[转载]生物素—亲和素免疫放大技术
生物素—亲和素免疫放大技术
&生物素-亲和素系统（biotin-avidin
system，BAS）是以生物素和亲和素具有的独特结合特性为基础，结合二者即可偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，它们的结合迅速、专一、稳定，并具有多级放大效应。自20世纪70年代，BAS开始应用于免疫化学领域以来，利用BAS可被荧光索、酶、放射性核素等材料标记的特点而发展和建立了许多新的检测方法和技术，尤其是与免疫标记技术的有机结合，极大地提高了测定的灵敏度。目前，BAS技术已在整个生物学领域中得到广泛应用，成为当今生物医学研究工作中最且使用价值和发展前途的技术之一。
生物素-亲和素系统的特点&&&&
生物素（biontin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244．31kD．生物素分子有两个环状结构（图
11-1），其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要郎部位；II环为噻吩环，Ｃ２上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素（图1）。亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pＩ=１０.５；耐热井耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力极强，亲和素常数（K）为１０１５Ｌ／mol，比抗原与抗体间的亲和力（K＝10５～１１L／mol）至少高1万倍，因此二者的结合特异性高和稳定性好。亲和索以结合１μg生物素所需的量作为其活性单位，1mg纯的亲和素的活性约为13—15U。
因此，BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。BAS在实际应用中所具有的巨大优越性，主要表现在以下几个方面。
&& 一、灵敏度
生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
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& & 二、特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。本文来源:医药社区
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三、稳定性本文来源:医药社区
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亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度，
四、适用性
生物素和亲和素均可制成多种衍生物，不仅可与酶、荧光素和放射性核素等各类标记技术结合，用于检测体液、组织或细胞中的抗原-抗体、激素—受体和核酸系统以及其他多种生物学反应体系，而且也可制成亲和介质，用于分离提纯上述各反应体系中的反应物。此外，多种BAS的商品化试剂，为临床检测和科研工作提供了有利条件。
五、其 他本文来源:医药社区
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& & BAS可依据具体实验方法要求制成多种通用性试剂（如生物素化第二抗体等）适用于不同的反应体系，而且都可高度稀释，用量很少，实验成本低；尤其是BAS与成本高昂的抗原特本文来源:医药社区
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异性第一抗体偶联使用，可使后者的用量大幅度减少，节约实验费用．此外，由于生物素与亲和素的结合具高速、高效的特性，尽管BAS的反应层次较多，但所需的温育时间不长，实验往往只需数小时即可完成
生物素的理化性质与标记生物素及其活化
生物素经恬化后，可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标记物。目前已有商品生物素标记试剂出售，使BAS放大系统得以广泛地应用于免疫化学、分子生物学及生物化学等领域的分析测定技术。
以下介绍几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物索的制备及特性
①标记蛋白质氨基的活化生物素 ②标记蛋白质醛基的活化生物素 ③标记蛋白质巯基的活化生物素
④标记核酸的活化生物素标记蛋白质氨基的活化生物素此种活化生物素的制备方法是将生物素与Ｎ－羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物索素Ｎ－羟基丁二酰亚胺酯（biotiny-N-hydroxy-succinimide，BNHS）。BNHS分子酯健中的-C=O基团可与蛋白质分于中赖氨酸的氨基形成肽键，从而使蛋白质标记上生物素。若蛋白质含赖氨酸残基多，且等电点PI＞6时，标记效果好。因此，BNHS适用于对抗体和中性或偏碱性抗原的生物素标记。
