液相色谱（LC）
主题：【讨论】液相色谱糖柱为什么不能进有机相
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我用得是waters公司的sugar-pak1,因为装柱子前忘冲柱子了，所以把前面人用的正己烷和异丙醇（98：2）冲进柱子里了，柱压很高，流速0.1ml/min时的柱压为4.3MPa，用该柱子给定的再生溶液即500mg/L的EDTA二钠钙溶液低速冲了6h柱压也没有下降的趋势，据说这样柱子就毁了没有其他办法了吗？高手帮帮忙，谢谢谢谢！
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填料是什么？
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Sugar-pak1使用注意事项 (网上找的)将Sugar-pak1连接在HPLC系统上. 设置流速在0.2-0.3ml/min直到柱温达到70℃. 在柱温达到70℃时,流速增至0.6ml/min,流速变化应该以0.1ml/min为增量,待反压稳定后再继续增加流速. 最大流速不应超过0.6ml/min.Waters Sugar-pak1柱是用来分析糖产品,甜菜,甘蔗,淀粉这些作物在水解过程中的产物,以及用来做糖产品的质量检查,能够将葡萄糖,果糖,麦芽糖, 麦芽多糖从典型的玉米糖浆中的高聚物中分离出来.也可用于酒精的发酵过程中跟踪监控发酵糖的减少和酒精的产生.流动相要求:此色谱柱由钙基树脂填装而成,氢离子或其它离子会取代钙离子,或是引起与柱中糖的置换,尤其是像蔗糖这样易于置换的糖.因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子来保持平衡和防止与样品的置换推荐的流动相为去离子的无菌水,含EDTA钙盐约0.0001M(50mg/L).水应去离子化,大于2兆欧的电阻率,水中应不含多价离子,尤其是过渡金属元素和重金属离子. 使用前需用真空泵通过0.45um或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒.溶剂过滤推荐使用溶剂过滤器(可从Waters公司获得:110V,部件号:WAT085113,. 220V, 部件号:WAT085102,)合适的滤膜为Millipore的HAWP04700(Waters 部件号:WAT085117).虽然流动相已经在真空过滤时脱气,但还是应该通过以下程序来完全脱气.如果系统连续使用不止一天,请将流动相置于锥形瓶中,放在搅拌器/电炉上,用铝箔封上瓶口以减小蒸发,用前将流动相烧至沸点几分钟,使用时保持温度70-90℃.这个操作能够保证气体(尤其是CO2)不再重新溶解在流动相中,同时也会防止微生物的滋生.EDTA 钙盐通常有以下几个通用的名字 Calcium di-sodium(ethylene dinitrilo)tetra-acetic acidCalcium di-sodium ethylene diamine tetraacetateCalcium di-sodium edentate要保持装流动相的容器干净,有盖,且新鲜,流动相需每24小时重新配制.平衡:为了保证新柱能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡,我们推荐使用以下程序.将柱子按照通常使用的反方向安装(标签上的箭头指向柱子的入口端).也可用反冲阀. 用至少100ml的0.001M的EDTA钙盐溶液在90℃用0.5ml/min流速反冲柱子.500mg/L的EDTA钙盐的浓度大约为0.001M. 将柱子反过来(回到通常的流动方向)用分析所用的流动相冲柱子,(用与上一个步骤同样的条件)直到基线平稳方可使用. 注意事项:通常推荐压力不超过2000psi最大流速不超过0.6ml/min(70℃). 不要在流动相中使用氯化钙,硝酸钙以及其它的强酸的钙盐,这样会腐蚀柱子,破坏填料.. 流动相中有机相的最大含量为5%(V/V),样品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和异丙醇不会影响柱子的性能.. 柱子的温度不要超过95℃.通常高温会带来高的分辨率,但在90-95℃之间几乎没有变化,70℃以下对于许多糖,就异构体的分离来说不能提供足够的分辨率,对于乙醇的定量,柱温应在75℃.. 柱温的快速变化不会对柱子带来什么反作用,如果柱子在60℃以下,那么最高的流速为0.2ml/min,由于水在低温时的高的粘度因此高的流速会带来很高的反压.. 定期反向冲洗色谱柱(在每5L流动相之后),这将会有效地延长色谱柱的寿命.. 流速的变化不能超过0.5ml/min,流速变化应该缓慢进行,建议改变流速时以0.1ml/min为增量,直到反压稳定后再继续增加流速.任何的流速变化均要在不超过0.5ml/min下进行.在溶剂输出系统中压力限制的设定应比普通的工作压力高出几百psi,从而避免任何仪器未被注意的额外压力升高.. 如果分析的是不易于置换的糖,那么就没有必要在流动相中使用EDTA Ca,纯水需过滤和脱气,如果要保持柱子适宜的性能,柱子的再生和流路的方向变化要经常进行.保存条件:(72小时以上不用). 关掉柱温箱,停泵.. 当柱子冷却,从系统中移出,换上起初随柱子的堵头,柱子在保存过程中要防止挥干,通常的流动相都可作为保存柱子的适宜溶剂.在冰箱中5℃保存(不要冷冻),以防止微生物的滋生.. 