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3秒自动关闭窗口ABO血型鉴定实验原理与方法步骤 - 动物实验 - 生物秀
标题: ABO血型鉴定实验原理与方法步骤
摘要: 1． 理解间接鉴定血型的原理。
2． 掌握人体ABO血型鉴定的方法。……
【实验目的】
1． 理解间接鉴定血型的原理。
2． 掌握人体ABO血型鉴定的方法。
【实验原理】
血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型，通常红细胞血型即为血型。将血型不相容的两个人的血液滴于玻片上红细胞将聚集成簇，这种现象称为凝集。红细胞凝集的机制是抗原－抗体反应，即位于红细胞膜上的抗原与相应血清中的抗体（凝集素）发生免疫反应。在ABO血型系统中，血型鉴定就是将检测血液分别加入已知含有A或B凝集素的标准血液中，观察凝集现象是否发生，用以判断待检血液红细胞上含何种凝集原，由此确定待检血液的血型。
【实验对象】
【实验器材与药品】
采血针，玻片，玻棒，棉球，消毒注射器，小，记号笔；标准A、B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。
【实验方法和步骤】
1. 玻片法：用记号笔在玻片两端分别标上A、B，并各滴加一滴相应的已知标准血清。用75％酒精棉球消毒耳垂或指端，以消毒针刺破皮肤，玻棒采血后分别滴于玻片A、B标准血清中。2～5分钟后观察有无凝集现象，20～30分钟后再根据有无凝集现象判定血型（图9-1）。
2. 法：先用上述方法采血，滴加1～2滴血液于盛有1ml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞悬液（浓度约5％）。然后取小试管两支，分别标明A、B字样。各加入标准与受检红细胞悬液各1～2滴，混匀后低速离心1min（1000rpm），取出试管后轻弹管底，使沉淀物被弹起，在良好的光线下观察结果。若有沉淀物成团飘起，表示发生凝集现象；若沉淀之物呈烟雾状逐渐上升，最后试管内液体恢复红细胞悬液状态，则表示无凝集现象。
【注意事项】
1. 试管法较玻片法结果准确。
2. 若结果判断困难时，可借助显微镜。
3. 用玻璃棒蘸血时，都是只蘸一次，避免交叉污染。
4. 红细胞悬液及必须新鲜，加用标准血清的不能交叉使用，否则可能出现假阳性结果。
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试管法和血型定型卡法对100例样本的血型鉴定结果分析
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ABO血型鉴定试管法操作程序110503
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[导读]总之，在患者ABO血型鉴定试验中，如果出现正反定型结果不符，不能轻易发报告，否则，可致ABO血型的误判。
(广西宜州市矮山乡卫生院& 546300)
【摘要】目的：总结探讨血型鉴定的影响因素。方法：对418名患者采用玻片法和试管法进行血型鉴定。结果：玻片法和试管法存在一定结果不符，其准确率低于试管法。结论：血型鉴定存在一定的影响因素，血型鉴定时，需要综合考虑。
【关键词】ABO血型& 血型鉴定
【中图分类号】R446.11&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文献标识码】A&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文章编号】（0-02
&&&&&&& 血型是人类血液以血型抗原为表现形的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型鉴定(blood typing)是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。临床常用的血型鉴定方法有盐水凝集法和凝胶微柱法。盐水凝集法因简单易行在临床上广泛应用，其又分为玻片法和试管法，结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。本文通过对418名学生的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析，探讨ABO血型鉴定中的影响因素。
&&&&&&& 1& 资料和方法对象
&&&&&&& 2010年8月 2012年8月间在我院住院的418名患者，年龄1.5～78岁，平均年龄38岁。每名患者同时用玻片法和试管法两种方法进行ABO血型鉴定。
&&&&&&& 标本采集：抽取EDTA抗凝血，在2小时内完成ABO血型鉴定操作。
&&&&&&& ABO血型鉴定方法：正定型法：① 玻片法：取清洁且带有圆形凹陷的推片1张，并注明A、B：字样。将抗A试剂、抗B试剂各1滴分别滴于玻片上A、B处。分别取等体积待检血样(5％红细胞悬液或全血)于抗A试剂和抗B试剂。另取洁净推片1张，标明A细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和0型试剂红细胞悬液1滴。用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片(或瓷盘)并观察血型凝集(或溶血)反应，也可用低倍镜观察结果。②试管法：取洁净小试管(内径10mm&60mm)2支，分别标上抗A、B字样，分别加入抗A、抗B标准血清各1滴，于相应标记的试管；然后分别加入被检者5％红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀；以1000转／分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。③反定型法：首先将待检血离心(2500r／mm，3min)分离血清；取小试管3支，分别标记A、B、O，各管加被检者血清1滴，然后按标记分别加入5％ 的A、B、O型标准红细胞生理盐水1滴，混匀；以1000r／m比离 l～,lmin后取出试管，轻摇管底，观察凝集。
&&&&&&& 结果判断：凝集判断标准红细胞均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性，红细胞出现凝集为阳性。
&&&&&&& 血型试剂：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒，上海血液生物医药有限责任公司；抗A、抗B血型鉴定单克隆抗体；长春博德生物技术有限公司提供。