生物素的分于量较小，当与抗体或酶反应形成生物素标记结合物后．由于大分子蛋白的空间位阻效应（steric
hindrance），可对生物素与亲和素间的结合以及BAS的应用效果造成干扰。可通过在生物素分子侧链上连接一定数量的基团，形成连接臂，增加生物素与被标记大分子间的距离（如长臂活化生物素），减少位阻效应，增加检测的灵敏度和特异性。本文来源:医药社区
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长臂活化生物素（N-hydroxy-succinimido-6-biotinyl amido
hexanoate，BCNHS）是在生物素和N—羟基丁二酰亚胺之间添加了两个6-氨基己糖分子基团，形成连结臂，使其与抗体、酶等生物大分子结合后，不受位阻效应的影响，更易发挥生物索的活性作用。BCNHS的制备是先用6－氨基己糖与生物素连接制得长臂生物素，然后再将其活化。
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标记蛋白质醛基的活化生物素
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用于此类标记的活化生物素有两种：生物衰酰肼（biotin hydrazine，BHZ）和肼化生物胞素（biocyin
hydrazine，BCHZ）。BHZ是水合肼（hydraine
hydrate）与生物素的合成物，主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。也可在BHZ侧链上添加一个赖氨酸基团作为连结臂，减少标记后的空间位阻，使活化后的生物素能更好地与亲和素结合。
生物胞素（biocytin）是生物素通过-C=O基与赖氨酸的ε－氨基连接而成的化合物，它与无水肼反应后形成的肼化物即为肼化生物胞素（biocytin
hydrazine，BCHZ）。BCHZ除可与蛋白质的醛基结合外，它还与BNHS相同，能与蛋白质的氨基结合，因此其适用范围较BHZ宽。本文来源:医药社区
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标记蛋白质巯基的活化生物素
&３-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素[3-（N-maleimido-propiny）-biocytin，MPB]是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。它是用氯化生物胞素与3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-N-BNHS在二甲基甲酰胺（DMF）溶液中反应后制得的。
标记核酸的活化生物素活化生物素可通过缺口移位法化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊
酸侧链通过酰胺健与核酸分子相连构成生物索标记的核酸探针。常用于标记核酸分子的活化．常用于标记核酸的活化生物素有以下几种：本文来源:医药社区
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&1.光生物素（photobiotin）它是一种化学合成的生物素衍生物（下图）。生物素分子侧链上连接的芳香基叠氮化合物基团具光敏感性，在一定波长的光照射下，光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌呤N7位氨基结合，形成生物素化的核酸探针，用于DNA或RNA的标记。
2.生物素脱氧核苷三磷酸先将生物索与某种脱氧枝苷酸连接成活化生物素，如生物素化dUTP（Bio-１１-dUTP，下图）。Bio-1l-dUTP作为TTＰ的结构类似物，可采用缺口移位法通过DNase和DNA聚合酶Ι的作用而掺人到双链DNA中。
3.BNHS和BHZ二者均可以在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N4氨基交联，使核酸分子生物素化。
采用BNHS和BHZ活化生物素标记核酸时，生物素偶联的胞嘧啶N4氨基，是碱基互补时胸嘧啶与鸟嘌呤核苷酸形成氢键的基团，该位置连接生物素后，可影响氢键的形成，因此目前常用光生物素和生物素化dUTP作为标记核酸的活化生物素。
生物素化蛋白质衍生物（一）生物素化蛋白质衍生物的特性
生物素通过噻吩环戊酸侧链上的羧基与多种大分子偶联活化后，可用于标记各种蛋白质（包括抗体、抗原、酶、激素及葡萄球菌Ａ蛋白等）形成生物素化蛋白质衍生物。而且一个蛋白质分子可联结多个生物素分子，从而使其具较高的比活性，在与亲和素的反应中成为多价。生物素化大分子的多价性，是BAS多级放大作用的物质基础。本文来源:医药社区
