小鼠肝匀浆怎么保存，可以保存多长时间 - 爱问知识人
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匀浆怎么保存，可以保存多长时间
的一些分析，肯定是没有问题的。如果想长期保存肝组织样品，应该将新鲜的肝组织取出后，迅速放在液氮中，然后放入-80冰箱保存。待使用时进行匀浆。
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同一个的骨骼肌细胞和肝脏细胞的基因应该是相同的，因为它们都是由同一个受精卵经过有丝分裂形成；不过它们所表达的蛋白质不一样，主要是因为基因选择性表达不同。
天麻加工方法很多，现介绍一种简便易行的方法，将采挖的鲜天麻立即用水洗净表面泥土和菌索，及时放在蒸笼蒸或水煮，蒸煮时间一般为30分钟左右，以天麻中间心熟透为宜，不...
是供喂鱼的吗？将其适当分割一下，如切成条状，用保鲜袋装好，放入冰箱的冷冻室，可以保存很长时间，如果冷冻室设定温度较低，可保存两个月以上没问题。
对不起，我...
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[求助]请问 心脏组织怎么匀浆
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这个帖子发布于10年零346天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我要测心脏的SOD和MAO 心脏匀浆怎么做，有什么要求啊？请求战友们指导！　请勿重复发贴，谢谢合作！
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tom88339 edited on
这个可以吗
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9.5.2.1心肌匀浆制备及线粒体的提取:
将各时点的心肌标本从一70℃冰箱中取出，在室温下自然解冻，切碎，称重(取大约100mg)后，置于匀浆介质(pH 7. 4, 0. 01 mol/L Tris-HCl,0. 0001 mol/L EDTA-2N&, 0. 01 mol/L蔗糖，0.8%的氛化钠溶液)中，在微型匀浆器充分研磨制成心肌匀浆液。分别用2000转/分和1200转/分，离心10分钟，再将沉淀加人匀浆介质，12000转/分离心15分钟以提取线粒体。紧供参考
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各组末次给药2h后，处死大鼠，迅速取出心脏，用冰生理盐水冲洗，从心尖部剪取部份心肌，制成5%心肌匀浆。用硫代巴比妥酸(TBA)法测定心肌组织MDA(以532nm比色测定的OD值与四乙氧基丙烷标准曲线查出对应浓度，再乘以68.89即为MDA nmol/g心肌的含量);用SOD试剂盒(黄嘿吟氧化法)测定心肌SOD含量。我们都是用这种方法测黄嘌呤氧化法。
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tom88339 edited on
我需要对梗死后心肌的SOD MAO做检测，上只需要取缺血梗死的心肌还是整个心肌组织阿？还有要比色，也就是不能对其进行染色拉，我要测梗死面积，要EVAN'S BLUE 染色，和TTC染色，那就不能进行SOD MAO的测定拉巴？
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oldren407 我需要对梗死后心肌的SOD MAO做检测，上只需要取缺血梗死的心肌还是整个心肌组织阿？还有要比色，也就是不能对其进行染色拉，我要测梗死面积，要EVAN'S BLUE 染色，和TTC染色，那就不能进行SOD MAO的测定拉巴？朋友 问题解决了吗
能给解惑吗
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亲，你的问题解决了吗 能否帮个忙给回复下咧 谢谢啦
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【求助】心肌组织匀浆如何制备
