~(99m)Tc-IDA肝胆显像和~(99m)Tc-胶体显像在原发性胆汁性肝硬化中的应用--《国际放射医学核医学杂志》1991年06期
~(99m)Tc-IDA肝胆显像和~(99m)Tc-胶体显像在原发性胆汁性肝硬化中的应用
【摘要】：正 原发性胆汁性肝硬化是一种慢性进行性胆汁瘀积性疾病,它主要影响肝内胆道并最终发展为肝硬化.本文报道了~(99m)Tc-胶体和~(99m)Tc-IDA显像在诊断原发性胆汁性肝硬化的临床价值.15例患者均为女性,年龄34～70岁,平均55
【关键词】：
【正文快照】：
岁。诊断为肝活检证实,其中早期8例,晚期7例。全部患者均进行IDA显像,判断指标为肝摄取、肝储留、肠显影时间。14例在三周内进行胶体显像,判断指标有肝、脾大小及活性比、骨髓活性。 显像结果:8例早期患者IDA显像7例(88;‘)出现肝内漪留,而在早期的7例胶体显像中,4例(57%)为
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京公网安备75号胶体金标记的最适蛋白量测定(蛋白,胶体金,比色法,蛋白结合) - 免疫实验 - 生物秀
标题: 胶体金标记的最适蛋白量测定(蛋白,胶体金,比色法,蛋白结合)
摘要: [胶体金标记的最适蛋白量测定(蛋白,胶体金,比色法,蛋白结合)] 胶体金标记中的最适蛋白量测定是很关键的步骤，如何确定最适蛋白量呢？一般有两种方法：目测比色法和光电比色法。而目测法主观性强了些，不能精确定量。光电比色法要用光电比色计，而这种仪器太老了，现在很多实验室没有，我们也没有，笔者在考虑能否用分光光度法进行最适蛋白量的测定，哪位战友测过，交流一下？因为我知道，光电比色法是以OD值为纵坐标，蛋白质用量为横坐标作一曲线，取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质 关键词:[蛋白 胶体金 比色法 蛋白结合 蛋白质 分光光度法 光电比色计]……
胶体金标记中的最适蛋白量测定是很关键的步骤，如何确定最适蛋白量呢？一般有两种方法：目测比色法和光电比色法。而目测法主观性强了些，不能精确定量。光电比色法要用光电比色计，而这种太老了，现在很多实验室没有，我们也没有，笔者在考虑能否用分光光度法进行最适蛋白量的测定，哪位朋友测过，交流一下？因为我知道，光电比色法是以OD值为纵坐标，蛋白质用量为横坐标作一曲线，取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。而分光光度法的OD值是随着蛋白用量的增高而升高的，哪有和横轴相接近的那一点？除非会有一个平台期。。可是这个原理我们还是不明白，测的这个OD值到底是谁产生的呢？是和蛋白结合的胶体金产生的，还是没和蛋白结合的胶体金产生的呢？希望能引起朋友的共鸣和讨论。谢谢！
回复请斑竹帮助！回复而分光光度法的OD值是随着蛋白用量的增高而升高的，是随着蛋白用量增高而降低吧。蛋白量不足时会造成死金，蛋白到一定量后OD值不变，在拐点处增加10%就是最适量了。回复觉得是曲线的切线和轴平行的，不知道对不，希望朋友点评回复也就是说OD值是没和蛋白结合的金产生的，对吗？另一个问题：根据以上原理，在测OD值之前要离心的，对吗？这样的话，和的胶体金就会沉淀下来，溶液中就会剩下游离的胶体金，再拿去测OD值，这样就和理论的检测方法一致了，对吗？回复离心速度是多少？回复低速离心即可，我一般使用3000g。