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生物素化蛋白质衍生物有二类，一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
（二）标记方法本文来源:医药社区
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1.标记抗体、抗原抗体是常用的生物活性大分子物质。由于一个抗体分子可连接多个生物素分子，因此一个生物素化的抗体分子在反应时可与多个亲和素分子结合。为适用于不同的抗原-抗体反应体系，通常选用第二抗体进行生物素标记，制备的标记物具通用性。
&常用于标记抗体的恬化生物求是BNHS。反应时，BNHS分子中的酯键在碱性溶液中迅速水解，C＝O基团即可与抗原或抗体蛋白质中的赖氨酸残基形成肽键，使生物素标记在抗体分子上。游离生物素只需简单的透析方法即可除去。
&但对于分子偏酸性的抗原，标记时多采用BHZ：本文来源:医药社区
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2.标记酶以生物素标记辣根过氧化物酶（HRP）为例：将含有生物素BNHS的N,N'.二甲基甲酰胺溶液滴加入HRP碳酸盐缓冲液中（0.1mol／L，pH8.4），使最终二反应物混合体积比为1：8，充分反应，然后用PBS透析除去末标记生物素等物质，即得到生物素化HRP。本文来源:医药社区
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其他可用于标记的酶有β—半乳糖苷酶（β－Gal）和碱性磷酸酶（AP）。
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& & （三）标记注意事项本文来源:医药社区 1
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1.应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的理化性质（酸性、中性或碱性），选择相应的活化生物素和反应条件。本文来源:医药社区
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2.标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例，使每个蛋白质分于上标记的生物素分子数量控制在一定范围，以免影响标记物的活性。如标记抗体时，IgＧ的应用浓度以0.5—5μg／ml，生物素：IgＧ的比例（mg／mg）为2:1时．效果较好。一般每个抗原或抗体分子标记1—3或3－5个生物素分子较为适宜。本文来源:医药社区
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3.为减少生物素标记蛋白质后，大分于物质造成的空间位阻影响，有利于生物素与亲和素的结合，可在生物索与被标记物间加入交联臂样结构。
&4.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后．不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同，对HRP、葡萄糖氧化酶和β－半乳糖苷酶，酶活性不受偶联生物素的干扰，但某些酶（如碱性磷酸酶）在标记生物素后，其活性会有一定程度降低。亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记
亲和素及其活性
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亲和素在纯水中的溶解度类似于球蛋白．而在50％硫酸铵溶液中的溶解度又与白蛋白相似，亲和素富含的色氨酸与其活性密切相关，是亲和素与生物素咪唑环酮结合的基团。
链霉亲和素及其活性
链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces
avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。本文来源:医药社区
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链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015L／mol。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和Ｃ端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达18U。生物素-亲和素系统的应用生物素与亲和素间的结合亲和力高、特异性强，且各自均可以与各型大小分子偶联，以及二者在结合反应时具有的多级放大作用等优越性，生物素-亲和素系统（BAS）被广泛应用于各种生物医学实验方法。随着对生物索和亲和素的立体结构、结合特性和稳定性等的研究不断深入，BAS及其相关技术在多种自动化免疫分析技术领域中的应用，进一步促进了对血浆、体液中一些微量物质如小分子多肽激素、肿瘤标志物、心肌损伤标志物和血药浓度分析等灵敏快速准确测定技术的发展。为免疫检测自动化分析作出了极大的贡献。而且在核酸探针标记；细胞和生物活性物质分离提纯等方面也显示了明显的优越性。
