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我国MSM人群HIV-1急性感染者中主要流行的CRF01-AE亚型毒株感染性分子克隆的构建其生物学特性应用研究.pdf97页
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IV-1急性感染者中主要流行的 我国MSM人群H CRF01一AE亚型毒株感染性分子克隆的构建及其生物 学特性研究 HIV CharacterizationofanInfectious Isolationand Type MSMwith fromanacuteinfected 1Molecular Clone CRFO mainlyprevalent1．．―．AlE E三 寸 一级学科： 坚鏖匡堂 二级学科： 堕鏖捡坠途堑堂 论文课题起止时间：2QQ2生2旦二2Q12生垒旦 中国医科大学 辽宁 201 2年5月
万方数据 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 ㈣㈣㈣删洲㈣Ⅲ洲删： 。?jj ―――――――――]-”《～ 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及
取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论
文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，一也不包含为获得我校或
其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研
究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在
攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离
校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师
为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国
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校可以公布学位论文的全部或部分内容 保密内容除外 ，以采用影印、缩
印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 万方数据 目
录 一、摘要 中文论著摘要……………………………
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艾滋病实验室检测管理与设备维护
艾滋病实验室检测管理与 设备维护河北省疾病预防控制中心 性病艾滋病预防监测中心 赵翠英HIV抗体检测的目的? 监测:以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而 进行的检测，检测的人群包括各类 高危人群和一般人群。? 诊断:以诊断为目的的检测是为了确<b
r />定个体HIV感染状况而进行的检测， 包括临床检测和自愿咨询检测、术 前检测、根据特殊需要进行的体检 等。? 血液筛查:以血液筛查为目的的检 测是为了防止输血传播HIV而进行的 检测，包括献血员筛查和原料血浆 筛查。HIV抗体检测的要点? 筛查试验阳性不能出阳性报告。 ?严 格 遵 守 实 验 室 标 准 操 作 程 序（SOP）。 ? 严格按照试剂盒说明书操作。 ? 注意防止样品间交叉污染。常规程序 ? 初筛-复检-确认 复检： 对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂 和另外一种不同原理或不同厂家的筛 查试剂重复检测。