母血游离胎儿DNA在21-三体、18-三体产前筛查的应用研究
　　目的 采用大规模前瞻性研究设计评价第二代测序技术对母血浆中游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA, cffDNA)进行无创染色体非整倍体检测的灵敏度和特异性。比较传统血三联筛查与第二代测序技术应用于孕中期产前筛查的检测效率,评价第二代测序技术对母血浆中游离胎儿DNA进行无创染色体非整倍体筛查效率及临床可行性。 材料与方法 采用严格的前瞻性双盲试验设计,收集2011年4月-2011年10月于北京协和医院、海淀区妇幼保健院就诊,且满足≥孕11周,单胎妊娠,孕妇本人不是染色体异常患者,且孕妇在抽血当天无侵入性手术经历,孕妇无异体输血、移植手术、干细胞治疗等经历的孕妇外周血,应用12-plex高通量Hiseq2000平台进行试验,将测得的序列与人的参考基因组比对并作统计分析,计算各个染色体Z值,检测胎儿染色体非整倍体异常;同时对低龄孕妇进行中孕期血清学筛查。对血清学筛查阳性或者cffDNA检测阳性者在知情同意基础上进行细胞遗传学诊断;高龄孕妇全部进行细胞遗传学诊断,胎儿核型分析作为阳性样本检测金标准。对血清学筛查阴性与cffDNA检测阴性者,随访至胎儿出生后。 结果 1、本次共收入2236例孕妇,全部为单胎妊娠,其中妊娠结局随访数据失访138例(6.2%);cffDNA检测试验失败84例(3.8%),其中74例有随访数据。有效样本数2024例。 2、中孕期血清学筛查1741例,筛查高危共249例,占14.3%(249/1741)。其中21三体(Down s Syndrome, DS)高危246例,18三体高危3例。 3、cffDNA检测收集样本2236例,结果报告2152例,实验失败84例(3.8%)。cffDNA检测检出22例阳性：12例DS,1例T13,6例T18,2例X0,1例XXY,综合阳性率1.02%(22／2152)。 4、随访到妊娠结局2098例,随访率为93.8%。行侵入性产前诊断432例,发现有临床意义的染色体异常共29例,均行引产,其中13例DS,1例T13,5例T18,5例45,X(其中一例为嵌合型),1例47,XXY。主动引产3例;发现胎儿多发畸形共19例,以泌尿系统、心血管系统异常多见;不良妊娠结局10例,为胎死宫内、晚期难免流产,胎儿外观均未见异常。 5、cffDNA检测检出1例T18假阳性,1例XXY假阳性;漏诊1例T21,2例45,X(其中1例试验失败),1例XXY。 6、cffDNA检测与传统血清学筛查针对21、18、13号染色体检测,总的假阳性率分别为0.05%(1/2005)、14.05%(243/1730),阳性预测值94.74%(18/19)、2.41%(6/249),检出率94.74%(18/19)、54.55%(6/11)。 7、cffDNA检测与传统血清学筛查针对21、18、13、X、Y染色体检测,总的假阳性率0.10%(2/2000)、14.08%(243/1726),阳性预测值90.91%(20/22)、2.41%(6/249),检出率83.33%(20/24)、40%(6/15)。 8、cffDNA检测技术检测DS的灵敏度为92.3%(12/13),特异度为100%();检测18、13三体综合症的灵敏度分别100%(5/5)、100%(1/1),特异度为99.95%()、100%(),检测X0、XXY灵敏度较低,特异度分别为100%()、99.95%()。 9、18例IVF妊娠(全部为单胎),占0.9%(18/2236)。其中1例核型为46,XY,-21,+21rob(21;21),inv(9),cffDNA检测结果T21,余17例二者均未发现异常。 结论 1、cffDNA产前检测技术检测常见染色体非整倍体异常T21、T18假阳性率低、检出率高,阳性预测值较高,初步证明了cffDNA检测应用于中孕期产前筛查是可行的。 2、cffDNA产前检测技术筛查效率优于血清学筛查。 3、可以覆盖13号染色体与性染色体等目前血清学筛查无法覆盖的染色体疾病。 4、cffDNA检测产前检测技术可以覆盖IVF人群。……
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[文献类型]：硕士论文
[文献出处]：北京协和医学院2012年
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streck全血无细胞血浆DNA采集，稳定储存和运输试管
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公司名称：世联博研（北京）科技有限公司