回复光电比色法：制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml），分别加入5ml胶体金中，迅速混匀，然后，各加入1ml 10% NaCl溶液，摇匀，静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小，OD在520～580nm之间测定，以OD值为纵坐标，蛋白质用量为横坐标作一曲线，取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。一般我都用微孔板微量做完直接测。回复最好的办法也是最笨的办法，你就把标记的量等比例缩小比如标记一批1ml的胶体金，分别用不同的量，然后把所有的步骤都进行下去，包括封闭、离心最后离心后能重悬、包被后不死金的最低蛋白量，自然就是你寻求的最适蛋白量了，不会多出多少时间，也不会浪费多少回复最好的办法也是最笨的办法，你就把标记的量等比例缩小比如标记一批1ml的胶体金，分别用不同的蛋白标记量，然后把所有的步骤都进行下去，包括封闭、离心最后离心后能重悬、包被后不死金的最低蛋白量，自然就是你寻求的最适蛋白量了，不会多出多少时间，也不会浪费多少正解回复我不认为这是个最好的办法。通常在这方面提出疑问的人，都是对于胶体金了解不深，对配方的改良从原理到方式都不明确的人。步骤太多，任何一步的错误都有可能造成对于结果的误判。他们通常没有合适的配方用于你说的“包被后不死金”，这么做反而很可能出现所有的金在干燥到垫子上以后都无法重悬。最好的办法也是最笨的办法，你就把标记的量等比例缩小比如标记一批1ml的胶体金，分别用不同的蛋白标记量，然后把所有的步骤都进行下去，包括封闭、离心最后离心后能重悬、包被后不死金的最低蛋白量，自然就是你寻求的最适蛋白量了，不会多出多少时间，也不会浪费多少抗体
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电话：021-Tc-99m锡纳米胶体及其制备的制作方法
专利名称Tc-99m锡纳米胶体及其制备的制作方法
技术领域本发明涉及锝标记的锡纳米胶体及其制备方法。更具体地，本发明 涉及锝锡纳米胶体及其制备方法，作为允许淋巴转移的纳米尺寸粒子的 所述胶体，其很容易制备，适于控制为均一尺寸，并且有可能作为核医 学中的放射性药物，该放射性药物作为识别前哨淋巴结如乳腺癌中腋窝 淋巴结的放射性示踪剂非常有用。
背景技术用于核医学成像的锡胶体具有几微米的粒子尺寸，因此被肝枯否细 胞吞噬，其主要用于肝成像。锡胶体可通过很简单的步骤制备。
利用主要被巨噬细胞摄取的概念，根据胶体的尺寸不同，其在生物 学分布上有所不同。几微米的锡胶体粒子被肝内广泛分布的枯否细胞摄 取。更小的胶体被脾和骨髓内的巨噬细胞捕获。影响胶体生物学分布的 主要因素是粒子尺寸和亲水性。
胶体粒子已广泛用于核医学检查，用于测定淋巴转移和识别前哨淋 巴结。当该胶体粒子尺寸大于500mn时，注射到胞间隙的放射性药物不 会被运送到淋巴系统，而是保留在注射部位。小于5nm的粒子被吸收到 毛细血管中而不迸入淋巴系统，因而不停留在前哨淋巴结。在淋巴闪烁 显像术中，用于淋巴显像的理想的粒子尺寸为10-30nm。
迄今为止，放射性药物如"mTc-HAS、"mTc-锑硫胶体和过滤的99mTc-硫胶体已用于淋巴显像。按照粒子尺寸，将它们总结于表l中。
"mTc-硫化锑3-12nm
99mTc-HAS4nm
过滤的"，c-白蛋白胶体50-200nm
过滤的""^C-硫胶体&200nm
"mTc-锡胶体(Hepatate)260-3900nm
前哨淋巴结是接受来自肿瘤部位淋巴引流的第一个淋巴结，癌细胞