如两种试剂复测均 呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性； 如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送 艾滋病确认实验室进行确认。HIV抗体筛查试验流程图样 品 筛查试剂 筛查检测 阳性反应 阴性反应原有试剂加另外一种筛查试剂重复检测均阳性反应 送确认实验室 进行确认一阴一阳均阴性反应阴性报告HIV抗体确认试验流程图免疫印迹法(HIV1/2 混合型)阴性反应HIV-1 阳性反应不确定反应 应出现 HIV-2 指示条带 免疫印迹法（HIV-2）阴性报告HIV-1 阳性报告 阳性反应 阴性反应报告 HIV-2 血清学阳性 必要时测核酸不确定反应阴性报告每 3 个月随访一次，共 2 次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性一、HIV抗体诊断?临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体， 包括初筛和确认两个方面。HIV抗体一般 在感染后几周逐渐出现，可延续至终身， 是重要诊断依据，但是从感染到血清抗 体阳转有一段窗口期，平均为1到3个月， 还有一小部分比例的HIV感染者出现迟缓 反应，95%以上HIV-1感染者产生抗体的 时间是在感染后6个月以内。常用样品主要为血液 此外还可用唾液检测HIV（Orasure，如 Salivacard），尿液检测HIV抗体 。常用方法酶联免疫吸附试验（ELISA） ? 明胶颗粒凝集试验（PA） ? 斑点免疫试验（或免疫层析）：胶体金 或胶体硒?双抗原夹心ELISA试验原理▲ 此类试验比较敏感和特异，可检 测血清中的IgA、IgM、IgG抗体。 ▲ 将HIV -1/2混合抗原包被在微孔板 底部。? “一步法”--实验时加入待检血清和辣 根过氧化物酶标记HIV-1/2混合抗原 ? “二步法”--实验时先加入待检血清， 温度处理后，再加酶标记HIV-1/2混合抗 原双抗原夹心ELISA试验原理▲ 温度处理后洗涤。待检血清中如有特异性抗体，即将包被抗原和酶标记的抗 原桥联在一起，如无抗体，通过洗板而 洗去酶标记的混合抗原。加入的底物同 被桥联抗原上的酶发生颜色反应，指示 抗体存在，如无抗体参与则无显色。▲ 实验中设阴性对照和阳性对照。明胶颗粒凝集试验(PA)原理以HIV抗原致敏粉红色明胶粒子(载体)。 这种致敏载体和血清中HIV抗体相遇被桥 联而出现肉眼可见的凝集反应,非致敏的 明胶粒子因无抗原参与,则不发生凝集。 如果试验中的未致敏粒子对照出现凝集， 即提示血清中含非特异性凝集因子，需 用未致敏粒子吸附处理，重新做试验。目前已有HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA 试剂（AFD HIV 1/2 PA）和HIV-1、HIV-2抗原 分别致敏的PA试剂（AERODIA-HIV-1/2）。前 者可用于HIV1/2的筛查，后者可用于区分HIV-1型和HIV-II型。其缺点是判定结果用肉眼观察，无法保存。 目前这问题已得到解决，为了保存试验结 果，试剂盒可配备数码相机。雅培Determine（硒标） 快速试剂试验原理雅 培 Determine HIV1/2 快 速 测 试 试剂是一种用免疫层析法原理,定性 测定血样中HIV1/2抗体。加样本入反应条，当样品通过硒胶体抗原结合物时，与硒胶体-抗原结合物混 合重组结合，此混合物继续迁移通过固 相包被的合成肽和重组抗原的结果窗。 如果样品中含有HIV1/2抗体，其抗体将 会与硒胶体-抗原结合，并在窗口处被固 相包被的合成肽和重组抗原所捕获固定， 形成一条红线。