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这个帖子发布于10年零22天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我想用放射免疫方法测定心梗大鼠心肌组织的醛固酮？不知心肌匀浆应该如何制备？看了文献上的做法是这样的：1.放射性免疫方法测定心肌组织中Angn、Ald含量:称取左室非梗死区心肌100mg剪碎，加人Ang II试剂盒中缓冲液0. 6m1，在冰浴中进行超声匀浆，匀浆液在4℃下以3000rpm离心20分钟，取上清液原液及稀释10倍后液体，分别测定Ald及Ang II含量2.有篇文献是测心肌Ang的：心肌组织标木制各:左心室称重后，再取心尖部约150mg,剪碎，放入l0ml匀浆管中，加入预冷的0. 9氯化钠溶液中(1ml/100mg)，冰浴匀浆，再将该匀浆液置于预冷的含3. 0mmol/1 EDTA一钠、3. 4mmo 1 / 1 8-}z基I I}琳和3. 2mmol/1一琉基丙醇的试管中，煮沸10分钟，4 0C 3000rpm离心10分钟，取上清液一70 0C保存。3.还有一个人是这样做的：心肌匀浆取血后，迅速开胸取出心脏，预冷的生理盐水充分洗净血液，滤纸吸干称重，切取部分心室肌，按1: 9的重量体积比加生理盐水制成10%匀浆(低温状态进行)，rpm/min离心，取上清-20℃备检。我只有玻璃匀浆器，不知道要怎么做心肌匀浆，恳请战友们指导，谢谢！
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linyunling edited on
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没有人帮忙吗？
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就按第三种方案可以做的吧？匀浆介质换成(0.01 M Tris-HCl, 0.0001 M EDTA-2Na, 0.01 M蔗糖，0.8%NaCl溶液，pH7.4），其他都照第三种方案进行
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谢谢！还要加蔗糖啊？就是我们普通吃的糖吧，要怎么配制呢？
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裂解液要充分作用,在冰上进行,一般15-30分钟.心肌组织比较韧,可剪成小块.匀浆是很困难的,如果没有电动匀浆器,用你的玻璃匀浆也可以,就是比较费力呀,以前我也是用的玻璃的.
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rainew战友提到的裂解液的成分是什么？和wxnacata战友提到的匀浆介质一样吗
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就是吃的那种蔗糖，加在一起配好调好pH即可，操作注意都在冰浴里，因为不管是手动的玻璃匀浆器还是电动匀浆器匀浆过程中都会产热
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wxnacata 就按第三种方案可以做的吧？匀浆介质换成(0.01 M Tris-HCl, 0.0001 M EDTA-2Na, 0.01 M蔗糖，0.8%NaCl溶液，pH7.4），其他都照第三种方案进行请问大侠，匀浆介质使用(0.01 M Tris-HCl, 0.0001 M EDTA-2Na, 0.01 M蔗糖，0.8%NaCl溶液，pH7.4）和使用生理盐水的区别是什么？(0.01 M Tris-HC。。。）比生理盐水要更好吗？
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关于丁香园10%小鼠肝匀浆蛋白含量大约是多少
10%小鼠肝匀浆蛋白含量大约是多少
10-02-25 &
目的观察广西桂郁金（GGYJ）对卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法采用BCG+LPS尾静脉注射造成免疫性肝损伤动物模型，观察GGYJ对各组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）的含量及肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平的影响。结果GGYJ可明显降低免疫性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、GLO水平，升高血清ALB水平，提高A/G的比值；减少肝组织匀浆的MDA含量，升高肝匀浆SOD、GSH-Px含量。结论GGYJ对BCG+ LPS尾静脉注射造成的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用，其作用与抗脂质过氧化有关。