&&&&&&& 统计学方法：全部数据采用SPSS1 1.5统计软件包处理，计量资料以x-&s表示。计数资料用频数和率表示，计数资料比较用x2检验。P&9.05有差异，有统计学意义。
&&&&&&& 2& 结果
&&&&&&& ① 玻片法和试管法的血型鉴定结果见附图：从图中可以看出不论是玻片法还是试管法，418名学生的血型分布是一致的，即O型最多，之后依次为B、A、AB，即O&B&A&AB。② 玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同，而A型、B型和O型人数不完全一致，存在一定的差异，具体数据见附表。
&&&&&&& 3 讨论&
&&&&&&& 血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定(blood typing)是保证输血安全的前提条件。此文笔者就临床血型鉴定的经验和体会进行简单交流。 　　
&&&&&&& 3.1 医务人员的问题
&&&&&&& 临床医生在填写输血申请时，没有做血型检测，单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误；临床护士在抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号，仅凭印象，抽了其他人的血液而造成血型报告错误或交叉配血不合；检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错误。
&&&&&&& 3.2 被检红细胞
&&&&&&& ①血型测定的错误血型：检测时，因患者红细胞悬液浓度过低，又只用肉眼观察结果，使之在血型抗原较弱的情况下，微弱、细小的凝集未看到，而造成定型报告错误。②标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本，红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的抗T抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤所致的高球蛋白血症在做ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时，可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。③冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，4℃条件下，正常人血清中的冷凝集素效价低于1：16，冷凝集素效价增高是导致献血者血型正反定型不符的常见厩。在较低温度条件下，冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象，凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37qC不能凝集标准RBC和自身RBC，因此不会造成血型误判，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集，容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素，在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞或45％热放散，或用经4cI=处理的冷凝集素被自身红细胞吸收后的血清进行血型鉴定，以排除冷凝集素的干扰。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。④ABO亚型在血型血清学试验中是导致正反定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原，是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。在A抗原中主要为A，和A，其他A亚型不多见，而B亚型通常比A亚型更少。⑤ABO血型抗体减弱：ABO血型规则抗体合成量的不足也是造成正反定型不符的重要因素。当献血者血清中抗一A和抗一B效价减弱，其反定型格局总表现为AB型。在这种情况下，可以通过增加血清用量，降低反应温度，延长反应时间，应用低离子强度溶液等方法，检出低效价的抗一A和抗一B。
&&&&&&& 3.3 实验器材
&&&&&&& ① 所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。②用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须设置对照。③红细胞浓度按要求配制，红细胞与相应抗体的比例适当。④反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。
&&&&&&& 3.4 其它因素
&&&&&&& ① 经输血或妊娠等免疫刺激产生，在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N和抗一A等。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应，而这种反定型结果与A或B抗原无关，所以导致ABO血型鉴定时正反定型结果不一致。②类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人，红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型。因此，感染体征病人配血不合时，应考虑类B。③磺胺类药物引起的凝集有人报道一个B型的献血员阑尾术后用氨苯磺胺，3个月后，其血清能凝集A、AB型的红细胞，也能凝集B型的红细胞。另外，注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗体，而青霉素已吸附在红细胞表面，当此红细胞与含有青霉素抗体的血清相遇时便发生凝集。
&&&&&&& 总之，在患者ABO血型鉴定试验中，如果出现正反定型结果不符，不能轻易发报告，否则，可致ABO血型的误判。因此，在具备认真的工作态度的基础上，还需要不断积累丰富的血型鉴定经验，对异常结果进行系统全面地分析，查明原因，以获得ABO血型的准确定型，确保安全输血。
[1] 张悦，袁丽杰.构建医学检验专业技能培训体系的规划与设计思路[q].现代生物医学进展，)：127.
[2] 王莉，田素莹.在临床实践教学中培养医学生人文执业素质[J].中国医疗前沿，)：41.
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