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蚕素BombyxinA-4在家蚕杆状病毒表达系统中表达功能及研究.pdf52页
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浙江理工大学硕士学位论文 摘要 蚕素是家蚕体内一类5kD大小的神经肽,与人的胰岛素有40%左右的序列同 源性,属于胰岛素家族。通过国内外学者的研究,其部分生物学功能己被证实。 蚕素能降低家蚕血液淋巴内糖类的含量,能够提高中肠以及肌肉等组织中海藻糖 酶的活性,并且发现葡萄糖能刺激家蚕体内蚕素的分泌。由于蚕素在天然蚕蛹中 的含量极低,所以我们尝试利用基因工程的方法来提高其在蚕蛹中的含量并对其 功能作进一步的研究。 本研究筛选一条与人类胰岛素基因同源性较高的蚕素基因BombyxinA.4,根 据其ORF序列,利用重叠延伸PCR的技术,扩增得到B链和A链串连在一起 的目的片段鲋,再将获得的目的片段克隆到表达载体pGEX-4■l上,将重组表
达载体pGEX-4T-l?删,转化感受态细胞E.coli
诱导表达后,收集菌体,利用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化得到了1.34 mg/mL 的目的蛋白,并免疫新西兰雄兔,获得检测抗体。
病毒vBmBombyxinA-4,再将该重组病毒接种于家蚕蛹,待大部分家蚕蛹出现明
显病毒感染症状后,收集并进行Western blotting检测。结果表明蚕素
BombyxinA-4在家蚕蛹中得到过表达,该表达产物能够促进BmN细胞的生长, 同时利用正常的家蚕蛹和感染重组病毒的家蚕蛹分别制成冻干粉,在高血糖小鼠
模型上进行了降血糖作用的口服给药研究,结果发现感染重组病毒的家蚕蛹比正
常家蚕蛹的降血糖作用明显。 感染带有蚕素基因BombyxinA.4的重组病毒家蚕蛹,是一种潜在的降血糖类
蛋白药物,利用蚕蛹的高效表达系统,为开发新型的降血糖类的药品和保健品打
下了良好的基础。
关键词:蚕素;BombyxinA.4;Bacmid;Bac to.Bac表达系统;家蚕 浙江理工大学硕士学位论
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