柱子拆掉后要用不锈钢堵头装在系统上,冲洗整个液相色谱系统先用水,然后用甲醇,最后系统保存在甲醇中.在关机后的重新启动 当开启带有一个柱温很低的柱子的系统时,打开柱温箱,流速开始不要超过0.2ml/min.待系统在此条件下稳定至少二十分钟达到工作温度后再按通常的工作条件操作.整夜的停机(放置少于72小时)柱子留在系统中流速降到0.2ml/min.循环溶剂,将流出的管路插入流动相瓶中,如果不想开着柱温箱,那就关掉泵和柱温箱让其冷却.在整夜停机后的开启 打开柱温箱,流动相的流速不要超过0.1-0.2ml/min,保持此流速至少二十分钟直到达到柱子工作所需温度,然后再按照通常分析条件来设置.故障检查 Sugar-pak1是以树脂的膨胀形态紧密装填的,如果样品进行了很好的前处理,那么大部分产生的问题都和树脂填料有关,由于单向阀的损坏或是突然地反压增加, 脆弱的树脂填料可能被泵的波动冲到柱子的后筛板处.反压的增加是否会发生,要经常检查在线过滤器以及保护柱中是否截留了微粒.如果不是此问题,那么很可能是树脂部分地堵在了出口端的筛板处,检查这种情况是否发生需要关掉泵,将柱子的流路方向反过来,然后泵流速开到0.1ml/min,20分钟达到工作温度后再设至工作时的流速.柱子的再生步骤:Sugar-pak1柱子的再生方法根据相关的样品纯度有不同的变化,越是天然物,(尤其是含有那些重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品)越需要经常地对柱子进行再生,因为它们会与柱子发生置换. 可以通过注射蔗糖来测试柱子的置换,如果蔗糖的峰有拖尾,那么柱子需要做以下处理:配制500ml的再生溶液(500mgCa EDTA/L), 把柱子流路方向反过来,在90℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜.再生之后回到正常方向使用.当柱子反冲时很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗,用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程
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ID：yuan_log
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糖柱子用起来这么复杂呀，看来要多多学习
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ID：geleny
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您找的这分资料我之前也看到了，可是解决不了我的问题，不过您找到已经很辛苦了，多谢
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原文由 geleny 发表:我用得是waters公司的sugar-pak1,因为装柱子前忘冲柱子了，所以把前面人用的正己烷和异丙醇（98：2）冲进柱子里了，柱压很高，流速0.1ml/min时的柱压为4.3MPa，用该柱子给定的再生溶液即500mg/L的EDTA二钠钙溶液低速冲了6h柱压也没有下降的趋势，据说这样柱子就毁了没有其他办法了吗？高手帮帮忙，谢谢谢谢！可以帮你
Last edit by emoc98311
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ID：easyboy
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可以使用其他的分析糖的柱子啊，我们的就可以用乙腈做流动相啊？？？日本的糖柱也好用且便宜哦！
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是阳离子交换填料，具体是什么我也没细看，我再看看
我想当元帅
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答非所问！建议你打电话到沃特斯公司去问问，大公司都有自己的应用实验室，专门解决这些问题的。
guthouyizh07
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ID：guthouyizh07
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糖柱在本质上属于离子色谱柱更为合理些，其交换基团主要为键合胺根离子，有机物进入柱子后会封住交换基团，并产生溶胀现象，因此出现柱压升高。糖柱同样也不能用于离子对色谱分析，如四氟丁酸等离子对实试剂同样会产生这样的效果。& & 您的柱子能不能再用就看您的造化了，咨询一下制造商，估计要恢复初始状态是很困难的。糖柱使用注意_百度文库
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[求助]C18反相色谱柱反冲的具体步骤！
柱子最近有点脏，标准品出峰全分叉，正常的95:5的甲醇水溶液冲洗2天，没有什么效果，打算拆下来反冲柱子试试。本人是液相菜鸟，对如何拆洗一窍不通，请教有过经验的前辈教一下：拆洗柱子的具体步骤。
还有几个小问题：需要在拆柱子前将柱子填满甲醇是吧？
& &&&反冲时液体不能流经检测器是吧？如何控制呢？
