real7500 real time pcrr 仪器可以连续使用吗

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什么是realtime PCR，什么是q-pcr，所用反应物质与普通PCR有何不同
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http，它起飞时间的Ct值可以精确反映模板的浓度，q-RT-PCR等等。普通PCR结果反映的其实是PCR的结果，都是一个意思实时定量PCR (real-time quantitative PCR)，特别是同一物种不同组织中某基因的表达情况
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Real-time PCR 方法（1）
贡献者：zhujunyu201322
本站编辑：杭州厨师培训
Real-time PCR （1）提取细胞的总RNA 将6孔培养板中细胞培养物上清弃去，以PBS洗细胞2遍后加入1 ml Trizol，置冰上充分吹吸，使细胞完全裂解，将裂解液吸至1.5 ml离心管中，室温静置10 min，加入氯仿200 μl，震荡30s摇匀，室温静置2 min，冷冻离心机4℃，12000 rpm离心15 min；将上层水相移至一个新的1.5 ml Eppendorf 管中，加入0.5 ml 异丙醇，轻轻混匀，室温静置10 min；4℃，12000 rpm，离心15 min，管底见白色沉淀；弃上清，加入1 ml 75% 乙醇（0.1% DEPC 水配制），轻轻洗涤沉淀；4℃，7500 rpm，离心15 min；弃尽上清，室温晾干沉淀；待沉淀透明后用20 μl 的DEPC 水溶解 RNA，68℃水浴助溶15 min。
（2）RNA含量测定 取2μl 总RNA 样品加入98μl DEPC 水中混匀，以该DEPC 水作为空白对照，用蛋白核酸测定仪检测RNA 浓度及OD260/280 值，计算总RNA 浓度并鉴定纯度。 总RNA 浓度计算公式：RNA（mg/ml）=40×OD260×稀释倍数/1000。 RNA (μg/ml)＝40×OD260×稀释倍数
（3）cDNA 的合成 按逆转录试剂盒操作程序进行逆转录，反应体积25 μl。取0.2 ml 离心管置于冰上，依次加入下列反应物：总RNA 2 μg，加DEPC 水补足至10 μl，oligo-d(T)18 primer（0.5 μg/μl）1 μl，轻轻混匀，稍离心后置
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