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生物素—亲和素系统基本类型及原理本文来源:医药社区 1
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BAS在应用中的基本类型有二种：一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素化大分子的待捡反应体系和标记生物素，称为BAB法（biotin-avidin
bind．BAB）；后来又在此基础上发展了亲和素—生物素化酶复合物技术，称为ABC法（avidin－biotin-peroxidaes
complex，ABC）。另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法，或称标记亲和素—生物素法（Labeled－avidin-biotin，LAB）。此外，依据检测反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗体，又分为直接法BAS和间接法BAS。下表简示了目前常用的几种BAS的应用实验方法及反应层次。
为最大限度避免待测标本内源性生物素对引入BAS的检测方法的干扰，近年来也依据BAS的基本工作原理，衍生出采用抗生物素抗体或抗亲和素抗体建立相应的BAS（见下表）
BAB法也称为桥联亲和素-标记生物素法bridged avidin- biotin
technique，BRAB），是以游离的亲和素（或链霉亲和素）作为桥联剂，利用亲和素的多价性，将检测反应体系中抗原。生物素化抗体复合物与标记生物素（如酶标生物素）联结起来，达到检测反应分子的目的。由于生物素化抗体分子上连有多个生物素，因此，最终形成的抗原-生物素化抗体-亲和素-酶标生物素复合物可积聚大量的酶分子；加入相应酶作用底物后，即会产生强烈的酶促反应，从而提高检测的灵敏度。间接BAB法则是在抗原与特异性抗体结合反应后，再用生物素化的第二抗体与抗原抗体复合物结合，使反应增加一个层次，从而使灵敏度进一步提高。本文来源:
ABC法本文来源:医药社区 6
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ABC法是在BAB法基础上的改良，其原理是预先按一定比例将亲和素（或链霉亲和素）与酶标生物素结合．形成可溶性的亲和素（或链霉亲和素）-生物素－过氧化物酶复合物（ABC或SABC）。当其与检测反应体系中的生物素化抗体（直接法）或生物素化第二抗体（间接法）相遇时，ABC（或SABC）中末饱和的亲和素（或链霉亲和素）结合部位即可与抗体上的生物素结合，使抗原－抗体反应体系与ABC（或SABC）标记体系连成一体进行检测。由于在ABC形成时，一个标记了生物素的酶分子可通过其生物素连接多个亲和素（或链霉亲和素），而一个亲和素，（或链霉亲和紊）分子又可桥联多个酶标生物素分子，经过这种依次的相互作用连接，从而形成一种较大的、具多级放大作用的晶格样网状结构，其中网络了大量酶分子。因此，将ABC或（SABC）复合体应用于免疫检测体系时，即可极大地提高酶在抗原—抗体反应场所的浓度，使该法的检测敏感性明显提高。
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BA法本文来源:医药社区 6 N8 p0
BA（或LAB）法是以标记亲和素（或链霉亲和素）直接与免疫复合物中的生物素化抗体连接进行检测。该法也有相当高的灵敏度，由于省略了加标记生物素步骤，操作较BAB法简便．间接BA（或LAB）法也是采用生物素化的第二抗体，可以进一步提高检测灵敏度。
生物素—亲和素系统在ELISA中的应用本文来源:医药社区
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把BAS与ELISA偶联起来，可大大提高ELISA测定的灵敏度．因为亲和素与生物素间极高的亲和力，使反应结合更牢固稳定，而且特异性高；每个亲和素可结合４个生物素，可使反应明显放大；用小分子生物素代替酶标记抗体，可减少反应中的空间位阻。本文来源:医药社区