4可能由该前哨淋巴结转移，从而由肿瘤块经过淋巴系统转移扩散。进行组织学检查时，如果前哨淋巴结不含有肿瘤细胞，则不必要进行大范围的淋巴结清扫。也就是说，因为肿瘤细胞不太可能经过淋巴系统转移，所以只进行去除肿瘤块的手术。这使患者在手术后更快地恢复正常活动，改善患者的生活质量，并使手术后的副作用减至最小。因此，进行了很多在手术前识别前哨淋巴结的尝试。
识别前哨淋巴结最广泛使用的方法涉及在肿瘤块周围注射放射性药物，通过成像监测放射性药物经过淋巴系统转移到淋巴结，以及在手术室中使用Y探测仪识别第一引流(前哨)淋巴结。或者，可通过注射染料并确定哪个淋巴结是前哨淋巴结来识别前哨淋巴结。但是，由于染料随着时间推移扩散到邻近组织或淋巴结，所以很难使用染料方法来识别前哨淋巴结。
近来，为了对乳腺癌患者进行治疗，已结合广泛应用的方法实施乳房切除术，其涉及识别前哨淋巴结以确定癌是否己经扩散，并确定在手术期间去除的区域范围。在该手术过程中，必须识别肿瘤部位周围的前哨淋巴结。如果在手术室使用Y探测仪可以识别前哨淋巴结，而不考虑通过核医学技术局部注射示踪剂后的时间，则可向外科医生提供稳定的手术方法。因为胶体和白蛋白通过前哨淋巴结快速转移达到更高位置，所以在局部注射胶体后，在手术室内需要通过在伤口周围切口，在限定时间内识别前哨淋巴结。这已成为限制检测前哨淋巴结后实施手术的方法的一个原因。根本原因是使用的粒子不适合和尺寸不均一。
识别前哨淋巴结特别重要，在到达淋巴结后，使用的示踪剂不可通过前哨淋巴结沿其路转移到上淋巴道。这是因为随着时间的推移，示踪剂的转移导致不能识别癌细胞从肿瘤部位转移到达的第一个淋巴结。根据广泛使用的吞噬机理，所用的示踪剂保留在淋巴结内，示踪剂在淋巴结内被巨噬细胞吞噬。所以，最重要的是使用具有可被巨噬细胞吞噬尺寸的示踪剂。
已知10-30nm的粒子对前哨淋巴结的识别最为理想。因此，如果通过简单方法可制备适当尺寸的粒子，则可通过在手术前检测前哨淋巴结
估计癌细胞的扩散之后，确定对患者的治疗方案，由此为癌症患者确立更为有效的治疗策略。
因此，本发明的目的是提供一种具有均一纳米粒子尺寸的锝标记的 锡纳米胶体及容易地制备该胶体的方法，该胶体具有用于核医学成像的 以下优点体内稳定性和生物相容性高，适于淋巴闪烁显像术中的淋巴 显像，以及对于识别例如肿瘤中的前哨淋巴结很有用。
为了达到上述目的，本发明提供一种锝锡纳米胶体，通过将放射性 锝或其化合物的溶液与含有锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆 (poloxamer)和聚乙烯吡咯垸酮的溶液混合来获得。
此外，本发明提供一种制备锝锡纳米胶体的方法，包括制备含有 锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯烷酮的第一溶液； 以及将放射性锝或其化合物的第二溶液与所述第一溶液混合。
根据本发明，锝锡纳米胶体是水溶性的、高度生物相容性的粒子， 具有允许淋巴转移的纳米级尺寸。该纳米胶体很容易制备，将其尺寸适 当控制为均一。因而，该纳米胶体有可能作为核医学中的放射性药物， 该放射性药物作为识别前哨淋巴结如乳腺癌中的腋窝淋巴结的放射性示 踪剂非常有用。
图1显示根据本发明实施方式的、处于小瓶中的最终的锝-99m锡纳 米胶体的照片；
图2显示根据本发明实施方式的锝-99m锡纳米胶体的粒子尺寸分
图3显示根据本发明实施方式的锝-99m锡纳米胶体的场发射扫描电 镜(FE-SEM)图像；
图4显示根据本发明实施方式的锝-99m锡纳米胶体 (99mTc-SNPPPT-50)的FE-SEM图像；
图5显示根据本发明实施方式的被巨噬细胞摄取的^Tc-SNPPPT-30 胶体和99mTc-SNPPBT-50胶体的图；图6显示根据本发明的实施方式，静脉内注射到大鼠体内的锝-99m 锡纳米胶体的生物学分布y图像；