如果样品中不含HIV1/2 抗体，则无红线形成。 为了保证结果有效，在反应条中含有 质控条带。金标快速试剂试验原理CHEK HIV-1+2 （EY） 将HIV抗原吸附在基膜上，加入待检 标本后,如果标本中有HIV-1或HIV-2抗体， 抗体便被吸附在基膜的抗原上，加入P-A 金标记溶液，而其Fc部位则和P-A金标记 物结合, 形成如三明治般的粒子，出现 肉眼可见的粉红色圆点。窗口期和残余危险度1、窗口期：HIV感染后至抗体检出前的一段时间称 为窗口期。 2、残余危险度(residue risk)：在目前条件下，筛查后 仍具感染性的机率。影响残余危险度的主要因素 包括窗口期、试剂质量、实验室质控以及人群感 染率等。各国的残余危险度不一，美国1985年是 1/2500,随着检测试剂完善，包括“O”亚型的检出、 IgM和p24抗原的检测，到1995年降至1/44-66万； 据报道非洲为5/1000,泰国1/775,肯尼亚 1/50。二、艾滋病病毒的抵抗力HIV抵抗力? HIV一旦离开宿主在外界环境中生存能力便很快消失，HIV对环境中的物 理因素和化学因素抵抗力均较弱， 比乙肝病毒（HBV）的抵抗力低得多。 因此，对HBV有效的消毒和灭活方法 均适用于HIV。HIV抵抗力--物理因素? HIV对热很敏感，对低温的耐受性强于高温。因此，可以用高温 灭活HIV，在低温条件下保存HIV。 ? 对紫外线不敏感：用紫外线、γ 射线不能灭活HIV。HIV抵抗力--物理因素?HIV灭活：美国疾病控制中心证明，在干燥环 境中的HIV 浓度在几小时之内降低90～99% （即降低1～2 log ）。在室温（22～27℃） 液体环境下HIV可存活15天以上；经56℃处理 30分钟，可使HIV在体外对人T淋巴细胞失去感 染性，但不能完全灭活血清中的HIV；血清中 HIV经过60℃3小时或80℃30分钟作用后不能检 出感染性HIV。目前，世界卫生组织推荐的逆 转录病毒灭活方法是100℃20分钟。HIV抵抗力--物理因素? HIV保存： ? 在-70℃不加保存剂冷冻保存，其感染性可丧失。但若在-70℃保存于 35%山梨醇或50%小牛血清（FBS）可 存活3 个月以上，在液氮中（196℃）HIV可存活数年以上。因此， 毒种必须置于液氮中方可长期保存。HIV抵抗力―化学因素? HIV耐碱不耐酸：在pH3.0条件下HIV滴度在10分钟可下降4个对数级，而 pH值高达9.0时，HIV滴度下降甚微。 ? 对含氯消毒剂敏感。0.5％次氯酸、 2％戊二醛溶液、3％碘酒、6％过氧 化氢可在3～5分钟内灭活HIV。实验常用的消毒办法高压蒸汽灭菌 (121℃ 20分钟) ? 干烤 170℃ 2小时 ? 煮沸 20分钟 ? 消毒剂浸泡30分钟，常用消毒剂为5％可 用氯(次氯酸钠、次氯酸钾、氯氨T)、6 ％过氧化氢、2％戊二醛等。70%酒精1分 钟可灭活HIV。?三、HIV实验室检测管理艾滋病检测工作规范要点实验室设置 国家艾滋病抗体检测参比中心 艾滋病抗体确证实验室--卫生部批准 艾滋病抗体初筛中心实验室--卫生厅审 批 艾滋病抗体初筛实验室--卫生厅审批 ? 各级实验室承担相应的任务?确证实验室职责对初筛实验室人员技术培训 ? 对初筛实验室考评或验收 ? 对初筛实验室进行年度质控血清考核 ? 评估省内所使用的HIV抗体检测试剂 ? 省内各级初筛实验室的质控管理 ? 艾滋病抗体初筛实验阳性标本的确证 ? 向上级部门报告检测工作?艾滋病抗体初筛中心实验室职责? ? ? ? ??本地区初筛实验室的技术指导和管理 本地区初筛实验室人员的技术培训和咨询 本地区初筛实验室的质量管理和质量控制 对初筛实验可疑阳性或阳性标本的复检 承担艾滋病抗体的初筛实验和咨询 汇总本地区艾滋病检测结果并上报初筛实验室的职责艾滋病抗体初筛实验和检测前后的咨询 ? 及时向中心实验室送检初筛实验阳性或 可疑阳性标本以及需做确证实验的标本 ? 