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护理论文范文：心肌线粒体形态学的影响
【编者按】：精品学习网论文网为您提供护理论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。
摘要：目的：探讨长期递增有氧运动对老龄大鼠心肌抗氧化酶活性和心肌线粒体形态学的
影响；方法：建立实验大鼠跑台递增有氧运动方案，将老龄实验大鼠随机分为老龄运动组和老龄安静组，20周后检测实验大鼠和新购3月龄对照组大鼠心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA
含量，同时采用透射电镜观察实验大鼠和3月龄大鼠心肌线粒体形态；结果：
1）递增有氧运动能显著提高心肌SOD、GSH-Px活性，显著降低心肌MDA含量，但CAT
活性未见显著提高；2）递增有氧运动能改善心肌线粒体因衰老导致的形态改变，延缓心肌线粒体退行性衰老变化。结论：1）递增有氧运动能提高老龄大鼠心肌抗氧化酶活性，增大抗氧化酶活性与MDA比值，保护心肌组织因衰老而导致的自由基的损害，延缓心肌衰老；
2）长期递增有氧运动能改善老龄大鼠心肌线粒体结构，保护线粒体膜和嵴的完整性，延缓心肌线粒体因衰老而导致的退行性变化；关键词：有氧运动；衰老；心肌；抗氧化酶；线粒体
衰老的自由基学说认为，自由基是导致机体衰老的主要原因，并可导致与衰老相关疾病的发生[1]。很多研究表明，适宜的运动能提高机体内源性抗氧化酶活性，延缓衰老。线粒体是ATP和自由基生成的主要场所，线粒体形态结构的改变是其功能改变的可见形式，对线粒体形态学的研究能弥补酶的生化测定的不足[2]。本研究对老龄运动组大鼠、老龄安静组大鼠和3月龄安静组大鼠心肌抗氧化酶活性和线粒体形态学两方面进行比较研究，探讨递增有氧运动对实验老龄大鼠心肌衰老的影响。
2实验材料和方法
2.1实验对象及分组
健康雌性18月龄Sprague-Dawley大鼠30只，体重460.5g&59.3g(由南华大学医学院实验动物学部提供)，随机分为2组：老龄运动组和老龄安静组，每组15
只；另安排1组3月龄Sprague-Dawley大鼠为安静对照组（取材时临时购进），体重约为180.4g&46.5g，共10
只。国家标准啮齿类动物饲料喂养，自由进食、进水；室温23℃&2℃，相对湿度55%&5%，自然光照,所有动物在实验前均未进行过跑台运动。
2.2训练方案
实验前采用乳酸阈测定法监测有氧运动强度以确定跑台有氧运动方案，以杭州立泰科技有限公司动物实验跑台，对运动组老龄大鼠实施有氧运动方案（表1），递增训练20周，每周6天，每天一次。
表1大鼠训练方案（速度&时间）
Table1:TrainingPlanofRat(speed&time)
星期星期一星期二星期三星期四星期五星期六
第1周15&15&1515&15
15&15第2周15&15&2015&20
15&20第3周16&16&2016&20
16&20第4周16&16&25
16&周17&17&25
17&周17&17&30
18&第8周18&
18&第9周19&
19&第10周19&4019&40
19&19&40第11周20&4020&40
20&20&40第12周20&4520&45
20&20&45第13周21&45
21&21&周21&50
21&21&周22&50
17周23&23&5523&55
23&55第18周23&23&6023&60
23&60第19周24&24&6024&60
24&60第20周24&24&60
24&6024&60速度：m/时间：min；跑台坡度：0％
2.3取材和指标的测定
20周训练结束后12h内,老龄运动组、老龄安静组和3月龄对照组在安静状态下处死。所有动物均用1%戊巴比妥钠按50mg/Kg深度麻醉,迅速取出心脏,浸入4℃生理盐水中洗