图7显示动态显像30min后获得的静态图像，其中根据本发明实施 方式的锝-99m锡纳米胶体经皮下注射到兔的右后腿和左后腿；和
图8显示图7的结果作为系数/像素之比(coefficient/pixel ratio)的 函数，在淋巴结内随时间变化的图。
具体实施例方式
在下文中，将详细描述本发明。
根据本发明的锝标记的锡纳米胶体是用于核医学的放射性药物，由 于使用聚乙烯吡咯垸酮(在本文中还可简单表示为"PVP")，所以具有 能经过淋巴系统转移的纳米级粒子尺寸，可理想地用于识别例如肿瘤中 的前哨淋巴结。
本发明中，锡化合物为二价锡溶液，通式为SnX2，其中X是选自卤 素原子、醋酸根、硫酸根、草酸根和琥珀酸根中的至少一个，但不限于 此。
本发明中，钠化合物通式为NaX'，其中X'可以是卤素原子，但不限 于此。
本发明中，用于控制胶体粒子尺寸的PVP是具有强的路易斯碱的水 溶性叔酰胺的聚合物，具有高的生物相容性。PVP通常用作药物混悬液 的稳定剂，该药物混悬液作为用于药物口服给予或局部给予的药物制剂。 本发明中，PVP用作锡胶体的良好稳定剂，在一个实施方式中显示了 PVP 的这种作用。聚乙烯吡咯垸酮的代表性例子包括N-乙烯基吡咯烷酮和 N-乙烯基-5-甲基-2-吡咯垸酮，但不限于此。
本发明中，用作缓释药物载体的泊洛沙姆，由于其对机体几乎没有 毒性且显示热可逆的溶胶-凝胶转变行为，因此当与其它添加剂混合时， 交联效率可能增加，还可作为高分子表面活性剂。泊洛沙姆是聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)-聚(氧乙烯)的三嵌段共聚物， 如下式1所示。[式1]
)■-f-GHsCHO-j-(~CH CH20J~H
其中，X、 Y和Z为整数，可以按照泊洛沙姆的分子量来限制。 如上所述，含有锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯
吡咯垸酮的溶液与放射性锝如"mTc混合，形成具有允许淋巴转移尺寸的
锝锡纳米胶体。以适当比混合上述成分，从而获得具有10-30nm，优选 15-30nm尺寸的胶体粒子。该粒子尺寸范围允许胶体粒子的淋巴转移， 因而有利于前哨淋巴结的检测和成像。非常大尺寸形式的粒子会沉淀， 导致胶体稳定性降低。非常小尺寸的胶体粒子被吸收到毛细血管中而不 进入淋巴系统，因而不停留在前哨淋巴结。
因为混合溶液为酸性，因而难以注射到动物包括人的体内，为了提 高其pH值，可进一步含有pH调节剂。当将该溶液与适量的pH调节剂 进行混合时，可实现最终胶体粒子尺寸的微调。pH调节剂的例子包括磷 酸盐缓冲剂和碳酸氢钠，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，当使用适量的PVP、并用碳酸氢钠调 节pH值时，由此获得的胶体粒子尺寸约为13nm，其最适于进行前哨淋 巴结的检测和成像。电镜法显示胶体粒子尺寸非常均一、并且为球形。
如上所述的锝锡纳米胶体可通过如下方法制备，该方法包括(a) 制备含有锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯垸酮的 第一溶液；以及(b)将放射性锝或其化合物的第二溶液与所述第一溶液 混合。
该方法可进一步包括(c)将pH调节剂加入所述混合溶液中。
当使用适量的PVP和pH调节剂时，可获得具有允许淋巴转移尺寸 的最终胶体粒子。此外，在这种情况下，可将粒子尺寸控制在各种水平。
在步骤(a)中，通过将重量份数之比为1-2:4-20:2-10:4-100的
锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯烷酮混合来制备所述第一溶液，由此获得有利于淋巴转移、且尺寸均一的胶体粒子尺 寸。
在另一实施方式中，当PVP的使用量不同，而锡或其化合物、钠或
其化合物和泊洛沙姆的量固定时，可获得允许淋巴转移的纳米级尺寸，
约为5nm-15nm。此外，纳米级尺寸可在预定的时间段内得以保持，因此 显示出高的稳定性。
在步骤(b)中，将放射性锝或其化合物的第二溶液与步骤(a)制 备的第一溶液以当量比为1/5-1/15进行混合。
将放射性锝例如99mTc以当量比为1/5-1/15加入步骤(a)制备的第 一溶液中，以形成放射性复合物。在此范围内，形成了均一、球形的锝 锡纳米胶体复合物。
任选地，在步骤(c)中，当通过步骤(a)和步骤(b)获得的复合 物具有难以将其注射到动物包括人体内的pH值时，将pH调节剂如磷酸 盐缓冲剂或碳酸氢钠加入该锝锡纳米胶体复合物中以调节pH值。
适量的pH调节剂使具有所需尺寸的胶体粒子在尺寸上更为均一。 因而，在实际操作中，相对于步骤(b)获得的复合物，以当量比约为0.1-1 使用磷酸盐缓冲剂，以当量比约为10-12-10'1()使用碳酸氢钠。
通过在肿瘤伤口周围局部注射如上制备的本发明的锝锡纳米胶体， 可用于识别前哨淋巴结。局部注射后，在手术室中使用Y探测仪识别前 哨淋巴结而不必考虑时间，由此提供稳定的手术操作方法。
通过以下实施例，可以更好地理解根据本发明的锝锡纳米胶体及其 制备方法，提出该实施例是用于解释本发明，而不用于限制本发明。
实施例1-10:制备锝锡纳米胶体 (1)材料
氯化亚锡(SnCl2)、氯化钠(NaCl)、氟化亚锡(SnF2)和氟化钠(NaF) 购自Sigma-Aldrich Chemical Co.。泊洛沙姆188和聚乙烯吡咯烷酮(PVP; Kollidon 30)得自BASF Korea。锝-99m使用锝发生器(Samyoung Unitech. Co. Ltd.,韩国)抽取获得。(2)制备锝锡纳米胶体(""^C-锡胶体)
称取1.25mgSnCl2、 10mgNaCl、 5mg泊洛沙姆和10-50mg PVP，顺 次放入真空小瓶(Daiichi Radioisotope Laboratories, Ltd,东京，日本) 中。分别将1.25 mg SnF2、 10mg NaF、 5mg泊洛沙姆和10-50mg PVP放
入真空小瓶。将此试验中的样品标记为"SNPPT"，该縮写词含有所用 的每个化合物縮写的大写字母。将"mTc高锝酸盐( MBq)在 5ml盐水中稀释并加入小瓶中，然后用手剧烈振摇小瓶以形成锝锡纳米 胶体("mTc-锡胶体)。
当使用氯化亚锡(SnCl2)和10-40mgPVP制备锝锡纳米胶体时，该 胶体显示出7-llnm的小尺寸。但是，在这种情况下，胶体在几小时后形 成白色沉淀，沉淀很大，致使胶体稳定性降低。当不使用PVP时，胶体 尺寸非常大，为几微米。与之相比，当使用50mgPVP时，胶体显示出 约10nm的恒定尺寸，甚至在24小时后仍不变。
当使用氟化亚锡(SnF2)和0-50mgPVP制备锝锡纳米胶体时，该胶 体为4-13nm的纳米级尺寸，该尺寸保持24小时，因此显示出该胶体很 稳定。结果总结于下表2中。
聚合物30min90min3hr6hr
SnF2PVP， 10mg8.4±6.414.0±0.365.1±1..50
NaFPVP， 20mg9.43±3.264.5±0.405.6±2..57
泊洛沙姆188PVP， 30mg20.2±1.765,7±1.175.6±1..65