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BAS与ELISA偶联应用的形式有多种：如用于固相化抗体或抗原的制备．即是先将亲和素（或链霉亲和素）包被于固相载体，抗体或抗原也先与生物素结合，然后通过亲和素—生物素反应而使生物隶化的抗体或抗原固相化：这种包被法不仅可增加固相载体上的抗体或抗原包被量，而且使其结合位点充分暴露，有利于免疫反应的有效进行。BAS亦可用于ELISA终反应的放大：用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，然后连接亲和素-酶结合物（BA-ELISA）、或亲和素及酶标生物京（BAB-ELISA）或ABC试剂（ABC-ELISA），从而使反应信号放大，提高检测灵敏度。下图所示的即是一种BAB反应模式的BAS应用于双抗体夹心法ELISA检测抗原的原理及过程。
生物素-亲和素系统在均相璃免疫测定本文来源:医药社区 5
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BAS除了作为免疫测定的放大系统外，还可作为均相酶免疫测定（HEI）中高效的酶活性调变系统。在BAS—HEI系统中，预先将作为配体的生物素与酶偶联，形成的生物素－酶复合物具有完整的酶活性；亲和素作为特异的酶结合体（类似于抗体），可与生物素-酶复合物结合。经典的抗体结合酶抑制性均相酶免疫分析类似，当生物素-酶复合物与亲和素结合后，酶活性中心受空间位阻作用而失活．
HEI为竞争性结合反应，因此反应系统中，同时加行生物素－酶，亲和素-抗原，特异性抗体和待测抗原：由于抗体限量，于是待测抗原和亲和素-抗原复和物竞争与抗体结合。亲和素—抗原与抗体结合后．即不能与生物素-酶复合物结合，后者的酶活性得以保留；而游离的亲和素—抗原则可结合生物素－酶复合物，井使后者酶活性丧失。因此．反应体系中待测抗原浓度越高，则游离的亲和素-抗原复合物越多，最终测得的酶活性越低，即酶活性的变化与待测标本中抗原浓度呈剂量相关。本文来源:医药社区
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生物素-亲和素系统在荧光免疫技术中的应用
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荧光免疫分析（fluorescence
immunoassay，FIA）是发展最早的一种标记免疫技术。FIA按实际用途可分为两大类：一种是经典的以荧光物质标记抗体，主要用于组织和细胞中抗原、抗体的定位观测，称之为荧光抗体技术（fluorescent
technique）；另一类则是用于液体样本中微物质定量的荧光免疫分析技术，如时间分辨荧光免疫分析（time-resolved
fluorescence immunoassay，TRFIA）或荧光偏振免疫分析（fluorescence polarization
immunoassay FHA）等。本文来源:医药社区 (
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BAS用于荧光抗体技术．通常采用BA法，即用荧光素直接标记亲和素（或链霉亲和素）；也可采用游离亲和素（或链霉亲和素）搭桥，两端分别连接生物素化抗体和荧光素标记的生物素（BAB法）或荧光标记的抗亲和素（或链霉亲和素）抗体的夹心法。与常规荧光抗体法相比，引入BAS的荧光抗体技术可明显地提高方法的灵敏度和特异性。
TRFIA发展至今已有几种分析体系，其中与传统的解离增强镧系元素荧光免疫分析（disso-ciation enhanced
lanthanide fluoroimmunoassay ，DELFIA）不同，Cyber Fluor时间分辨荧光免疫分析（Cyber
Fluor time-resolved fluoroimmunoassay
，TRFIA）和酶放大时间分辨荧光免疫分析（enzyme-am-plified time-resolved
fluoroimmunoassay
，EATRFIA）均将BAS引入反应测定过程，利用其特异的生物放大功能，提高测定的灵敏度：现以双位点夹心法实验为例，简介其工作原理如下：
Cyber　Fluor　TRFIA采用的是一种新型双功能螯合剂，称为4，7－双（氯碱酰基苯基）—l，10—菲咯啉－2，9-二羧酸[4，７—bis（chlorosulfophenyl）-1，10-phenanthroline-2，9—dicarboxylic
acid，BCPDA].用BCPDA做“桥”，一端连接链霉亲和素（SA）。另一端螯合Ｅu３＋；制成通用试剂SA—BCPDA—Ｅu3+；此外，将两株ＭcAb分别固相化和生物素化。反应完成后形成的复合物为：固相McAb—Ag-（McAb-生物素）-（SA—BCPDA-Ｅu3+），即通过生物素与链霉亲和素间高亲和力的结合，把通用试剂与固相载体上的双抗体夹心免疫复合物相连接，并且特反应信号放大。
