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批号为的注射用生长抑素的生产、检验及储存情况
通过调查，该批次产品严格按照法定处方工艺和《中国药典》二部质量标准进行生产及检验，过程无异常，成品全检合格并经审核放行后销售；用于生产该批产品的原料药、辅料及包装材料均从合格供应商处购进，均检验合格，经过质量保证部放行后用于生产；对产品仓库储存情况调查，结果符合规定。接到报告后，公司对该产品留样进行检验，含量检验结果均符合规定。相信公司质检严谨，生产经营方面不会有大问题。
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lmnabifv0571
通过调查，该批次产品严格按照法定处方工艺和《中国药典》二部质量标准进行生产及检验，过程无异常，成品全检合格并经审核放行后销售；用于生产该批产品的原料药、辅料及包装材料均从合格供应商处购进，均检验合格，经过质量保证部放行后用于生产；对产品仓库储存情况调查，结果符合规定。接到报告后，公司对该产品留样进行检验，含量检验结果均符合规定。相信公司质检严谨，生产经营方面不会有大问题。
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生长抑素的保存温度
生长抑素的保存温度
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如果室温过高，最好先用塑料袋密封，再置于冰箱冷藏室储存，而实际上这种做法是非常不妥的。　　因为如果把巧克力放进冰箱内储存，会使巧克力表面出现糖霜或因出油而引起反霜相信巧克力是很多朋友。食用后。取出时，一旦被拿到常温环境中，湿气马上会聚积在表面、反霜的现象更加严重，使出霜。而且经冷藏后，表面结霜的巧克力不但会失去原来的醇厚香味和口感，还有利于细菌的繁殖生长，容易发霉变质，会给健康带来危害。　　储存巧克力的最佳温度是5℃?18℃。夏天，尤其是很多女孩子的最爱，至接近室温时再打开食用，请勿立即打开，让它慢慢回温。当然，为了保持巧克力的最佳风味和口感，最好是吃多少买多少，每次食用最新鲜的。为了能长久保存巧克力，不少朋友习惯于将其放入冰箱内保存。冬天，如果室内温度低于20℃，储存在阴凉通风处即可。当巧克力从冰箱中取出后
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过表达葡萄糖转运蛋白-2基因的INS-1细胞构建研究
【摘要】：
慢性胰腺炎患者由于反复的炎症刺激,致胰岛β细胞损伤逐渐加重,β细胞数目明显减少,胰岛功能显著下降;同时长期高糖毒性作用亦可引起胰腺炎的反复发作,进一步加速胰岛β细胞凋亡,从而最终发展为继发性糖尿病。因此,控制高血糖是慢性胰腺炎后期治疗的一个重要环节,而目前的治疗方法尚存在诸多弊端。传统的体外胰岛素注射治疗,由于与胰岛素分泌的生理模式不符,易致血糖波动而引起相关并发症。细胞移植治疗虽为研究热点,但胰岛β细胞分离与储存技术难度较大、代价昂贵,因此寻找新的移植细胞来源是该方法亟需解决的关键难题。本课题应用逆转录病毒载体将调节胰岛素分泌的葡萄糖传感器——葡萄糖转运蛋白-2(glucose transporter-2, GLUT-2)基因转染于INS-1细胞,使INS-1细胞的胰岛素分泌更接近于生理条件,从而建成新型的“胰岛代理细胞”系,为细胞移植治疗提供新的、易供的移植细胞来源。
1、INS-1细胞源于辐射诱导的胰岛β细胞瘤,胰岛素含量为8μg/106细胞,超过80代仍可稳定表达,其胰岛素含量与原代培养的胰岛β细胞相似,同时该细胞自身无分泌胰高血糖素与生长抑素,更有助于在研究中排除其他因素对胰岛素分泌的影响。
2、胰岛素分泌量与胰岛β细胞内的葡萄糖代谢率成正比,故控制葡萄糖流入β细胞的蛋白或酶类被认为是调节胰岛素释放的葡萄糖传感器,葡萄糖转运蛋白-2(glucose transporter 2,GLUT-2)就是β细胞内的葡萄糖传感器,其活性直接或间接受葡萄糖浓度调节,从而改变葡萄糖在胰岛β细胞内的代谢速率,进而调节胰岛素的分泌。因此,通过GLUT-2基因转染,可能实现对胰岛素分泌的调控。