Tc-99mPVP, 40mg23.4±0.856.4±1.727.2±2.977.6±0.61
PVP， 50mg18.7±4.279.6±1.678.2±1,.43
如上所述制备的99111几-锡纳米胶体的pH值小于5，在该pH值，很 难将胶体注射到动物体内。为调节pH值，将0.3ml磷酸盐缓冲剂(O.IM， pH 7.3)和10pl碳酸氢钠加入上述制备的胶体样品中。在99111化-锡纳米 胶体与磷酸盐缓冲液和碳酸氢钠混合后，使用pH试纸检测pH值。
图1显示具有纳米粒子尺寸的最终"mTc-锡胶体的照片。如图1所 示，"""Tc-锡纳米胶体外观为无色并且透明。
1.粒子尺寸在韩国基础科学研究所Chon-Buk中心(Chon-Buk Center, Korea Basic Science Institute),使用粒度分析仪(UPA-150; Microtrac， USA)评估实 施例l-10制备的"mTc-锡纳米胶体的粒子尺寸。结果总结在下表3-4中。 所有样品平行制备三份，并且在三个独立的实验中进行分析(n=3)。使 用磷酸盐缓冲剂制备的样品标记为"SNPPPT"，使用碳酸氢钠制备的样 品标记为"SNPPBT"。样品名末尾的数字代表PVP的使用量。
&table&table see original document page 11&/column&&/row&&table&如表4所示，显示SNPPBT-50在90min时成像的尺寸16.5±6.76nm。
在样品中，对SNPPT-30、 SNPPT-50、 SNPPPT-30和SNPPBT-50进
行粒子尺寸分布分析，结果表示在图2中。
如表3-4以及图2所示，当使用磷酸盐缓冲剂时，观察到粒子尺寸 随时间或PVP量的变化并没有显著差别，显示胶体的尺寸约为 50nm-70nm。与之相比，当使用碳酸氢钠时，发现粒子尺寸随时间和PVP 量的变化有很大差别。发现SNPPBT-40和SNPPBT-50的粒子尺寸约为 13nm，与不使用pH调节剂时获得的胶体粒子的尺寸类似。
2.使用电镜法表征"mTc-锡纳米胶体的形态和尺寸
使用场发射扫描电镜(FE-SEM)评估制备的"，c-锡纳米胶体(99mTc-SNPPBT-50)的形态。将制备的"，c-锡纳米胶体适当稀释后， 将3-5pl稀释液滴到硅晶圆片上，干燥约一天。然后使用溅射涂膜单元(日 立E1030，日本)对样品涂覆铂(Pt)。涂覆厚度约为6nm。在韩国基础 科学研究所Chon-Buk中心使用扫描电镜(S-4700扫描电镜；日立，日 本)进行电镜评价。
图3显示根据本发明的991"化-锡纳米胶体的FE-SEM图像。
作为对照，只将50mg PVP加入5ml生理盐水中，使用FE-SEM进 行分析。在图3中，照片(a)和(c)分别显示"PVP-50+盐水"在200,000 和50,000放大倍数下的FE-SEM图像。如照片(a)和(c)所示，PVP 将方形特征的盐非常均一地分布开来。
在图3中，照片(b)和(d)显示了使用50mg PVP和碳酸氢钠制 备的锝锡纳米胶体(99mTc-SNPPBT-50)的FE-SEM图像，将该胶体滴到 硅晶圆片上，并用FE-SEM分析。照片(b)和(d)分别显示 "99mTc-SNPPBT-50"在200,000和50,000放大倍数下的FE-SEM图像。 粒子尺寸如照片(b)中的标尺所示。FE-SEM显示出生成了约为13mn 的球形胶体粒子，这些结果与使用粒度分析仪获得的结果相同。此外， 胶体粒子有高度均一的尺寸分布。