EATRFIA则是在抗原与固相McAb和生物素化McAb反应形成夹心复合物后，加入碱性磷酸酶（ALP）标记的SA（ALP-SA）继续反应，经生物素和SA的高亲和力结合，形成复合物：固相McAb-Ag－（McAb-生物素化）-（SＡ-ALP）。ALP再作用底物生成产物5-氟水杨酸，后者在碱性条件下，可与Tb3+-EDTA形成荧光寿命长且产额高的三元复合物用于检测。EATRFIA是汇集了酶放大作用，BAS的高亲和力和生物放大作用以及TRFIA优点的新一代高灵敏度、不用增强液的分析方法．
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生物索-亲和素系统在放射免疫测定中的应用
BAS主要与免疫放射分析（IRMA）检测体系偶联，用于对终反应的放大（BA法）：先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与抗原（标准抗原和待测抗体）同时反应，在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物；再加入125I标记的亲和素（或链霉亲和素）与复合物中的生物素结合，最终使反应信号放大，进一步提高IRMA的灵敏度。如该系统用于测定促甲状腺激素（TSH）时，由于方法的高灵敏性，即可将甲亢患者降低的TSH水平与正常值低限有效地予以区别。此外，BAS也可用于IRMA反应后B、F成分的分离：先将生物素化的McAb和放射性核素标记的McAb与抗原的不同抗原决定簇结合，反应平衡后，加入表面偶联有亲和素的聚苯乙烯珠与免疫复合物中的生物素连接成固相终产物。该法的优点是克服了其他IRMA法需多次离心的麻烦．待测复合物与固相结合更牢固，操作更简便。本文来源:医药社区
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生物素—亲和素系统在分子生物学中的应用本文来源:医药社区 4
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BAS在分子生物学领域中的应用日渐增多，目前主要集中在以生物素标记核酸探针进行的定位检测，用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离纯化以及将免疫测定技术与PCR结合建立免疫—PCR（immuno-PCR）用于抗原的检测等三方面。现简介如下：本文来源:医药社区
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自从合成了生物素化的脱氧三磷酸脲苷（dUTP）和UTP等核苷酸单体以来，以生物素化多核苷酸为探针的核酸杂交技术有了很大发展。生物素标记核酸探针常用于Southern、Northern和原位杂交等。实验时，标记探针先与细胞或染色体原位（或是固定在乙酸纤维素膜上）的变形核酸分子进行杂交，然后用偶联了酶或荧光物质的亲和素（或链霉亲和素）识别杂交互补片段．使其显色或产生荧光。这种非放射性标记技术具有灵敏、安全。简便快速和经济的特点，并且克服了放射性核索探针标记与检测的缺点，应用潜力巨大。
源:医药社区
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利用BAS与磁化微球技术联合进行mRNA的分离和提纯：先用生物素标记的寡脱氧胸腺嘧啶核苷酸[Oligo（dT）]和总RNA杂交，再用包被链霉亲和素的磁珠捕获mRNA，经磁性吸附，将mRNA—磁珠混合物一并分离，然后将分离的mRNA洗脱收集。这种生物磁珠分离法较传统的用带Oligo（dT）的纤维素或琼脂糖亲和层析分离法更加有效、方便。
来源:医药社区
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免疫-PCR是将抗原－抗体反应的高度特异性与PCR技术的高度敏感性相结合建立的迄今最敏感的分析方法，其检测灵敏度可达10-21ml水平，免疫-PCR的技术关键在于用一个连接分子将一段特定的DNA连接到抗体上，在抗原和DNA间建立对应关系，从而将对蛋白质的检测转变为对核酸的检测。如用链霉亲和素（SA）-蛋白A嵌合体作为连接分子，它的蛋白A和SA可分别与IgＧ的Fc段和生物素化DNA中的生物素结合，从而在蛋白质和核酸之间建立起对应关系，经PCR扩增，即可将抗原抗体反应的特异性高度放大。此外，为解决传统PCR扩增产物检测方法操作繁琐、灵敏度低和耗时的不足，现又有用ELISA方法来定量检测，免疫-PCR扩增产物，称为PCR-ELISA。它主要是用一对分别标记了生物素和地高辛的引物来扩增标记DNA，亲和素则作为捕获抗体以固定扩增产物，再用标记有碱性磷酸酶的抗地高辛抗体进行双抗夹心ELISA检测扩增产物。结果显示，此种方法的测定灵敏度、精密度和稳定性均优于传统方法，而且PCR-ELISA更节省时间和更易于临床检测的自动化。第11章_生物素-亲合素放大技术_图文_百度文库
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第11章_生物素-亲合素放大技术
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