真菌与霉菌或者霉菌可不可以测OD值

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来自山东东营&&女 40岁提问时间:
病情描述:什么问题会产生真菌D-葡聚糖严重超标
医生的回答
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病情分析:你好,β-D-葡聚糖检测主要是用于诊断真菌感染性的疾病的。指导意见:如果此指标明显增高,说明存在真菌的感染,尤其是一些深部组织的感染,需要积极抗真菌治疗。
来自美国&&女 33岁提问时间:
病情描述:浊度法是什么
医生的回答
回答时间:
浊度法:可用来测量菌浓度.其原理是发酵罐中的发酵液按照一定的流速进入流通式比色皿中,用500-600nm的波长检测发酵液的光密度.然后发酵液再流回发酵罐中.所测的OD值与细胞浓度成正比.
来自中国&&男 33岁提问时间:
病情描述:真菌B葡聚糖检测报告化验单子是什么样子的
医生的回答
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你好,你这问题,真不知怎么回答好,我这里没法上传图片。建议就医时需要该检查就可知道了。
来自广东广州&&男 23岁提问时间:
病情描述:你好 真菌d葡聚糖需要怎么医疗呢?
医生的回答
回答时间:
你好,D-葡聚糖检测主要是用于诊断真菌感染性的疾病的。如果增高,说明有真菌的感染,需要积极抗真菌治疗。
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细菌OD值的测定
我想问下,细菌OD值的测定,是通过测紫外,看特征吸收峰,但是怎么求这个OD值啊,有没有相关的公式呀,我不是做微生物方面的,不太懂~
不能离心吧,离心后大部分菌体沉淀,测出来的不是实际值。做好合适的稀释度直接测就行了
真菌的也一样吗?
真菌不大一样吧,真菌细胞较大,容易聚集成球状或丝状体。透光性不好,不宜用比色皿测定。 好像有人用干重 湿重来衡量真菌的量。
sorry,是不能离心。搞糊涂了,谢谢指正
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随时随地聊科研请问霉菌生长曲线测定方法 - 实验交流 - 生物秀
标题: 请问霉菌生长曲线测定方法
摘要: [请问霉菌生长曲线测定方法] 我要测定霉菌的生长曲线,但是细菌那种测定方法好象不行,请高人指点, 关键词:[生长曲线 菌丝 真菌 取样 菌体 离心 培养基]……
我要测定霉菌的生长曲线,但是细菌那种测定方法好象不行,请高人指点,回复用称量细胞干重的方法试试:)回复抽虑取菌丝体,105度干燥5小时测干重。回复实验下比浊法测定 看看能行的不?回复
抽虑取菌丝体,105度干燥5小时测干重。 不止五小时,是直道恒重!:)回复用OD值法!分时间段取样,测OD值。回复测OD值法,分时间段取样,测OD值,XY坐标轴 做点划线。理论上应该是抛物线。回复
用称量细胞干重的方法试试:) 干重法用过,误差好大回复楼上的各位,一看就是没有做过霉菌的,呵呵。
霉菌一般长到十几小时后就结球或者结团了,OD600几乎就跟水一样的,主要的细胞都在球或团里面。
然后这个球和团的分布也很不均匀,除非把整个摇瓶都称了。
上罐的时候,不说取的不均匀,你根本就没有办法把那些东西从罐里面取出来。
我也头疼这个事情,一般都没法测。
如果有高手,帮忙想想办法。回复菌丝体称重法,比较合适。回复
测OD值法,分时间段取样,测OD值,XY坐标轴 做点划线。理论上应该是抛物线。 黄曲霉是丝壮真菌啊,用OD值法可行吗,用什么波长呢,回复
黄曲霉是丝壮真菌啊,用OD值法可行吗,用什么波长呢, 用重量法测定菌丝量,如果开始误差很大,建议1多做平行,2加大接种量。尤其是刚开始的几个小时量比较小,测定相对误差很大,实验要更细心一些,菌丝离心或过滤之后要将上面附着的培养基冲洗干净,另外在烘干时也要注意,烘箱顶容易生锈,有时一些小渣滓很容易掉下来如果掉进样品中会引起很大误差,最好用带盒子的容器承载回复这张帖子被引用作为另一个帖子所提问题的解答,我好奇地进来看了一下,觉得这张帖子的问题还是没有解决,虽然帖子是老了一点,但是问题解决了却是好事。
首先讨论测定吸光度的问题。我培养过曲霉属(包括黑曲霉、黄曲霉、米曲霉、塔宾曲霉、棘孢曲霉、黄柄曲霉、亮白曲霉等)、青霉属(包括草酸青霉、嗜松青霉等),枝状枝孢霉种,根霉属,木霉属,还有很多没有鉴定过的真菌,超过一千株,发现除非是污染了细菌,不然真菌在液体培养(180rpm)时菌丝长了之后都会相互纠结成球或块状,所以测定OD值不能反映真菌的生长时期。假如培养液离心之后测定OD值,那么没有菌体存在了;假如不离心,那么取菌体不能反应培养液中菌体的含量,而且如果菌体恰好挡住了光栅投射点,那么就完全吸光,没有任何光透过,引起误差。所以就别想着测定OD值了,细菌可以,真菌不适合。
再来看看测定菌丝干重的问题。首先应该肯定这个方法,因为这个方法已经把菌丝考虑进去了,大方向没有错,但是细节却很需要注意,因为取样量要真实反映菌丝的含量,而且还要保持培养液体系的完整。第一,取样量要真实反映菌丝的含量存在困难,因为真菌是有菌丝的,菌丝一旦长了就容易纠结在一起成块或者球状,需要摇均匀才能取样,但是怎样才算均匀呢?这是不确定因素。第二,保持培养液体系的完整也存在困难,因为取样的过程中需要无菌操作,这个取样品过程是否能保持无菌操作,不让细菌长起来,存在隐患;第二,一瓶培养基取样多次之后还剩下多少毫升?会不会开始的时候是100毫升,七天之后只剩下50毫升?还有,在摇床或者发酵罐中,空气的流动也会带走水分的,会不会开始的时候是100毫升,七天之后取样10次每次5毫升,最后只剩下30毫升?