由于色谱柱内的填料有序，反冲时，如果流速还是与正常使用一样大，很可能使填料压向进口一端，在柱的另一端出现空隙。严重影响柱的性能。因此，把柱拆下后，反方向连接，让流动相从柱出口一端流入柱，流速尽可能小。
使用甲醇水不一定能冲洗干净，可在流动相中加入一定比例的四氢呋喃。
如果冲洗后还是效果不佳，应考虑是否无机物的污染，改用离子对试剂冲洗。
&&柱冲洗后，用冲洗流动相，再用甲醇封柱。
反冲时，一般可以流经检测器，不像离子色谱那样可能会影响检测。如果可能的话，不经过检测器，直接从废液管排出。
我曾用甲醇水95:5正常冲洗2天，但没有效果。反相能好些吗？加入四氢呋喃有什么作用呢？
反冲时，紫外检测器需要关吗？
我之前曾用甲醇低流速0.2ml冲了一夜，但效果不大。
可以考虑加入四氢呋喃，因为甲醇的清洗能力不够强，如果色谱柱说明书提示可以用丙酮，也可加入丙酮，清洗有机物污染效果会更好。经过这些处理（清洗2-3天）如果还是改善不大，应考虑无机离子如铁、铝等易沉淀的离子污染。反冲时检测器要关，因为检测器的灯有一定寿命，通常，测定完成后，可先关检测器。
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主题：【求助】安捷伦柱子压力高，反冲仍然高，该如何处理？高手请进
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发表于： 18:54:19
手头所用的柱子，aglient， sax柱子，做样品用盐和甲醇冲洗的过程中，因紧急停泵，压力升高，后来咨询工程师，反冲过一段时间（0.1流速，2h），反冲压力正常，正向后半天，压力又升上了，继而正向大比例的水小流速冲洗。现又反冲，0.4流速，3h，大约30倍柱体积，反相压力也很大了。期间，因为放假，停止冲洗，用九十的甲醇保存。0.4流速反冲时，压力大2600psi，巨高。比较愁，请问该如何处理呢？
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ID：wangjianhua1102
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这个是液相版块问题。逐步检查看是那里压力比较高。
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ID：houjjun
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先卸掉色谱柱观察压力是否正常，判断是不是柱压高，如果是的话，卸开柱头今夜接头，拆下塞板超声清洗装上，应该就没问题了
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ID：wangjianhua1102
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从检测器处开始排除
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ID：zhonghuashendun
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怎么会紧急停泵后压力升高呢？楼主检查过仪器系统的压力吗？
xiaowang268
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ID：xiaowang268
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先看看系统有没有堵塞吧
xiaowang268
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ID：xiaowang268
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系统中有小颗粒进去也会时不时产生高压的
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ID：jncxyy2012
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有两种可能：1.泵单向阀内有盐析出，有部分堵塞。2.色谱柱进口端柱头和柱塞版被污染。
zhaohua8011
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ID：zhaohua8011
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不接色谱柱或者换根色谱柱试一试！
zhaohua8011
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ID：zhaohua8011
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将色谱系统接双通用温水冲洗！
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ID：v2754831
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色谱柱好比爱情，一旦出现了问题，最好不要办法不是怎么去解决、去弥补，而是选择一个新的开始。至于你的色谱柱可以联系一切安捷伦售后服务工程师，估计他们也不是给你修好，而是换了新的发给你。