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临床3种血涂片常用染色方法的比较分析
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血涂片检查
血涂片是血液细胞学检查的基本方法，应用极广。特别是对各种血液病的诊断有很大价值。但血片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘;染色良好的血片是血液学检查主要基本技术之一。
血涂片检查正常值
体内菌群的种类和比例正常，人体处于动态平衡健康状态。
血涂片检查临床意义
异常结果：　一、异常白细胞形态：　(1) 中性粒细胞的毒性变化，多见于严重感染及中毒，密切观察白细胞数量及中性粒细胞的毒性变化对判断感染的程度、病人抵抗能力和判断预后有重要的临床价值。　(2) 中性粒细胞的其它异常变化：① 巨多分叶核中性粒细胞——多见于巨幼细胞贫血。② 棒状小体——主要见于急性非淋巴细胞白血病。③ 其它异常粒细胞 多是与遗传有关的异常形态变化。　(3) 异型淋巴细胞，多见于严重的病毒感染、过敏及中毒。其中发热、颌下及颈部多处淋巴结肿大、白细胞增加、异型淋巴细胞超过10%的病人，诊断传染性单核细胞增多症的可能性较大。部分儿童血中也可见到某一类型的异型淋巴细胞，但不超过3%，无临床诊断价值。　(4) 涂抹细胞或篮状细胞，见于淋巴细胞白血病。　二、血液系统疾病可影响到红细胞的质量，特别是贫血病人，不仅其红细胞的数量和血红蛋白浓度降低，而且会有相应特异的红细胞形态改变，表现在红细胞大小、形状、染色性质和内涵物的异常。　需要检查的人群：有异型淋巴细胞，白血病，异常粒细胞，巨幼细胞贫血，淋巴细胞白血病，贫血等症状者。
血涂片检查注意事项
不合宜人群：没有。　检查前禁忌：注意正常的生活饮食习惯，注意个人卫生。　检查时要求：积极配合医生。　(1) 玻片的清洗：新玻片常有游离碱质，因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24小时，然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20分钟，再用热水将肥皂和血膜洗去,用自来水反复冲洗，必要时再置95%乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烤干备用。使用玻片时只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁，干燥，中性、无油腻。　(2) 细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须化学清洁，配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则各种细胞染色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至造成错误。　(3) 一张良好的血片，要求厚薄适宜，头体尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。　(4) 血膜未干透，细胞尚未牢固附在玻片上，在染色过程中容易脱落，因此血膜必需充分干燥。　(5) 染色时间与染液浓度，室温高低，细胞多少有关。染液越淡，室温越低，细胞越多，所需染色时间越长或应适当增加染液量。因此染色时间应视具体情况而定.特别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件。　(6) 染液不可过少，以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净。　(7) 冲洗时应用流水将染液冲去，不能先倒掉染液，以免染料沉着于血片上。　(8) 染色过深可用甲醇或酒精适当脱色，最好不复染，必须复染时，可将染液先稀释好再复染。　(9) 染色时应注意保护血膜尾部细胞，不能划掉。因为体积较大细胞常在此处出现。
血涂片检查检查过程
血涂片的制作及血细胞观察：　(1) 取末捎血一滴置于玻片的一端，左手持载玻片，右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动，载片上保留下一薄层血膜。　(2) 血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动，使血膜迅速干燥，以免血细胞皱缩。　(3) 用蜡笔在血膜两侧划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。加瑞氏染液2-3滴，使覆盖整个血膜，固定0.5-1.0分钟。滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水，与染料混匀染色5-10分钟。　(4) 用清水冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干，即可置血涂片于显微镜下进行镜检。　(5) 白细胞分类计数。
血涂片检查相关疾病
淋巴丝虫病，巴贝虫病，充血性脾肿大，羊水栓塞，小儿溶血性贫血，脑型疟疾，糖原贮积病Ⅱ型，四肢淋巴水肿，巴尔通体病，新生儿败血症
血涂片检查相关症状
贫血貌，重度贫血，急性贫血，慢性贫血，贫血
企业信用信息做好血液涂片和正确染色是血液细胞检验的重要步骤，涂片和染色效果的好坏直接关系着检验的结果，必须以认真负责的态度注意操作过程的每一个环节。
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一．玻片的清洁
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1．一般清洗法
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（1）将玻片放入肥皂或洗衣粉
内容载入中...