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产品描述:【产品名称】streck 218962血液保鲜管【STRECK血液保鲜管】抽血量10.0ml抗凝血剂K3EDTA添加剂专有稳定剂使用前储存室温保存【STRECK血液保鲜管说明】STRECK血液保鲜管是一种直接抽取全血的，可用于无细胞血浆DNA采集，稳定储存和运输的试管。本STRECK无创管亦可稳定保存有核细胞基因组DNA。注：本产品仅可用于科学研究，不可用于医学诊断。【STRECK血液保鲜管产品原理】血液中的核酸检测，包括血浆中的无细胞DNA检测和分析，在疾病诊断中是一个新兴和可靠的领域。虽然健康人体的血浆中只有少量无细胞DNA，但血液循环中的无细胞DNA水平的增减与许多临床疾病有关。研究表明，STRECK无创管作为一种非侵入性的，快速灵敏的诊断工具；可应用于急性病的分子诊断和检测，以及胎儿遗传疾病的产前诊断。在无细胞DNA的分析过程中，样品的处理、运输和加工过程极易受染，导致有核血细胞分解，进一步释放细胞基因组DNA。同时，因核酸酶活性而产生的无细胞DNA降解也会带来系列问题。STRECK血液保鲜管中所含的防腐剂能稳定有核血细胞，防止释放细胞基因组DNA，抑制无细胞DNA的核酸酶介导降解，有助于无细胞DNA的整体稳定。STRECK血液保鲜管在保护细胞表面抗原性，维持细胞形态的同时，加强无细胞DNA的提取、检测和分析。采集在STRECK无创管中的样本，可在6-37℃下稳定保存14天，方便样品的采集、运输和储藏。STRECK血液保鲜管可用于临床研究、药品发现和加强诊断检测。试剂STRECK血液保鲜管含有K3EDTA抗凝血剂和一种液态的细胞防腐剂。【STRECK血液保鲜管特点】省时省力STRECK血液保鲜管提供了一种处理病人血液样本的检测和分析无细胞DNA的方案，比传统的血浆样本制备方法更节省人力和时间。方便统筹STRECK血液保鲜管中的样本可在室温下保存长达14天，样本采集、运输和储存更加方便。用途广泛STRECK无创管获得的高品质无细胞DNA可用于各种临床医学研究、药品发现和诊断检测。结果准确STRECK无创管只需对样本进行极少的处理，增强样本的稳定性和无细胞血浆DNA的提取，将无细胞DNA样本制备的变异风险降至最低。【STRECK血液保鲜管使用说明】直接抽取方法A、根据CLSI H3-A61中的描述，通过静脉穿刺采取样本。B、遵循CLSI H3-A61中所列的顺序进行抽血。C、完全填充试管D、拔除试管上的连接管，并立刻轻轻倒转8至10次，使管内液体混合（如图示）。不充分混合或延迟混合均可导致不正确的检验结果。操作程序1、根据CLSI文档的H3-A61采集血液进入试管。2、采集完成后，请在指定温度范围内运输和储存。3、根据仪器制造商的说明进行无细胞DNA BCT的提取。注意：A、STRECK血液保鲜管不会稀释血液， 因此，无需进行稀释因数校正来获取绝对数值。B、正如大多数临床试验标本一样，溶血、黄疸和脂血均能影响STRECK无创管中保存血样所得的检测结果。无细胞血浆DNA和细胞基因组DNA的提取：1、无细胞血浆DNA和细胞基因组DNA的提取可通过大部分市售试剂盒完成。2、如欲获取最佳结果，在60℃离液盐中加入一个蛋白酶K处理步骤（≥ 30 mAU/ml），提取无细胞DNA需1小时，提取细胞基因组DNA需2小时。限制1、未使用的试管应保存在18-30℃之间。2、抽取进其他抗凝血剂或防腐剂中的样本，在STRECK血液保鲜管中可能会导致凝结。参考：临床试验标准委员会标准第六版认证。H3-A6，通过静脉穿刺采集诊断血液样本程序；【注意事项】1、仅可用于科学研究，不可用于医学诊断。2、装有样本的STRECK血液保鲜管不可冷藏，以免试管发生破裂。3、请在试管的有效期内使用。4、试管不可用于采集注射物。5、切勿稀释或添加其他成分。6、试管灌装过量或偏低均可造成血液和添加剂比例失调，可导致分析结果不正确或降低产品性能。7、警告A、玻璃可能发生破裂，在处理过程中请做好预防措施。B、所有与产品接触的生物标本和材料都将被视为是具有传染性的生物公害，请按各地相关法规进行处理。避免接触皮肤和粘膜。C、本品应按传染性医疗垃圾处理。D、拔除或重新插入试管塞时，可轻轻摇晃塞子，或抓紧塞子的同时向外扭拉。切勿用拇指推出塞子，容易造成试管破裂而受伤。8、防止回流由于STRECK血液保鲜管含有化学添加剂，应尽量防止液体从试管内流出。为预防回流发生，请遵循以下预防措施：a) 在采集过程中请将病人的手臂保持向下姿势。b) 手持试管时尽量将塞子向上。c) 血液开始流入试管内或使用两分钟后解开止血带。d) 在采集过程中，试管内物体不可与塞子或针接触。【STRECK血液保鲜管储存及运输】1、在18-30℃环境下，STRECK血液保鲜管可在保质期内稳定储存。2、切勿将空的STRECK血液保鲜管冷藏。在极端温度条件下运输时需采取适当的隔离措施。3、采集在STRECK血液保鲜管中，用于无细胞DNA分析的血液样本，在6-37℃环境下可稳定储存14天。
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