革兰氏染色法中哪个步骤最为重要，或容易导致失败，为什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-10-20 02:45 标签： 革兰氏染色步骤
革兰氏染色中哪个步骤可以省略?_百度作业帮
革兰氏染色中哪个步骤可以省略?
革兰氏染色中哪个步骤可以省略?
当用脱色剂脱色时,不至于很轻易就把紫色脱去,因此当用革兰氏染色法对某些菌染色时,如果这种菌本身能够与结晶紫结合的足够紧密,我们就可以省去媒染这一步
媒染该步骤是为了与初染染料较为稳定地结合，使洗脱时易于掌控，但并不是必须步骤。希望对你有帮助。革兰氏染色中,哪个步骤可以省去而不影响最终结果?_百度知道
革兰氏染色中,哪个步骤可以省去而不影响最终结果?
经初染、媒染革兰氏阳性菌保持原蓝紫色革兰氏阴性菌则变色菌体革兰氏阳性菌省略复染
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出门在外也不愁革兰氏染色的机理和步骤 75
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革兰氏染色的机理和步骤 75
1.革兰氏染色的机理和步骤；机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起；G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低；G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高；步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环；②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤；④媒染:以碘液媒染1min，水洗，吸干水分；⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应；⑥水洗，吸干；⑦
1.革兰氏染色的机理和步骤
机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。
G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。
G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。
步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。
②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。
③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。
④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用）
⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。
⑥水洗，吸干。
⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。
⑧干燥镜检。
2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。
芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种
失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。
3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。
答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。
（第2张中的图）
还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N低，经培养基后PH明显上升。
PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）
②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。
③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。
④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3?H2O；增加通风量。
⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。
3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？
抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态
存活下来，从而达到浓缩营缺型目的。制霉菌素法适用于真菌，其可与cm上？（第1张）醇作用，引起cm损伤，因为它只能杀死生长繁殖着的真菌，所以......
菌丝过滤法:基本培上，野生型霉菌，？菌的孢子能萌发并长成菌丝，而缺型孢子一般不萌发，或不能长成菌丝，因此培养一段时间后，用灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝，收集滤液，重复数遍后可除去大部分野生型，从而??
4、生产蛋白酶的枯草芽孢杆菌发生遗传变异，使得产量性状下降，你如何解决？写出具体实验方案。
答：将一定量的枯草芽孢杆菌培养液，做一定浓度的稀释，涂布在含有酪素蛋白质的基本培养基上，37°C培养一段时间后，取出培养基，观察单菌落形成的透明圈大小，取透明圈直径与菌落直径之比较大的菌落，挑取培养做进一步的鉴定，即可得到高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌。
5、以磺胺为例，说明化学治疗机的作用机制。
答：机理:磺胺是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物，（磺胺类药物取代对氨基苯甲酸，干扰叶酸的合成，抑制了转甲基反应，导致代谢紊乱，从而抑制B生长），磺胺的抑菌作用是因为许多细菌需要自己合成叶酸而生长，磺胺对人体细胞无毒性，因为人体缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶-----二氢叶酸合成酶，不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸，而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。（磺胺类----与正常代谢产物竞争酶的活性中心，干扰了酶的功能，
从而干扰代谢的正常进行）。
6、画出生长曲线。（第1张）
1、微生物的共性？哪个最基本?
答：①体积小，面积大（最基本）②吸收多，转化快③生长旺，繁殖快思适应性强，易变异⑤分布广，种类多。
2、比较G+，G-
B在CW结构，组成，对溶菌酶，青霉素的敏感性4方面的异同点。
3、表型延迟现象？如何克服？
答：表型延迟：表型的改变落后于？（第四张）改变的现象，分为 ①分离性延迟;突变的？经DNA复制和细胞分裂后变成纯合状态，表型才能表现出来。②生理性延迟;杂合状态→纯合状态，仍不能表现出来，（如营缺型）通过中间培养（CM，培养过夜），可使突变？稳定下来，克服表型延迟。
4、培养B常用的斜面培养基是什么？简述配制程序。
答：牛肉膏蛋白胨培养基
①称量;按配方依次准确称量②融化:取少量水于烧杯中，加1%的蛋白胨，加热溶解，加0.5%的牛肉膏，加热溶解，加0.5%的NaCl,热熔，加水补充到所需体积。③调PH至7.6左右。④加琼脂固体2%，热熔。 ⑤分装入试管，加塞，包扎，高压灭菌⑥搁置斜面（斜面长度不超过试管一半）⑦无菌检查：将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24-28h，以检查灭菌是否彻底。
5、啤酒酵母在分批发酵中的生长曲线分哪几个时期？在菌种扩培时，哪个时期做种子？为什么？
答：延滞期，对数生长期，稳定期，衰退期。对数期做种子。利于缩短延滞期。
6、菌种衰退的根本原因？防治措施？
答：？的自发突变。
措施：①减少传代次数②创造良好的培养条件③采用不易衰退的菌种传代④采取良好的菌种保藏措施
4、菌种衰退的根本原因，防止措施。如何区分衰退和饰变？
答：根本原因：？的自发突变。（②传代次数的影响，是负突变株比例占优势，③培养条件）
防止措施见上题。
区分：衰退：指随着菌体的不断生长，负突变菌株的数量占整个菌体数量的比例增大，最终导致菌株的生产性能大幅下降的现象。
①原有形态性状不典型，②生长速率下降③代谢产物生产力下降④对
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革兰氏染色法中最重要的是哪个步骤?为什么?
革兰氏染色法中最重要的是哪个步骤?为什么?
革兰氏染色最常用的细菌鉴别染色法之一.未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察.染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定.革兰氏染色属复染法,即将标本固定后,先用龙胆紫染色,加碘液媒染后用酒精脱色,再用稀释复红复染.染色后除可以看到细菌形态外,还可将细菌分为两大类,即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G+）.被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（G-）.革兰氏染色原理尚不肯定,可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关.致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌.百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性.所以根据细菌的革兰氏染色性质,可以缩小鉴定范围,有利于进一步分离鉴定,以对疾病做出诊断.又由于各种抗生素的抗菌谱不同,革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考.

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