我有个办法可以避免上面提到的这些问题,那就是将这个真菌制取孢子悬浮液(浓度不在此处讨论),以相同的接种量接种到足够数量的相同体积的液体培养基中,在同一条件下培养,在每个取样时间点取出3瓶培养基用布氏漏斗抽滤,在烘箱中50-60度烘干至恒重,称重。这样做虽然工作量大了些,但排除了多次取样操作带来的细菌污染的隐患,液体体积变化的变数,直接反映了菌丝生长的时期,数据可信。回复首先应该透彻了解生长曲线的意义,为什么去做这个曲线?
微生物学引进生长曲线的概念来描述其生长与时间的关系。这个关系的意义在于使我们能更好把握它不同时期的生长状况。了解了这点不仅可以描述一些数量关系——定量,可以对其定性。(比如长大什么阶段。。。),有了这个关系,可以方便的进行人为干涉微生物生命活动。
有了这些认识,就不必纠结于“传统的”生长曲线做法。
大家提出的办法,可以去尝试。但我觉得有所不妥:
首先,OD值的测量已有解释,在真菌甚至一些链霉菌中均不适用。
其次,13楼工作量不小,而且遇到某些情形也不适宜。比如培养基中有大的颗粒物质或纤维
那么有没有切实可行的方法呢?
这个问题实在是没有意义的问题。为什么要拘泥于生长曲线呢?生长曲线只反映了微生物学及工业发酵最初的认识,即biomass。大家关切这个单位的目的还不是为了调节生命活动吗?只因为这个单位能反映内在的代谢状况而已。
所以问题就转换成了,怎样选择其他“单位”来反映菌体内在代谢过程。
只要你找到了能衡量、定性某一培养体系的其他关系就行。
工业上,常用PMV来衡量菌体生长状况。这就是个好办法。
其实还有很多办法去解决实际问题。pH 是大家最常用的,但往往只是绘制了体系的pH随培养时间的变化曲线而已,不加以利用。
有其他的“单位”吗?当然有,还很多。简单点的比如耗糖,总氮。这些都不陌生。很多人都是为了做个生长曲线而做曲线。
复杂的还可以测NADH之类的,甚至莫一种关键的代谢物及酶的活动情况。
唠叨一句:当年我硕士论文被中国农大的一个教授毙了。原因就是:没有生长曲线!
我做的是真菌啊!而且发酵培养基里有N多东西,什么稻草粉,什么树皮,什么麦麸。。。。
这叫我情何以堪!:D
总之,我个人理解,解决问题有很多办法,没必要去强求或执着地走一条路。做生长曲线如此,做其他的也是如此吧。
欢迎讨论,进步就在讨论中。回复
首先应该透彻了解生长曲线的意义,为什么去做这个曲线?
微生物学引进生长曲线的概念来描述其生长与时间的关系。这个关系的意义在于使我们能更好把握它不同时期的生长状况。了解了这点不仅可以描述一些数量关系 ... 首先,培养基里如果有固体物质不利于微生物降解吸收,花生麸、豆粕、玉米、大米、马铃薯、木薯都要先将其粉碎,用80目筛子过滤取细粉,这样基质的表面积就增大,利于酶对其降解,要不然,大块的基质可能一直到菌丝老死都不能被利用完。当基质被粉碎后,可以很轻松地用滤布过滤除去,不影响真菌生长曲线的测定。你的树皮什么的有没有粉碎后过80目筛子取细粉,有没有用多少层纱布过滤取菌体?或者如果没有粉碎,是不是出于什么不得已的原因?是贴近工业生产要求还是怎么样?硕士学位论文一般不会被枪毙的,我代导师盲审过,我想枪毙那本学位论文导师都不让,最后我费劲脑汁去想在哪里能加分才好不容易凑足60分。你因为没做生长曲线而被枪毙,生长曲线在硕士论文中占那么大的比重?我很好奇是怎样的论文,能否透露一下?如果你签了保密协议,那就在保密期间看不了,就没办法了。那么你现在这个学位问题是怎样解决的,是不是重新做了生长曲线?怎样做的?