作好本实验室的各项管理，如标本登记、 实验记录、安全记录等。 ? 按规定向上级报告实验室工作和检测的 阶段总结?初筛实验室的基本条件?房屋--清洁区、半污染区、污染区，控温?设备--酶标仪、洗扳机、冷藏，微机，高压灭菌器、生物安全柜、洗眼器等 ?人员--3名以上技术人员，含1名中级以上 技术职称。全部须经专业技术培训 ?质量保障措施 ?安全保护措施--环境、个人 ?具备各项规章制度HIV抗体检测实验室结构示意1HIV抗体检测实验室结构示意2HIV抗体检测实验室结构示意3人员防护的基本装备隔离衣（一次性） ? 帽子 ? 口罩 ? 眼镜（依据个人视力配置，不准移出实 验室 ? 能保护脚面的、便于消毒、清洗的实验 室用鞋?生物安全柜微 生 物 安 全 柜 microbiological safety cabinet (MSC) 生 物 安 全 柜 biological safety cabinet （BSC） 操作危险性微生物时所用的箱形空气净化 安全装置，保护使用者和环境不受因为 操作产生的有害危险物质和微生物气溶 胶的伤害。生物安全柜按防护水平分为I 级、II级、III级。为什么使用生物安全柜1. 生物安全柜主要用于各种微生 物,特别是有害微生物的操作和 基因工程操作。 2. 根本目的是保护工作人员健康 和柜外环境安全。 3. 根据保护对象和程度的不同， 生物安全柜分为I、II和III级。生物安全柜的分级?1. I级生物安全柜：保护工作人员 ? 和环境。 ? 2. II级生物安全柜：保护工作人员 ? 、环境和样品。 ? 3. III级生物安全柜：采用手套箱更 ? 严格地保护工作人员、环境和试样 ? （产品）。II级生物安全柜分类? ? ? ? ? ???1. II级A型生物安全柜：70%柜内循环， 30%空气排出，无连接法蓝 2. II级B1型生物安全柜:30%柜内循环， 3. II级B2型生物安全柜:100%空气排出 4. II级B3型生物安全柜：70%柜内循环， 30%空气排出，有连接法蓝。 5. II级A/B3型生物安全柜：兼顾A型和 B3型生物安全柜的选用1. 凡进行有害微生物和转基因操作， ? 均应使用生物安全柜，不可用净化 ? 工作台。 ? 2. 根据工作性质和防护要求，选用 ? 适当级别和型号的生物安全柜。 ? 3. 产品质量。 ? 4. 售后服务。?微生物防护性能?1.对工作人员的防护性能 ?2.对样品防护性能 ?3.交叉污染防护性能初筛试剂要求* * * * * HIV－1/2混合型 卫生部批准文号 卫生部药政局检定所批批检,并贴有防伪标签 进口初筛试剂要有我国的注册证明 敏感性高、操作简便、价格低廉和相对好的特 异性, * 常用初筛试剂:酶联免疫吸附试验、凝聚试验、 免疫斑点试验等。艾滋病抗体检测结果的报告?初筛试验结果: * 初筛实验室HIV抗体检测的阴性结果，可以出 据试验阴性的报告单，并标明所用试剂名称、 试剂效期、试验者等内容。可通过咨询通知本 人。 * 初筛HIV抗体阳性，只视为HIV抗体可疑阳性， 初筛实验室无权向个人或送检单位报告阳性结 果。可出据“HIV抗体待复查”报告。需再次 采血送确认实验室作确认试验艾滋病抗体检测结果的报告?确认试验结果: * 阳性结果，只有卫生部批准的HIV抗体 确认实验室有资格出据阳性报告，同时 按照疫情报告程序和要求呈报有关部门， 并经充分分析具体情况决定通知受检者 * 阴性结果，将阴性结果报给送检单位， 可以通知受检者HIV抗体检测情况报告艾滋病抗体初筛实验室，每月5日前将上 月的检测情况报初筛中心实验室； ? 艾滋病抗体初筛中心实验室，每月10日 前将本实验室和辖区内各初筛实验室上 月的检测情况汇总后，报省艾滋病确认 实验室； ? 统一使用“HIV抗体检测数月报表”，参 照《全国艾滋病检测技术规范》(2004年 版)的附表6（由季报改为月报）。?报告方式?