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食管鳞癌分泌型血清蛋白标志物的分离和鉴定探究.pdf180页
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中国协和医科大学 博士学位论文
食管鳞癌分泌型血清蛋白标志物的分离和鉴定 姓名：张立勇 申请学位级别：博士 专业：细胞生物学 指导教师：赵晓航;吴F
中国骆靼医科大学博士研究生学位论文
中文攘要4 食管鳞癌血清2．DE／MS的差异鬣自质缀学研究 食管鳞癃是～茅孛发疯率和死亡率较疯的疾病。耳翦尚无特异蛋自标恚物
艇楣关投递。识别彝鉴定食转瘿糖关熬搽恚簧自，尤其怒那些存在予各秘体
滚中鲍分泌型浆瓣瘸相关蛋翻f酞等，不仅有劫予食管癌懿旱麓诊断，露嚣鸯
韵予阐明瓣瘸发生发震的杌瀚。 应用2一DE比较分析了5铡食管鳞瘸术前，术后配对舡清和12对食管鳞
癌术前，难常配对血清的疆自表达谱，发现一组差异表达的蛋白质，其中之一
低表达。RT-PCR和Westernblot证实了这～发现。
巾不表达，仪在禁些正常鳞状上皮豹囊化部分表达。Clustedn定位予食管主
波下潘毒层中静巯松结缔组缎牵，磐食警豫编臆施浆、导管艨上皮稳膜和施
浆，黻及反应性增生静淋巴滤泡中静淋巴细胞胞膜、胞浆等部位。在食管鳞
癌缅胞中不表达，仅部分出现于穗原丰富的鳞状上皮即分化成熟的癌细胞星。
疫组化显示，clusterin在食管上皮、贲门腺上皮、胃粘膜细胞、肝细胞、脾
脏淋巴细胞、肌细胞中表达：在胎脑和胰腺中不表达。在clusterin鄹GFP
共转染的人食管鳞瘿细胞系中，clusterin定位于EC0156缨腿豹骢膜秽照浆。 Clusterin是一秘掰发现豹分泌型瓣食警鳞癌盘涛候选栎恚蛋冬。
Clusterin在斑浆巾熬丢失与食管鳞癌静发生发展密韬裙关。2．DE／MS技术是
快速诀识胖瘸异常表达蛋鑫矮维的有效手段。
关键诃：食管鳞癌、丛集素、血清肿瘤标志物、2-DE、MALDI．TOF。MS 皇星垫塑墨
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【求助】请教流式细胞仪样品准备
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这个帖子发布于11年零329天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
欲收集腹水细胞做流式分析T细胞凋亡情况，流式是送别处做的，请问送去前样品需做哪些处理，要固定染色吗？还有，需要先从腹水中分离出T细胞吗，还是直接离心腹水弃上清就可以了？
初学者，还没开始实验，问题比较低级，请勿见笑
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收集细胞，离心后加70％乙醇置于－20℃固定过夜。PBS冲洗后加入Rnase（终浓度为100μg·ml－1）于37℃消化30分钟。再以PBS冲洗，400目的滤网过滤。应该不需要自己染色。
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能否告知为何要加入Rnase？
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好像凋亡不能染色时间长吧？？
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1.你欲收集腹水细胞做流式分析T细胞凋亡情况，采用的是什么方法？2.流式细胞术检测所用细胞样品要求较高，一般推荐是离体后6小时内上机检测。3.如是采用Annexin V＋PI检测细胞早期凋亡，在你抽取腹水离心后，用PBS洗涤2次后，加入PBS重悬细胞，加入Binding buffer和Annexin V、PI，室温避光孵育15分钟，30分钟内上机检测。4.如是采用细胞周期法（DNA含量分析）检测细胞的凋亡，则是检测晚期的细胞凋亡。细胞在染色前，首先经去污剂处理，使细胞通透性增加，或者用沉淀固定剂进行固定。
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derman 欲收集腹水细胞做流式分析T细胞凋亡情况，流式是送别处做的，请问送去前样品需做哪些处理，要固定染色吗？还有，需要先从腹水中分离出T细胞吗，还是直接离心腹水弃上清就可以了？
初学者，还没开始实验，问题比较低级，请勿见笑腹水中的细胞成分很复杂,包括很多的腹腔巨噬细胞,红细胞,成纤维细胞,等等…如果做分析的话我觉得肯定要根据你实验的要求做相对纯化分离,包括去除巨噬细胞和成纤维细胞(可以用贴壁法),红细胞(低渗裂解法等),这样才能使你收集的腹水里的目的细胞单一,做下游试验才可靠.至于样品做流式的处理,要看你用什么试剂来检测凋亡了,不同的检测方法处理方式都不全一样.比如做hoechst和PI双标就不适合固定,单纯的PI检测细胞DNA含量分析就可以用70%的乙醇固定24小时.具体要看你是什么试剂检测细胞凋亡最后我还不是很明白,?成熟的T细胞一般在循环血液中和外周淋巴器官(淋巴管),组成淋巴细胞循环和归巢,我认为腹水中淋巴细胞应该很少的啊?腹水细胞中T细胞凋亡的影响是怎么做呢?呵呵祝你好运哦!