做好血液涂片和正确染色是血液细胞检验的重要步骤，涂片和染色效果的好坏直接关系着检验的结果，必须以认真负责的态度注意操作过程的每一个环节。
一．玻片的清洁
1．一般清洗法
（1）将玻片放入肥皂或洗衣粉水中煮沸20分钟。
（2）用热水将肥皂和血膜等污物洗去，再用自来水反复冲洗，最后再用蒸馏水冲洗3～5次。必要时再置95%乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烘干备用。新玻片常有游离碱质，因此应用清洁液或10%盐酸浸泡24小时，然后分别用自来水及蒸馏水彻底洗涤。
2．油污载片清洗法
（1）清洗液
甲液：10g/L的过锰酸钾水溶液，乙液：25g/L的草酸水溶液。
（2）清洗方法：将用过的玻片投入甲液数小时，取出后再投入乙液数小时，然后用自来水和蒸馏水冲洗干净后再置95%乙醇中，以毛巾擦干净即成。久用后甲液可出现泥沙样沉淀，乙液有乳白色沉淀，可用棉花滤去再用，如乙液褪色应重新配置。
二．血涂片制作
取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接触血滴后稍停。血液即沿推片散开，将推片与载片保持30～45&角，向前平稳均匀推动推片，载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。
一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。
涂片时，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。太薄的血膜片50%的白细胞集中于边缘或尾部，不利于白细胞分类。如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。
1．瑞氏染色法（Wrightstaining）
本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞中的特异性颗粒着色较好，但对核的着色较差。
（1）原理瑞氏染粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以E-代表伊红，其反应式为：
M+Cl-+Na+E&ME&+NaCl
美蓝　伊红伊红化美蓝（瑞士染料）
将适量的ME溶解在甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用可使ME溶解，解离为M+和E－，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。甲醇的另一个作用是有很强的脱水作用，可将细胞固定为一定形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。
细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，因此该物质又称为嗜酸性物质。如，红细胞中的血红蛋白，嗜酸性粒细胞胞浆中的颗粒为碱性物质，这些物质可与伊红结合染成红色。细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色，该物质又称嗜碱性物质，如：嗜碱性粒细胞中的颗粒为酸性物质可与碱性染料美蓝结合染成蓝色。细胞核主要由脱氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形式的核蛋白所组成，这种强碱性的物质与瑞氏染液中的酸性染料伊红结合成红色，但因为核蛋白中还有少量的弱酸性物质，它们又与染料中的碱性染料美蓝作用染成蓝色。但因含量太少，蓝色反应极弱，故核染色呈现紫红色。幼稚红细胞的胞浆和细胞核的核仁中含有酸性物质，它们与染液中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色。当细胞含酸、碱性物质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。当胞浆中的酸性物质消失时，只与染液中的伊红起作用，则染成红色，即所谓正色性。
①.瑞氏染液
瑞氏染料（粉）1．0g
纯甲醇（AR级以上）600．0ml
将全部染料放入乳钵内，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少半小时），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒人洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。密闭保存。
②.磷酸盐缓冲液（pH6．4～6．8）
磷酸二氢钾（KH2PO4）0．3g
磷酸氢二钠（Na2HPO4）0．2g
蒸馏水加至1000．0ml
配好后用磷酸盐溶液校正pH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
①用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。
②用瑞氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定细胞0．5～1分钟。
③滴加等量或稍多的缓冲液，用吸球将其与染液吹匀，或者摇动玻片染色5～10分钟。
④慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后（或用滤纸吸干），即可镜检。
2．姬姆萨染色法（Giemsastaining）
（1）原理姬姆萨染料由天青、伊红组成，其染色原理与瑞氏染色法基本相同，但姬姆萨染色
法对细胞核着色较好，结构显示更清晰，而对胞浆和中性颗粒则染色较差。
姬姆萨（Giemsa）染料1．0g甘油66．0ml甲醇66．0ml
将1．0g姬姆萨染料粉末全部倒入盛有66．0ml甘油的圆锥烧瓶内，在56℃的水浴锅上加热90～120分钟，使染料与甘油充分混匀溶解，然后加入60℃预热的甲醇，充分摇匀后置棕色瓶中，于室温下7天，过滤后才能使用。此种染液放置时间愈久，细胞着色越佳。
①.将干燥血片用甲醇固定3～5分钟。
②.将固定的血片置于被pH6．4～6．8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染色）稀释10～20倍的姬姆萨染液中，浸染10～30分钟（标本较少可用滴染法）。
③.取出用水冲洗，待干后镜检。
3．瑞氏姬姆萨混合一次染色法
I液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0．3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯）研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml，收集于棕色瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，以后存放1周即能使用。
Ⅱ液：pH6．4～6．8磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾（无水）6．64g磷酸氢二钾（无水）2．56g加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml。
操作　平置玻片于染色架上，滴加染液3～5滴，使其迅速盖满血膜，约1分钟后，滴加缓冲液5～10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，5～10分钟后用水冲去染液，待干。