首选电子邮件方式： 以电子版的形式按时发送到 .cn 路新利 收另外----补充说明对于“自愿咨询检测月报表”， 要求县（区）级疾病控制机构于每月5 号前报市级CDC，市级CDC每月10号前 报省级CDC。 ? 报告方式： 首选电子邮件方式： 以电子版的形式按时发送到 .cn 路新利 收?四、HIV检测实验室常用设 备的维护和校准不同级实验室的必备条件?人员条件 初筛实验室：有3名以上的医技人员，其 中中级卫生技术职称人员1名以上，从事 病毒血清学检测技术工作2年以上，接受 过国家或省级HIV抗体确认中心举办的 HIV抗体检测学习班培训，并获得合格证 书。?确认实验室：有5名以上的医技人员，其 中高级卫生技术职称人员1名以上，中级 卫生技术职称人员2名以上；担任确认试 验的操作人员，需从事病毒血清学检测 技术工作5年以上，HlV抗体筛查工作3年 以上，受过国家或省级HIV抗体确认中心 举办的HIV抗体确认试验学习班培训，并 获得合格证书设备条件?初筛实验室：有独立的实验用房，污 染区和清洁区要分开。 包括酶标读数仪和洗板机、精确的移 液器、专用的普通冰箱、低温冰箱、 离心机以及各种消毒与污物处理设施、 安全防护用品和恒温设施。 生物安全柜确认实验室：有单独的实验用房，设清洁区、 半污染区和污染区三个区域. 包括专用的普通冰箱、低温冰箱、水浴箱、 温箱、离心机、酶标读数仪、全自动洗板 机、旋转震荡器、摇床、精确的移液器、 贮存或分析资料用的专用电脑和必要的摄 影器材、必需的消毒和污物处理设施、具 有初筛和确认试验所需的安全防护条件和 有关设备，以及实验室恒温设施，并要建 立血清库。影响检测质量的一些重要因素人设备环境目前HIV检测实验室常用设备?检测设备 酶标读数仪和洗板机、精确的移液器、普 通冰箱、低温冰箱、离心机、摇床、水浴 箱、成像仪、病毒载量检测和流式细胞仪 安全设备 生物安全柜、高压灭菌器、护眼器?有关设备需关心的问题选购使用 维护、保养 检定、校准设备需配备的档案资料仪器设备档案的内容应包括： (1)仪器设备产品使用说明书 (2)仪器设备验收记录 (3)仪器设备检定或校验记录 (4)仪器设备检定或检验合格证书 (5)使用记录 (6)检测前后仪器设备情况记录 (7)故障及维修记录?仪器使用登记表开机、关机时间 ? 仪器运行状况 ? 检测样品状态及数量 ? 使用人?仪器维护登记维护人员 ? 维护项目 ? 结果 ? 时间?HIV实验室的设备维护日常维护 ? 定期检定和校准?设备对环境的普通要求电源：电压一定要匹配，插线板合适， 专用的.经常停电或电压不稳的实验室， 建议配备稳压器和不间断电源 ? 环境：清洁，温、湿度合适 ? 良好通风 ? 长时间不用的设备，注意特别容易坏?酶标仪日常维护-最常用的设备酶标仪的日常维护项目 每日 每周 每月 每年 根据 需要 擦拭仪器 ● 使用完后罩上仪器罩 ● 使用蘸有去离子蒸馏水的 湿布擦拭仪器外部、皮带、 导轨及载板 清洁和检查滤光片状态和 滤光片轮位置 清洁光路系统 如有生物危害物质溅至仪 器或送工厂维修前需对仪 器进行消毒● 2× ●●常规维护和保养??? ??? ?使用符合仪器规范要求的电压 避免接触仪器的光学部件 保持光学系统清洁，以保证正常的功能和结果无误 防止液体溅入仪器 注意仪器的防尘，不使用时罩上罩子 定期对酶标仪进行校准 可使用中性实验室清洁剂对仪器的按键和外部进行 清洗洗板机的注意事项每天操作注意事项： 1、每天打开机器后 →用蒸馏水进行一至两次的冲洗洗板机内部操作； →倒空废液瓶中的废液； →检查洗液瓶的洗液是否充足； →酶标条在酶标仪板中是否放置水平，不到一排应补足一排； →洗板之前，先用所需的洗液对洗板机内的其它液体进行冲洗， 避免洗板时液体混用。 