反映肝实质受损程度的理想指标。
（二）它在癌的诊断和鉴别诊断方面有一定临床价值。人体内不同部位，不同类型的癌症，此酶的差异性很大，其中的胆囊癌，胆管癌，胰腺癌，食管癌，壶腹癌时升高显著。
（三）在妇产科方面监测孕妇孕期中的胎盘功能状况方面有重要意义。
检测血清中的NAG-ase，所用试剂盒，测定方法与测定尿酶完全相同，不过正常参考值，和结果的临床解释与尿酶不同。本试剂盒完全适应测血清中NAG-ase活性的应用，而且在说明书上说明了血清测值的正常参考值，供参考应用&
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提问时间： 12:32:38
患者性别：男患者年龄：44岁
指导意见：形成分的检查有几项偏高提示可能有早期的间质性小管损害指导意见：一般这种情况的出现大多是有长期的高血压高尿酸血症但有时跟长期的使用消炎镇痛药有关、所以建议你结合上述检查以及可能存在的病因确定
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提问时间： 05:43:40
患者性别：男患者年龄：52岁
病情分析： 您好，饮食调整，适当锻炼，半月后复查血糖，最好做个葡萄糖耐量实验，就可以明确您有没有糖尿病。意见建议：建议减少糖的摄入，减轻体重，合理饮食，积极的运动等才是最佳的方法。必要时在医生指导下用
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提问时间： 03:54:45
患者性别：男患者年龄：40岁
是一种高分子量(140000d)溶酶体酶广泛存在于各组织器官的溶酶体中尤以肾脏近端上皮细胞中NAG含量特别丰富但因分子量大血清中的NAG不能通过肾小球滤过测定尿NAG的方法较多目前有多种商品试剂盒供应如荧光分光光度法
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提问时间： 20:02:20
患者性别：女患者年龄：36
病情分析： 你的情况是糖尿病，目前尿中的一些指标不正常，考虑糖尿病肾病早期可能大，不太严重。可以控制治疗。
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提问时间： 16:23:58
患者性别：女患者年龄：19-29
你好 尿N--乙酰--β--氨基葡萄糖苷酶测定
　　是检测肾损伤，特别是肾小管缺血、坏死的敏感指标。
　　[英文缩写]NAG
　　[参考值]0～22u／gCr
　　 [临床意义]
　　 血中酶活性升高在许多病理情况下出现
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提问时间： 10:51:58
患者性别：男患者年龄：25
病情分析： 氨基糖苷酶的指标和尿素氮的检查指标的情况，以及前列腺炎症的表现意见建议：建议需要及时的进行及时的前列腺液的化验，确诊是否有炎症细胞后，进行及时的抗炎治疗
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提问时间： 16:24:28
患者性别：女患者年龄：30岁
问题分析：这种情况可能是由于厌氧菌感染导致的上述情况，这种情况可能是厌氧菌性阴道炎所导致的，这种情况可能是细菌性的阴道炎所导致的，是由于卫生不良所导致的，意见建议：这种情况建议到医院妇科看看，取分泌
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提问时间： 09:14:16
患者性别：女患者年龄：58
你好，考虑问题和情况可能是体内生化失调的现象，建议积极检查血液生化看看，确诊后配合治疗。
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提问时间： 20:10:18
患者性别：男患者年龄：15岁
问题分析：N-乙酰葡萄糖苷酶是一种细胞内溶酶体酶，以肾近曲小管含量最高。尿、血清NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。意见建议：N-乙酰-葡萄糖苷酶的正常参考值是：血清NAG活性为21±6 U/L。如果儿童的N-乙
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提问时间： 16:53:05
患者性别：女患者年龄：24岁
病情分析： 你好，中重度的宫颈糜烂才考虑LEEP刀手术治疗，术后可以配合理疗，促进伤口愈合。术后避免过早性生活，以免病情复发。意见建议：不要吃辛辣刺激的食物，术后禁性生活3个月，平时注意性生活卫生。
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