净残余血液,剔除心包和心外膜，用小剪刀剪碎，置液氮中贮存备用。每组随机抽取三只实验大鼠，在心尖部取一小份心肌组织（1mm左右），置于2.5%戊二醛磷酸缓冲液，用于制备电镜检测标本。
2.3.1生化指标测定
超低温冰箱取心肌组织块常温解冻，滤纸拭干，取心肌组织（0.2g-1g）滤纸吸干,加入液氮碾磨成白色粉末，加0.86%冷生理盐水，制备成10%心肌组织匀浆液，震荡混匀。以
2500r/min，4℃，离心10分钟，取上清液分别用于丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-Px)的测定。MDA、SOD、CAT
酶试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供,严格按试剂盒要求进行操作。
2.3.2电镜标本制取
取出的心肌组织用2.5%戊二醛磷酸缓冲液预固定，0.1mol/L磷酸缓冲液漂洗３次，1%锇酸缓冲液后固定，0.1mol/L磷酸缓冲液漂洗３次，丙酮逐级梯度脱水，环氧树脂(Epon)812
包埋,半薄切片光学定位,然后制成超薄切片,醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染色，用日立
（HITACHI）H-7500透射电子显微镜20000倍下观察，德国奥林巴思CCD系统拍照。
2.4数据统计
实验数据采用用SPSS16.0软件进行单因素方差分析,结果以&s表示。
3.1运动对实验大鼠心肌抗氧化酶的影响(见表2)
表2：实验大鼠心肌组织匀浆氧化抗氧化能力测试结果
Table2:TheresultsofoxidationandantioxidantcapacityonRatcardiactissue
组别SODGSH-PxCAT
青年对照组589.06&134..037.14&1.36
0.97&0.13老年对照组495.91&44.23*110.53&16.16*5.76&3.40
1.22&0.36*老年运动组358.54&49.42**#72.75&17.33**##3.51&0.94*
1.63&0.24**#
注：与青年对照组大鼠比较，&*&表示p＜0.05；&**&表示p＜0.01。
与老年对照组大鼠比较，&#&表示p＜0.05；&##&表示p＜0.01。
对实验大鼠心肌组织SOD、GSH-Px活性测试结果显示：3月龄大鼠和老龄运动组大鼠心肌SOD和GSH-Px活性均高于老龄安静组大鼠，3月龄大鼠与老龄安静组大鼠心肌SOD、
GSH-Px存在非常显著性差异（P&0.01）,老龄运动组大鼠较老龄安静组大鼠心肌SOD、GSH-Px活性存在显著性差异（p&0.05），差异均具有统计学意义。
对实验大鼠心肌组织CAT测试结果显示：3月龄大鼠和老龄运动组大鼠心肌CAT活性均高于老龄安静组大鼠，3月龄大鼠与老龄安静组大鼠CAT存在显著性差异（P&0.05），
差异具有统计学意义；但老龄运动大鼠与老龄安静大鼠CAT活性无显著性差异（p&0.05）,差异无统计学意义。
对实验大鼠心肌组织MDA测试结果显示：3月龄大鼠和老龄运动组大鼠MDA含量均低于老龄安静组大鼠，3月龄大鼠与老龄安静组大鼠MDA含量存在非常显著性差异
（P&0.01），老龄运动组大鼠较老龄安静组大鼠MDA含量存在显著性差异（p&0.05），差异均具有统计学意义。
3.2运动对实验大鼠心肌线粒体行态学观察结果。(见图2)
透射电镜下观察到，3月龄大鼠心肌线粒体排列有序，线粒体完整性好，未见空泡或肿胀；老龄安静组大鼠心肌线粒体出现内室肿胀，表现为不同程度的空化，部分出现灶性空化，
嵴减少，形成较宽的电子透亮区，个别线粒体因高度肿胀出现界膜破裂、线粒体崩解；老龄
A：3月龄对照组大鼠心肌线粒体排列有序，线粒体膜完整&20000倍
B：老龄安静组大鼠心肌线粒体内室有不同程度空化，膜可见破裂&20000倍
C：老龄运动组大鼠心肌线粒体内室有较小肿胀，膜未见破裂&20000倍
图2：实验大鼠心肌线粒体形态结构
Fig.2:MitochondriastructureofRatcardiac
运动组大鼠心肌线粒体少数出现较小内室肿胀，但未见界膜破损。
4分析与讨论
Harman在1956年首次提出衰老的自由基学说，目前自由基衰老学说为主要的和公认的并得到广泛研究的的衰老学说之一。活性氧（ROS）是极具代表性的自由基，ROS具有极
强的氧化能力，在一定范围和一定程度内对机体有破坏作用。线粒体是机体ATP和ROS产生的主要场所，其产生的ROS占机体ROS总量的90％以上[3],且机体ROS的生成有随衰