2、当运行时 →随时检查废液瓶中的废液，控制在三分之二以下； →随时检查洗液瓶中的洗液，控制在三分之一以上； 3、在关机前 →用蒸馏水进行一至两次的冲洗洗板机内部操作； →倒空废液瓶中的废液； →将洗液瓶内的洗液移出，避免结晶； →注意防尘。洗板机的日常维护?请勿将试剂或液体洒在洗板机上！万一不小心将试剂或液体洒在洗板机上，请立即用 干布或吸水纸将液体擦干，以防止液体侵蚀仪器表面 。 ?日常的仪器表面清洁 日常工作中，请注意保持洗板机表面的清洁。可以 使用温和的家庭用清洁剂进行清洁。而酶标板传送系 统的周围，请用干布擦拭。警告： 请勿使用强腐蚀性或其它清洁力很高的清 洁剂。洗板机的日常维护? 每天对洗板机的内部清洗由于洗板用的洗液都包含有盐的缓冲液，容 易凝结成晶体（固体）而阻塞洗板机内部的管 子或连接处。因此请每天对洗板机进行内部冲 洗。不进行工作时，请勿将洗液充满洗板机内 部管子很长时间。警告： 在长时间不使用洗板机时，请多运行内部冲 洗程序几次，以保证在重新使用时洗板机能正常工 作。 警告： 造成洗板机不能正常工作或其精密度降低（ 如加液不准、洗涤不充分等）的常见原因是洗板机内 部结晶问题。因此切记，应经常对洗板机进行内部冲 洗。洗板机的日常维护如何清洁洗头造成洗头不能正常工作（如不加液、不吸液等）的 原因是洗板机内部的结晶问题。如出现结晶问题， 请反复用蒸馏水冲洗管道或使用洗板机自带的维护 工具进行清洁维护。移液器维护和保养最常用却最易被忽视的 常规维护，每天进行 ? 用70%的酒精擦拭表面 ? 定期校验，六月一次?维护和保养用70%的酒精经 常擦拭 ? 用随枪配备的工 具拆卸、装配， 简单易行?移液器的校准? 所有移液器在出厂前均已校准 ? 通常不需校准移液器的校准通常推荐6月一次 ? 需校准的原因 -经常使用 ? -要求高的准确性 -要高压灭菌 ? -用于移高粘稠性、高密度溶液 -温度变化大?厂家校准? 两点法校准--在最小量程体积处校准，在最大量 程处核对 ? 校准证书(包括) ? 型号、管嘴和序列号 ? 校准人员、时间、温度 ? 有关天平的信息实验室自行校准校准设施和测试环境? 十万分之一或万分之一的分析天平 ? 蒸馏水或去离子水? 无通风房间，温度在20-25C，相对湿度55%以 上实验室自行校准检查校准 ? 检查移液器的最大和最小容量值（最大值的10%） ? 新管嘴预湿3-5次，对两个容量进行各十次移液测 试 ? 计算两组的准确度和精确度，并将结果与说明书所 列的限定值范围比对?结果在限定范围内为准确，在之外则需用维修工具 顺时针或逆时针调节超低温冰箱注意事项定期清理箱体内左 下角温度传感器， 保证传感器不被样 品及霜覆盖（建议 每月一次） 定期清理箱体右上 方真空泄压阀（建 议每月一次） 定期清理密封条（ 建议每月一次超低温冰箱注意事项?如需停机长期不用，在 关掉主机开关后应同时 把电池开关关闭超低温冰箱注意事项? 定期清理灰尘过滤器（建议每月 一次）超低温冰箱注意事项要求环境温度控制在28度以下 ? 空间的清洁 ? 稳定的电源供应 ? 不宜放得太挤?生物安全柜?HEPA-过滤装置容纳 有害生物气体。 需提供人员保护 也为产品提供保护? ?(按等级而定)二级生物安全柜II级生物安全柜的细分及特征原分类 现行NSF分类 排气特性Class II, Type AClass II, Type B3 及 A/B3 Class II, Type B1Class II, Type A1Class II, Type A2 Class II, Type B170%气体循环，30%气体排放室内70%气体循环，30%气体由管道排放 至废气通道 30%气体循环，70%气体由管道排放 至废气通道可适用于有微量挥发性有毒化学物质 和痕量放射性核素作为微生物学研究 的添加剂的工作场合，但是对这些化 学物质和放射性核素的处理应在安全 柜的直接排风区内，或者当垂直气流 循环时，它们不会影响操作。