四．血涂片的质量控制
1．血膜片的质量要求是厚薄均匀适度，低倍镜下观察全片，细胞不重叠，头尾及两侧有一定的空隙，血膜头部有明确的病人标志。
2．些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此蜡笔划线时应注意保存血膜尾部细胞，血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。
3．配制染料须用优质甲醇，稀释染液用缓冲液，因为缓冲液的pH对细胞染色的影响很重要。在偏酸性环境中正电荷增多，在偏碱性环境中负电荷增多，又因为细胞着色对氢离子浓度十分敏感。如果染色偏碱，原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色，造成识别困难。冲洗须用中性水，虽亦可用自来水（但不能保持稳定）。
4．对所用染液应进行预染试验，新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天青B，天青B对细胞核的着色效果比美蓝好，因此，瑞氏染液放置时间越长染色效果越好，临床上称之为成熟。判断染液成熟程度的简易方法是用正常优质血片做预染试验，先用低倍镜观察载有染液的血片，认为着色满意后，再按照染色后冲洗顺序最后用油镜镜检，这样不仅可了解染液的成熟程度，而且还可以选择合适的染色时间，供临床标本染色时参考。
5．染液与缓冲液的比例要适当，以1∶27为宜。一般说来缓冲液稀释度愈大，染色时间愈长，细胞着色愈匀称、鲜艳。缓冲液和染液量要充足，否则染液很快蒸发，染料沉淀于细胞上，使细胞深染而无法检查。细胞较多较厚的涂片（如红细胞增多症）染液应多些。细胞较少的涂片染液应少些。
6．染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关，染液愈淡，室温越低，细胞愈多，所需时间越长，应适当增加染液浓度，因此必须根据情况灵活掌握。
7．染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色，染色质结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种异颜色。&
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标题: 血涂片染色问题(血涂片,血细胞,动物实验,吉姆萨染色,染液)
摘要: [血涂片染色问题(血涂片,血细胞,动物实验,吉姆萨染色,染液)] 我想说的是关于手工操作方面的，就是血细胞的染色问题，大家在做动物实验的时候一般采用什么染色方法瑞氏染色还是吉姆萨染色法。还有想知道的就是染液大家是买的还是自己配的。配的浓度方面怎么样，希望大家给我点信息，先谢谢了。 关键词:[血涂片 血细胞 动物实验 吉姆萨染色 染液]……
我想说的是关于手工操作方面的，就是血细胞的染色问题，大家在做动物实验的时候一般采用什么染色方法瑞氏染色还是吉姆萨染色法。还有想知道的就是染液大家是买的还是自己配的。配的浓度方面怎么样，希望大家给我点信息，先谢谢了。
回复一般是用瑞氏染色，染液都是实验室自己配的，因为这样比较节约点，当然买的也就更好更方便些拉！回复我们用的吉姆萨染色，买的原液一般为20×，用PBS稀释就可以，稀释前先晃一晃，染十分钟，用细水流冲1，2分钟就行回复你们配的瑞氏染液 染色效果怎么样啊，总觉得染不好吉姆萨染色方面可以详细帮我讲解下吗！请多指教
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&& 血涂片的制备和细胞染色
血涂片的制备和细胞染色
的显微检查是检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。比台观察10个高倍视野血涂片中和数大致估计血内这些的数量，借以作为仪器结果分析后的参考。
但积压制备和不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。例如，过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。
血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。
1．（Wright）染色法：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。目前常用瑞特染色法。
（1）瑞特染料是由酸性染料和碱性染料组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。即伊红和伊混合后，产生一种憎液性伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染料。
（2）细胞的染色既有的吸附作用，又有的亲和作用，各种化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如，嗜酸性颗粒为，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；和胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
（3）PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不，由于蛋白质系，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质，稀释染色必须用，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。
新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待染料成熟，主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色效果愈好。EAm GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格。rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl（视染液浓度而定），加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空折管，分别以波长650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm，伊红吸收峰波长为525nm&#160;;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。所以新配染料rA接近2，随着美蓝逐渐氧化为天青B，RA也相应下降。RA下降到1.3±0.1时即可使用。瑞特染液贮存过程中，必须塞严，以防止甲醇和被氧化成甲酸。有人主张在配方中加入30ml，防止甲醇挥发，关可合细胞染色清晰。甲醇必须纯净，如甲醇中含量过多，染色偏酸，使白细胞着色不良。
2．吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和着色较好，结构显示更不清晰，而和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨。
出自A+医学百科 “基础检验学/血涂片的制备和细胞染色”条目
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