老进程逐渐增多的趋势[4]。有关运动对自由基代谢的影响报道很多，不同运动强度对自由基代谢产生不同的影响[5]、[6]。
4.1运动对实验大鼠心肌抗氧化影响的分析
有关有氧运动对自由基代谢的影响报道很多：Laughim[7]等研究认为，长期有氧运动后动物骨骼肌总SOD、GSH-Px和CAT等活性明显增高，但是心肌和肝脏的抗氧化酶活性变
化则较小。Sen[8]等研究显示，长期的训练能显著提高大鼠骨骼肌GSH储量和GSH-Px活性，但是对于SOD则未见明显的变化。Quintanilha[9]报道耐力训练后大鼠骨骼肌和心肌
SOD、GSH-Px和CAT活性升高。史亚丽[10]等发现老年大鼠有氧运动后，心肌CuZn-SOD酶活性明显上升，GSH-Px
活性变化不明显。卢健[11]等发现长期运动能提高老年小鼠心肌线粒体Mn-SOD和GSH-Px活性。以上结果表明系统的有氧运动训练可以提高心肌抗氧化酶活性，
对自由基代谢产生良好的适应，延缓心肌衰老。
心脏是机体中耗氧率最高的器官之一,心肌不同于骨骼肌，不能进行无氧代谢，主要通过有氧代谢供能，运动中心脏耗氧量大幅度增加。心肌线粒体呼吸链在将心肌中大部分的氧变成H2O
的同时也释放出自由基，并构成线粒体电子传递链中必须的中间环节。有研究指出在抗氧化过程中抗氧化酶特别是SOD或MnSOD起着着重要的作用[12]。
本研究发现，与3月龄对照组大鼠比较，老龄大鼠心肌组织SOD、CAT、GSH-PX活性降低，MDA含量升高。该结论与其他学者[13]关于年轻大鼠与老年大鼠机体抗氧化酶活性
的研究结果基本一致，表明随衰老进程，机体抗氧化酶活性降低导致机体衰老，抗氧化酶活性与MDA比值也出现随龄减小，机体脂质化加重，机体趋于老化。
运动组老龄大鼠相比安静组老龄大鼠心肌SOD、CAT和GSH-Px活性升高，MDA含量下降，说明规律的有氧运动能提高心肌抗氧化酶活性与MDA比值，延缓心肌衰老。
SOD作为机体主要的抗氧化酶，在老龄运动组大鼠心肌中的显著提高，表明规律的有氧运动刺激下，机体自由基含量增多的同时，更诱导性地增加了心肌中SOD的活性，SOD
活性增强有利于机体及时清除O2
对细胞膜的损伤或者透过某些细胞膜上的阴离
子通道，对细胞核造成更深的损害[14]，而同为清除H2O2的酶：CAT和GSH-Px活性在
老龄运动组大鼠心肌中的不同表达，说明在心肌清除H2O2时，GSH-Px发挥了主要作用。这可能与这两种酶的生物活性有关，Michiels[15]研究表明在正常大气压氧下GSH-Px的活性
最高，比SOD高1478倍，比CAT高36倍，从这我们可以推测在在心肌组织中清除H2O2时GSH-PX发挥着主要的作用。辛东[16]在论文中也认为在分解H2O2时，主要以
GSH-Px为主。
造成本实验结果与其他研究者的结果略有差异的原因可能与实验鼠的种类、年龄、开始进行运动的年龄、衰老动物模型建立的方式以及抗氧化酶的测试方法有关。
从衰老的自由基学说来看，低强度的递增有氧运动，不仅可以减轻自由基对机体的氧化损伤，提高有氧运动组老龄大鼠机体抗氧化酶的活性，使心肌组织中抗氧化酶活性与MDA比值增大，而且还抑制了增龄引起的抗氧化能力的降低，有利于机体氧化与抗氧化系统的平衡，并对机体产生有益的影响。但是由于老年人到一定年龄后总的抗氧化能力较弱，ROS容易对其造成损伤，且很难诱导性地提高机体抗氧化能力。Goodrick[17]提出锻炼的延寿效应有一个阈限，超过某年龄段，运动对延寿则是无效的。同时在运动强度的界定上，毛文慧[18]
认为，在适量运动强度下，机体抗氧化酶的活性随训练强度增加而增加，超过了这个强度，酶的活性反而降低。这给我们的启示：如果采用运动的方式抵抗机体衰老，则运动开始的时间应尽可能早，同时要密切关注运动强度和运动持续的时间。坚持长期的适宜的运动，运动抗衰老的效果才明显。
4.2运动对实验大鼠心肌线粒体形态结构影响的分析
线粒体是个敏感多变的细胞器，广泛存在于除哺乳动物成熟红细胞以外的所有真核细胞中，是细胞内氧化、储能和供能的主要场所，同时也是细胞内自由基产生的主要场所[19]。
同种细胞线粒体的形态具有相对的稳定性。但不同的生理功能状态、营养状况等会明显改变线粒体的形态，运动也是导致其变化的重要原因之一[20]。
线粒体被看作是&细胞生存与死亡的马达&[21]，线粒体结构的完整是其功能正常发挥的保障，著名线粒体遗传学家WallaceDC[22]指出：结构+能量=生命。线粒体在缺氧、中毒等.