3、逆转录病毒载体可携带靶基因于宿主细胞内长期、稳定表达,并且其在一定间隔期内多次重复感染可提高基因转染效率。因而,该载体是构建“胰岛代理细胞”最常用的载体系统之一。
第一部分INS-1细胞GSIS检测
目的:对培养的INS-1细胞进行葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)检测,从而掌握INS-1细胞的GSIS特点,为其改进奠定基础。
方法:(1)INS-1细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中;(2)对INS-1细胞进行GSIS检测。
结果:(1)INS-1细胞在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中生长良好;(2)GSIS检测显示INS-1细胞存在胰岛素分泌,但其胰岛素分泌与生理模式存在显著差异。
结论:成功培养INS-1细胞,该细胞有成熟胰岛素的分泌,但其GSIS与生理模式存在显著差异。
第二部分葡萄糖转运蛋白-2基因逆转录病毒表达载体构建/包装及鉴定
目的:构建GLUT-2基因逆转录病毒表达载体pL-GLUT2-SN,并于PA317细胞中进行包装,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆PA317/GLUT-2,为GLUT-2基因稳定转染INS-1细胞奠定基础。
方法:(1)质粒pcB7/GLUT-2以EcoRI、BamH1双酶切,获得GLUT-2 cDNA,与同样酶切的逆转录病毒载体pLXSN在T4DNA连接酶作用下连接,构建成重组逆转录病毒表达载体pL-GLUT2-SN,经酶切及测序鉴定;(2)Lipofectamine2000介导pL-GLUT2-SN转染包装细胞PA317,分别以PCR、RT-PCR对PA317/GLUT-2细胞中GLUT-2基因的整合与转录进行检测。
结果:(1)构建的pL-GLUT2-SN重组载体经EcoRI、BamH1双酶切有1996bp的GLUT-2 cDNA及5.9kb的载体片段,GLUT-2 cDNA序列经测序证实正确;(2)所获稳定产毒细胞克隆PA317/GLUT-2,其最高病毒滴度可达7.1×10~5 CFU/mL;PA317/GLUT-2细胞RT-PCR扩增出158bp的目的片段;而PA317/pLXSN细胞检测结果为阴性,证实在PA317/ GLUT-2细胞中已获得GLUT-2基因的转录。
结论:所获GLUT-2 cDNA序列正确,成功构建了高滴度的稳定产毒细胞克隆PA317/GLUT-2,为GLUT-2基因稳定转染INS-1细胞奠定了基础。
第三部分过表达葡萄糖转运蛋白-2基因的INS-1细胞构建及GSIS检测
目的:构建稳定过表达GLUT2基因的INS-1细胞,并进行GSIS检测。
方法:(1)以GLUT2病毒感染INS-1细胞,通过RT-PCR及Western-blot对INS-1/GLUT-2细胞中GLUT-2基因的转录及表达情况进行检测;(2)对INS-1/GLUT-2细胞进行GSIS检测。
结果:(1)所获INS-1/GLUT-2细胞经RT-PCR检测显示有更多的GLUT-2基因转录;(2)Western-blot证实INS-1/GLUT-2细胞中有GLUT-2基因过表达。(3)GSIS检测显示INS-1/GLUT-2细胞较INS-1细胞的GSIS曲线右移。
结论:通过逆转录病毒载体介导的基因转染,成功构建了新型“胰岛代理细胞”INS-1/GLUT-2,该细胞的胰岛素分泌在一定程度上与生理条件相似,有望为细胞移植治疗提供一种新的、易供的移植细胞来源。
【学位授予单位】：第三军医大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：R587.1;R576
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