实验中sds法所得到的植物dna制剂中可能粗盐中含有难溶性杂质哪些杂质

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-04-17 11:10 标签： 为处理含有某种杂质
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通过本实验了解SDS法提取植物..
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SDS法提取植物核酸一、实验目的
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3秒自动关闭窗口【求助】关于简便快速提取植物DNA的方法
有谁使用过简便 快速的提取植物DNA的方法吗?用于PCR, 常规的SDS和CTAB耗时长,我有很多植株需要鉴定,急需最简便的方法,请大侠们帮忙啊!谢谢啦!CTAB快速提DNA法溶剂:2*CTAB,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),3M的醋酸钠,无水乙醇方法:取植物材料少量,可用液氮冷冻,没有的话不冻也可以,材料粉碎后快速加入CTAB 100微升,65度3-5min,加入相同体积的酚氯仿,混匀,12000转10分钟,取上清至另一管中(注意,一定不要带入酚氯仿,否则残留的酚会使TAQ酶失活而导致PCR结果假阴性),加入十分之一体积的醋酸钠,再加入两倍体积的无水乙醇,冰上沉淀10分钟,离心,去上清,晾干或DNA干燥仪干燥,加入水10-20微升,取1-3微升做PCR.这种方法提取DNA比较稳定可靠,还有一个更快速的方法是碱提取法,直接用氢氧化钠,但是我们试过不是很稳定,所以还用这个方法,也很快的.一次可以提几十个样没问题.确实有点麻烦哦！我也没有好办法，都是传统方法，无助！如果你有好的方法告诉我啊！嫩叶子，在1.5ml离心管中直接磨碎，加水，70度左右煮10min左右，吸1-2微升便可用于PCR，适用于比较好P的片段。三叶虫 wrote:CTAB快速提DNA法溶剂:2*CTAB,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),3M的醋酸钠,无水乙醇方法:取植物材料少量,可用液氮冷冻,没有的话不冻也可以,材料粉碎后快速加入CTAB 100微升,65度3-5min,加入相同体积的酚氯仿,混匀,12000转10分钟,取上清至另一管中(注意,一定不要带入酚氯仿,否则残留的酚会使TAQ酶失活而导致PCR结果假阴性),加入十分之一体积的醋酸钠,再加入两倍体积的无水乙醇,冰上沉淀10分钟,离心,去上清,晾干或DNA干燥仪干燥,加入水10-20微升,取1-3微升做PCR.这种方法提取DNA比较稳定可靠,还有一个更快速的方法是碱提取法,直接用氢氧化钠,但是我们试过不是很稳定,所以还用这个方法,也很快的.一次可以提几十个样没问题.可以不加醋酸钠的新生组织10mg左右，粗提液可直接用于PCR检测。由于新生组织蛋白质，多糖，色素及酚类等杂质含量都很低，省去苯酚，氯仿抽提步骤，可在室温下进行，不使用液氮，对DNA质量要求不高时可使用此方法。提取液成分：
200mmol Tris-Hcl（PH 8.0）
250mmol Nacl
EDTA（1）&&称取10mg新生组织，置1.5ml Eppendorf管中，室温下用自制塑料小杆迅速研磨成匀浆（2）&&加入提取夜400ul，混匀后，12000rpm，离心5min（3）&&取上清300ul，转移置另一EP管中（4）&&加入等体积异丙醇，室温静置2min，12000rpm，离心5min （5）&&室温下开盖放置15min，异丙醇挥发（6）&&加入20-100ul重蒸水，使沉淀溶解，即得DNA粗提液我这个方法只适合于新生组织,不知道在哪本书上看见的，我自己又改建了一下，如果是新生组织,或是蛋白比较少的话，可以试一下，很简单大家好，我想问一下哪里可以给代做issr，具体情况请pm我
您的位置： &&您的位置： &
改良SDS法快速提取赤芍干叶片DNA的研究
优质期刊推荐细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
SDS法提取植物基因组DNA操作程序
SDS法提取植物基因组DNA操作程序
来源：互联网
点击次数：2019
【实验目的】学习和掌握常用基因组DNA提取方法。
【实验要求】1.设计所采用实验方案并独立完成所有实验操作；
2.获得高纯度、完整DNA样品。
一、原理：
利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
二、药品试剂及耗材：
—— 提取缓冲液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA
ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入）
---- 20% SDS
---- 5 mol/L
---- 氯仿：异戊醇（24：1）
—— 异丙醇
—— 70%乙醇
—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0
移液枪，15、2.0、1.5ml离心管，篮、黄、白枪头各四套
离心管架4个，离心管盒2个，水浴泡沫8个，研钵及小药勺8套
棉手套，薄膜手套，透明胶布，剪刀
三、操作程序
1. 将1 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。
2. 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液(3V)，轻缓振荡混匀，加入120&l 20%SDS(达到终浓度2%)，混匀，置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。
3. 加入0.45 ml 5M的醋酸钾（1/10V），混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，取上清液转入另一离心管中。
4. 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀， 12000 rpm离心15 min。
5. 转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V冰预冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，（见丝状沉淀）-20℃放置30分钟沉淀核酸。
6. 25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。
7. 弃上清，70％乙醇洗两次。
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