图4显示使用50mg PVP和磷酸盐缓冲剂制备的锝锡纳米胶体 (99mTc-SNPPPT-50)的FE-SEM图像。如图4所示，发现胶体的粒子尺 寸约为80-卯nm。与99mTc-SNPPBT-50不同，99mTc-SNPPPT-50显示出不 均一的形态。
3.体外细胞试验
RAW 264.7巨噬细胞得自韩国细胞系库(Korean Cell Line Bank)。 将lxl()6个细胞接种于无血清的RPMI-1640中，在37°C、 5% (302下于 培养箱内培养过夜。在确认己经稳定后，在0^1、 0.5^il和1^1的 99mTc-SNPPPT-30和99mTc-SNPPBT-50中培养细胞20min。然后用胰蛋白 酶-EDTA使细胞脱离，并用lxPBS洗涤两次。用y计数器(COBRAII， Packard)测量放射性。用每个样品的蛋白浓度来校正放射性。收集来自 三个独立实验的结果。
12图5显示99mTc-SNPPPT-30胶体和99mTc-SNPPBT-50胶体的细胞摄 取。如图5所示，当比较99mTc-SNPPPT-30胶体和99mTc-SNPPBT-50胶体 被巨噬细胞的摄取时，在同一浓度下，较小的99mTc-SNPPBT-50显示约 2.1倍的更高的细胞摄取，并且显示在两倍浓度下约2.7倍的更高的细胞 摄取。
4.Y成像和前哨淋巴结成像
按照韩国全北大学校医学院动物伦理委员会(Animal Ethics Committee, College of Medicine, Chonbuk National University)提供的动 物实验指南进行所有的动物试验。在实验前一周购买6-7周龄的大鼠 (Orient-Bio，首尔，韩国)和新西兰白兔(2.5-3.0kg，哈尼尔(Hanil)， 全州，韩国)。将氯胺酮(ketamine)和隆朋(rompun)的混合物注射到 兔的耳静脉使其麻醉。分别在兔的右后腿脚趾和左后腿脚趾间注射 "，c-SNPPPT-30和99mTc-SNPPBT-50。将兔仰卧放置，将其前腿和后腿 固定。使用y照相机ECAM(SIMENS Medical System Inc., Illinois, USA) 获得动态和静态图像。以30sec至30min为时间间隔获得动态图像。然 后，在40min、 60min、 160min、 l卯min和220min时获得静态图像。对 所得图像上选取的感兴趣的区域(ROI)进行计算得到系数值，并将两边 相比较。
图6显示根据本发明的锝锡纳米胶体(A: 99mTc-SNPPPT-30， B: 99mTc-SNPPBT-50)生物学分布的y图像，其中将7.4MBq的每种胶体静 脉内注射到大鼠体内，注射5min后获得y图像。99mTc-SNPPPT-30主要 停留在肝内，并在骨髓图像中也有显示。与之相比，较小的 99mTc-SNPPBT-50显示在骨髓图像中，并且通过肾快速排泄。
这些结果显示出99mTc-SNPPBT-50的粒子尺寸小到足以被骨髓内的 单核吞噬细胞系统(MPS)摄取，并且能够通过肾小球少量排泄。
图7显示动态显像30min后获得的静态图像，其中将根据本发明的 锝-99m-锡纳米胶体皮下注射到兔的右后脚和左后脚。图8显示图7的结 果作为系数/像素之比的函数，在淋巴结内随时间变化的图。分别将 99raTc-SNPPPT-30和99mTc-SNPPBT-50皮下注射到兔的右后脚和左后脚。 如图7和图8所示，在99mTc-SNPPBT-50约为13nm的情况下，胭淋巴结内的放射性随时间的推移而增加。与之相比，99mTc-SNPPPT-30的放射性
显示出在起始峰后逐渐降低。