情况下最容易发生线粒体肿胀，线粒体轻度肿胀或者肿胀通常被看作是细胞老化或损伤的标志，而线粒体崩解则是细胞衰老变化的重要标志[23]。线粒体超微结构的改变，如肿胀、脊断裂和空泡化等，可影响线粒体能量代谢调节,ATP酶活性发生改变,钙离子稳态失调等系列功能变化[24]。
本研究结果显示，老龄安静组大鼠相比青年龄安静组大鼠和老龄运动组大鼠，线粒体形态的改变主要表现为线粒体膜破损和线粒体嵴减少、断裂。
线粒体膜和嵴的完整性能提高能量转换的效益，增强ATP的合成机能，一方面可满足耐力运动对能量的需要，另一方面也可保持线粒体呼吸链的通畅，避免因呼吸链活性受阻引起ROS.
生成进一步增多和积聚，从而引起线粒体内膜氧化损伤，降低膜流动性、导致膜脂质降解等，影响线粒体合成ATP，ATP合成障碍又会导致自由基产生增多，增多的自由基.
若得不到及时清除，可引起线粒体生物膜结构蛋白脂质过氧化，损害线粒体膜的通透性，引起线粒体电子传递链活性的进一步下降，氧自由基生成进一步增加，进而形成恶性循环，最终导致细胞或组织功能的丧失。
ShiQ[25]等对运动大鼠肝脏进行研究后，认为适宜的运动能减轻线粒体的氧化损伤，刘丽萍[26]和刘小红[27]等认为有氧运动后，组织中线粒体形态学上的改变为线粒体数量增多，体积增大，线粒体嵴也有增多的现象，陈彩珍[24]等发现有氧运动能明显改善老年小鼠骨骼肌线粒体的体密度、面密度、平均周长、平均面积和平均体积。从衰老的自由基学说来看，运动性抗氧化能力的增强，可减轻ROS对线粒体膜和蛋白质、脂类及mtDNA的损伤，改善线粒体氧化磷酸化功能[28]。
本实验中运动组老龄大鼠心肌线粒体损伤较安静组老龄大鼠小，线粒体完整性较安静组老龄大鼠高，这可能是长期有氧运动提高心肌抗氧化酶活性，减少ROS对线粒体膜的完整性的损伤，保持线粒体呼吸链的通畅，避免因呼吸链活性受阻引起ROS生成进一步增多和积聚，是适宜运动延缓心肌衰老的表现之一。
1、递增有氧运动能提高老龄大鼠心肌抗氧化酶活性，增大抗氧化酶活性与MDA比值，保护心肌组织因衰老而导致的自由基的损害，延缓心肌衰老；
2、心肌线粒体形态学观察结果显示：长期递增有氧运动能改善老龄大鼠心肌线粒体结构，保护线粒体膜和嵴的完整性，延缓心肌线粒体因衰老而导致的退行性变化.
[1]陈彩珍，卢健，许永刚年龄相关的小鼠心肌线粒体形态变化的电镜定量研究[J]广州体育学院学报
2000；（20）2：39-42
[2]刘晓莉，侯莉娟，刘S，喻云梅，乔德才间歇性无氧运动对小鼠脑、心肌、骨骼肌抗氧化能力及脂质过氧化损伤的影响[J]中国运动医学杂志2004；（23）4：390-394
[3]刘洪珍，孔喜良，傅静波，曹登峰，苏长英有氧运动对自由基代谢和谷胱甘肽抗氧化体系的影响[J]
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