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sunandsuny edited on
准备用流式检测ATG移植前后的抗原标记，样品应使用血清还是全血？急求，谢谢
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关于丁香园流式细胞的前处理(培养的细胞) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 流式细胞的前处理(培养的细胞)
摘要: [流式细胞的前处理(培养的细胞)] 请问一下做流式细胞前，培养的细胞应该怎样处理？谢谢！ 关键词:[培养的细胞]……
请问一下做流式细胞前，培养的细胞应该怎样处理？谢谢！
回复我也想知道啊，还有一般要准备那些东西啊回复流式细胞术检测样品推荐制备方法A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：(1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。(3) 用1ml含5% 人的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。 加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：（1）收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。（2）用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。（4）加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。（5）加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。（7）流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。C.细胞周期、细胞凋亡(Apoptosis)及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：（1）待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。（2）用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存 ，至少固定18小时。（3）调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。（4）PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。回复请 利州 站友规范发帖，不要让应助者失望！对于违规帖的有效应助是不予加分的回复PI单染法检测细胞周期1. 收集经过不同浓度药物处理的细胞株，用0.25%胰酶消化5min，完培终止消化，1500rpm离心5min，用0.1MPBS洗两遍，用预冷70%乙醇在-20℃固定24h，再用0.1M PBS洗两遍，弃上清；2. 细胞沉淀中加入0.1% RNA酶A溶液150ul，重悬细胞，4℃30min；3. 再加入0.1% PI染色液120ul混匀，4℃避光孵育10min；4. 将细胞悬液混匀，用200目过滤细胞到流式细胞管中，以除去细胞团块；5. 上FACScan流式细胞仪检测Annexin V/PI双染法测细胞凋亡(Apoptosis)率 给于药物干预后, 收集细胞, 用0.25%胰酶消化后, 离心（1000rpm,5min）弃上清, 用PBS洗两次,离心弃上清，加入5ul Annexin V +195ul PBS室温下10分钟, PBS洗一次,加入10ul PI + 190ul PBS, 上FCM检测比较各组凋亡百分率引自于《细胞凋亡(Apoptosis)的基础与临床》回复医生和球老师您好，我想用流式测一肿瘤细胞表面抗原的表达率。我有一抗和荧光标记的二抗，由于不是定的试计盒，所以不知道具体的操作步骤，也不知道加多少，什么条件下抚育多长时间。您能不能给我发个步骤方面问题呀。谢谢您了。 我一抗是herceptin（医院药用） 是荧光标记鼠抗人IGg 。 万分感谢。
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