Class II, Type B2 Class II, Type B2 0%气体循环，100%气体由管道排放 至废气通道 适用于使用挥发性有毒化学物质和放 射性核素作为微生物学研究的添加剂 的工作场合。生物安全柜主要组成部分HEPA 过滤器???带动气流的电机和鼓风机电机/鼓风机速度调节器?合适的入气量、管道工作和空气平衡 控制器生物安全柜的维护? ? ?每年检定一次安全柜 保持所有操作在窗扇4英寸以内清洁物质和污染物隔离开，减少相互 干扰使用后及时清理 柜内不宜放太多的物品，不能储藏化 学物质? ?Class II 生物安全柜操作程序清洁程序用70%的乙醇或其它消毒剂清洗内部 表面 避免用强腐蚀性的清洗剂Class II 生物安全柜操作程序关机??移去无关物品打开 U.V. 灯，照射半 小时离心机的维护转头、套桶使用离心机的注意事项? ? ? ? ???离心力、离心速度 平稳的仪器台 不用时，松转头；使用时，拧紧 转子保持平衡 使用安全：盖子要严 使用后要擦干或开盖至晾干 防止液体泄漏到腔内高压灭菌器? ?大部分为立式 高压、高温双扉高压灭菌器?在p3和p4实验 室使用灭菌样品的类别? ? ? ??液体样品： 液体、培养基、发酵液等 固体体样品：器械、玻璃器皿、有金属或玻璃 制成的简单设备、滤器架、发酵罐、塑料等 多孔类材料：纺织材料、滤器、加样器和加样 器头、注射器（空）等 混合材料：液体、固体、多孔类材料等的混合 物。对于含水量高的材料，推荐分开灭菌 废物/垃圾：该类可能以生物或基因工程材料的 方式出现，包括固体、多孔类材料或混合物?包装：包裹或未包裹，或放置于金 属或塑料的容器中。生物安全实验室高压灭菌器的验证和再验证仪器和过程的验证初始验证工厂测试使用校正过的测量系统或数据自 动记录系统进行温度和压力曲线 的测定，并测定真空（如果有的 话） 使用校正过的测量系统或数据自 动记录系统进行温度和压力曲线 的测定，并测定真空（如果有的 话） 使用生物指示剂（DIN EN 866)， 选取有代表性的最小和最大装样 量进行测试，并使用适当装样量 对每个灭菌程序进行验证。 每年对传感器和测定系统进行校 准 使用生物指示剂（DIN EN 866)， 选取有代表性的最小和最大装样 量进行测试，并使用适当装样量 对每个废物灭菌程序进行验证。 由制造商提供保养计划S1实验室级别 S2 S3S4++++安装测试_(+)++现场验收测试_(+)(+)(+)再验证校准 _ _ + (+) + + (+) + + (+) + +生物测试 保养灭菌器的维护压力表需要定期检验 ? 等气压和温度下降到正常后,再开阀 ? 高压时,放入指示纸,以便判定灭菌效果?溯源和校准程序◇ 对检验的准确性和有效性有影响的 仪器设备必须进行检定和校准。 有国家计量检定规程的仪器设备，由法 定计量检定机构或经计量行政部门授权 的技术机构进行检定； 没有国家检定规程的，可以由厂家、自 行检定和校准。每年制订仪器设备周期检定计划。 ? 经检定的仪器设备均应按检定或校验结 果贴上标志，合格标志为绿色、准用标 志为黄色、停用标志为红色。 ? 凡检定不合格或超过检定有效期的仪器 设备，一律不得用于检验工作。对超过 检定期，但暂时不用的仪器设备，贴上 停用标志。??计量仪器（量具除外）在两次检定和校 验之间，应根据其使用程度及仪器的具 体情况安排运行检查。计量负责人负责 制定运行检查规程和相关原始记录表。 规程应至少包括以下内容：运行检查周 期、检查项目及方法、合格判定指标。?所有检定计划、运行检查计划、仪器设 备检验规程、运行检查过程及检定证书、 测试报告或校验记录、运行检查记录等 资料应及时存档。?在实际工作中应当分析检测设备和计量器具对 分析测试结果的影响，特别要注意“用于检测 的所有设备”和“辅助测量设备”两点。 1）如果承担分析检测工作的主要仪器设备 对环境有特殊要求，并且该要求会对检测结果 有重要影响，则环境检测设备的检定和校准就 很重要，如温度计、湿度计、及实验室洁净度 检测仪器等。