如以上实施例和实验中的数据所示，发现PVP可作为锝-99m锡纳米 胶体的稳定剂。使用两种不同的缓冲剂，将制备的锝-99m锡纳米胶体最 终调节为适用于机体的pH值。另外，发现加入缓冲剂还影响胶体粒子的 尺寸。此外，发现通过改变PVP的量和缓冲剂的类型，可获得具有理想 粒子尺寸的最终胶体。
实施例制备的Tc-99m锡胶体中，发现99mTc-SNPPBT-50具有用于前 哨淋巴结识别和成像的最适尺寸。此外，电镜法显示出99raTc-SNPPBT-50 的粒子尺寸均一并且为球形。在相同条件下进行重复，相同尺寸胶体的 合成可以得到再现。细胞试验和体内评价显示约为15-30nm的胶体粒子 能被巨噬细胞充分摄取。
总之，使用锡和PVP很容易制备纳米尺寸的胶体。在这种情况下， 胶体的粒子尺寸非常均一，平均约为Bnm。细胞试验显示与 99mTc-SNPPPT-30相比，99mTc-SNPPBT-50胶体被巨噬细胞的摄取更高。
当根据本发明的锝-99m锡纳米胶体应用于癌症患者，以使用Y探测 仪识别前哨淋巴结时，预计前哨淋巴结将得到准确识别。另外，该胶体 能使外科医生进行手术而不受时间限制。此外，小于100nm的 99mTc-SNPPPT-3O被枯否细胞捕获，因而可以用于肝成像。
1. 一种锝锡纳米胶体，通过将放射性锝或其化合物的溶液与含有锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯烷酮的溶液混合来制备。
2. 根据权利要求l所述的锝锡纳米胶体，其中所得混合物与选自磷 酸盐缓冲剂和碳酸氢钠的pH调节剂混合。
3. 根据权利要求1所述的锝锡纳米胶体，其中所述放射性锝为锝 -99m。
4. 根据权利要求l所述的锝锡纳米胶体，其中所述锡化合物为二价 锡溶液，具有通式SnX2，其中X是选自卤素原子、醋酸根、硫酸根、草 酸根和琥珀酸根中的至少一个。
5. 根据权利要求l所述的锝锡纳米胶体，其粒子尺寸为10-30nm。
6. —种制备锝锡纳米胶体的方法，包括制备含有锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯烷 酮的第一溶液；以及将放射性锝或其化合物的第二溶液与所述第一溶液混合。
7. 根据权利要求6所述的制备锝锡纳米胶体的方法，进一步包括将 pH调节剂加入所得的所述第一溶液和所述第二溶液的混合物中。
8. 根据权利要求7所述的制备锝锡纳米胶体的方法，其中所述pH 调节剂为磷酸盐缓冲剂或碳酸氢钠。
9. 根据权利要求6或7所述的制备锝锡纳米胶体的方法，其中所 述第一溶液含有重量份数之比为1-2:4-20:2-10:4-100的锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯烷酮。
10. 根据权利要求7所述的制备锝锡纳米胶体的方法，其中将所述第二溶液与所述第一溶液以当量比为1/5-1/15进行混合。
11. 一种用于识别肿瘤中前哨淋巴结的、根据权利要求1-5中任一 项所述的锝锡纳米胶体。
12. —种用于识别肿瘤中前哨淋巴结的、根据权利要求6或7所述 的锝锡纳米胶体。
本文公开一种锝标记的锡纳米胶体及其制备方法。所述胶体通过将放射性锝或其化合物的溶液与含有锡或其化合物、钠或其化合物、泊洛沙姆和聚乙烯吡咯烷酮的溶液混合来制备。作为允许淋巴转移的纳米尺寸粒子的所述胶体，其很容易制备，适于控制为均一尺寸，并且有可能作为核医学中的放射性药物，该放射性药物作为识别前哨淋巴结如乳腺癌中腋窝淋巴结的放射性示踪剂非常有用。
文档编号A61K51/12GKSQ
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者郑焕正, 金恩美 申请人:全北大学校产学协力团