2）检测结果要可追溯，也就是检测、 检定和校准可以链式溯源，必须保证不 能断链。不仅大型仪器设备需要定期检 定校准，特别要注意小型设备、计量器 具、标准物质和标准样品都要有可溯源 的校准链。测量溯源性?ISO/IEC17025（检测和校准实验室认可准 则）:1999标准要求“用于检测和（或）校准 的所有设备，包括对检测、校准和抽样结果的 准确性或有效性有显著影响的辅助测量设备 （例如用于测量环境条件的设备），在投入使 用前应进行校准”。实验室应制定设备校准的 计划和程序。设备检定和校准对分析测试结果 有非常重要的影响，大型设备通常都有较完备 的计划和程序。强制检定的工作计量器具目录HIV检测强制检定仪器：天平、加样器、酶标仪、温度计、水浴箱?在仪器设备档案中应有仪器设备一览表 (内容包括仪器设备名称、技术指标、制 造厂家、购置日期及保管人等)、仪器设 备检定周期表(内容包括仪器设备名称、 编号、检定周期、检定单位、最近检定 日期、送检负责人等)、仪器设备档案总 目录和仪器设备档案借阅记录等。检定和校准的法律依据?使用强制检定的工作计量器具的单位或 者个人，必须按照规定将其使用的强制 检定的工作计量器具登记造册，报当地 县（市）级人民政府计量行政部门备案， 并向其指定的计量检定机构申请周期检 定。当地不能检定的，向上一级人民政 府计量行政部门指定的计量检定机构申 请周期检定。?强制检定的周期，由执行强制检定的计 量检定机构根据计量检定规程确定。 属于强制检定的工作计量器具，未按照 本办法规定申请检定或者经检定不合格 的，任何单位或者个人不得使用。谢 谢！
2015 年艾滋病筛查实验室质量控制计划为确保 HIV 筛查实验室的检验检测过程和...2. 对重点仪器设备按计划进行定期维护保养, 如有需要可增加相关维护和保养次 ...5-全国艾滋病检测实验室信息管理系统操作手册-业务部分-_行政公文_工作范文...5 5.1.1.6 检测设备维护 ......病检测实验室的设置 艾滋病检测实验室实行分类管理。...3、仪器设备:配备血清学检测和 BSL-2 所需仪器...仪器的使用与维护,结果解释与报告,检测 数据的记录,...艾滋病初筛实验室SOP文件_医药卫生_专业资料。艾滋病...仪器设备应定期保养,有温度记录,检测标 本的保存...设备管理制度 1.由科主任或科室主管负责监督和检查...艾滋病检测筛查实验室基本标准(一)艾滋病筛查中心...3、仪器设备条件 配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需...仪器维护及生 物安全质量管理均应分工及职责明确。 ...发布日期 本程序规定了设备购置、验收、使用、维护、维修、停用、报废的管理办法...目的 艾滋病实验室纠正措施程序 文件代号 第第 1 页 2 版 XYCDC/QB49-2007...艾滋病检测实验室资质认定自查表符 评审内容合 1 组织...检测、运送,仪器维护及生物 安全质量管理均应分工及...4 仪器设备(含标准物质、试剂、实验消耗品) 仪器...制定完善了《实验室管理制度(总则) 》、 《艾滋病...仪 器设备按要求进行了强检。检测实验中使用了内、...设备建设,加强现有设备保养维护,保证实验室正常 运转...HIV 抗体初筛实验室 SOP 文件 科室: 检验科 目录 ...3. 认真开展实验室质量控制工作,仪器设备应定期保养...-6- 设备管理制度 1.由科主任或科室主管负责监督...第六条 国家对艾滋病检测实验室实行分类管理,按照...国家规定需要强检的仪器设备,必须由 同级或上级计量...强检的仪器设备应定期要求厂家或 供应部门维护和校准...
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