PMV的全称为package mycelium volume,即在一定的转速下离心得到菌丝体积百分比,但是真菌在生长对数期时菌丝和菌丝球是相互排斥,不能彻底离心下去的,不能测量其体积,所以也不靠谱。我在做果糖基转移酶的时候需要将培养1天的黑曲霉、棘孢曲霉、黄柄曲霉和塔宾曲霉离心收集菌体,结果就是离心不好。或者说可能我的实验如此,你的实验可能不是这样的,你当初培养的是什么真菌,用这个方法来做得到可信的结果的?
pH值的测定极其不靠谱,因为培养基里成分复杂,而且真菌在生长过程中,培养液里的pH值有可能变化极小,像我做的一株嗜松青霉,七天之内一直在6.0左右,对于这个青霉来说,七天已经差不多over了,pH值不能反映其生长周期。
耗糖,碳源可以是多糖,但是总糖不是全都是由碳源而生,因为氮源也含有碳,糖是羟基酮和醛,能不能确保加进去的氮源也不会产生糖?这个我没有做过,只是提个疑问和你探讨一下。
氮源和NADH我没有做过,如果你方便,关于原理和操作方法,可不可以提供些文献来让大家学习一下?我也想学习。回复
首先应该透彻了解生长曲线的意义,为什么去做这个曲线?
微生物学引进生长曲线的概念来描述其生长与时间的关系。这个关系的意义在于使我们能更好把握它不同时期的生长状况。了解了这点不仅可以描述一些数量关系 ... 不知道会不会涉及你的隐私,如果涉及,那就不讨论了。回复真正的工业化的过程考虑到成本,很多东西不可能去要求做到多少目的。这种情形是我亲身经历的。当然不只是我一个人的经历,国外的工业化过程也是如此。我未亲自去国外的工厂看,但他们来交流,也是存在和实验室过程很大的不同。
医药工业上生产一种脂肪酶抑制剂,发酵液很粘稠,根本不能去分离菌体与其他发酵组分的,只能用糖、pH来控制生长状况。
再比如一种免疫抑制剂的生产,也从不需要去考察这种菌的生长曲线,直接pmv,同时记录溶氧来进行发酵控制。
很多,我接触了大概六七个工业化项目,只有E.coli检测生长曲线。
工业上所做的一切都是为了操作可行。就拿PMV来说,不是说这个单位可以替代什么,至少我们不需要落入“生长曲线”测定上。因为只要找到一个能进行人为干预调节菌体代谢的,目的就行了。生长曲线最根本的价值只在于,也只能在于我们利用这个指标,进行人为控制菌体代谢。否则就是去了它存在的意义。我们能找到其他的方法时就没必要去费力的去获得这条曲线。
当年做的硕士论文是农业副产物利用,教育厅的课题。考虑实际的成本,不可能要求底物做到多少物的。
事实上,工业上的很多补料过程不是看什么“生长曲线”而是看其他指标,很多用pH结合总糖等指标进行。回复当时我写了申诉材料,三个盲审,就只有这个给了个“补实验,再答辩”当时来不及了,导师也支持我,但答辩主席不同意!
PS:答辩的人中,我一届同门分最低,下一届的师弟也是如此!回复你说的这些我全都赞同,你说的补料确实是为了追求更高的产量,产量和生物量也是不一定对应的,当产量上升的时候,生物量不一定上升。我认为在工厂里做补料测产量而看轻生长曲线有以下原因:
1、工厂追求产量。产量就是产值,怎样做得好就怎样做,不用追求数据的完整性,对他们来说,生物量只是一项可有可无的数据,工厂要的是钱,所以采用最直接的方法。比如说什么pH值下发酵效果最好,他们可以把麦麸豆柏一股脑儿加下去,用硫酸调节pH值,发酵的时候测定产量就行,不用关心微生物长势如何的,太酸或碱了不长,不要紧,测产量就行,不用管微生物的生活质量。
2、工厂的实验室没有发表文章的压力,也不想把自己的生产经验给竞争对手分享,所以不会注意收集很多数据,使得实验完整,包括生长曲线这一项,更不会讨论生长曲线和产量的关系。当然,工厂要发表文章也是可以,但是会谨慎得多。
3、工厂的实验室可能没有做更高深实验所需的器材和药品。例如一个酒精厂,最贵的就是一台九十年代产的HPLC,测定一下有没有甘油之类的,其它的不用买。要说测定糖化用的根霉的长势如何,那肯定是测定不了的。
4、工厂这样做是经过摸索的,什么时候控制什么能得到什么结果,他们已经做过很多这种优化实验了,也许他们在摸索的时候测过生长曲线,但在生产的时候是采用成熟的路线来做的,所以也就不用再测了。也许在再摸索的时候会测定一下吧,到那时候可能就知道他们是怎样测定的了。
实验室的结果要经过小试、中试、工厂试验,规模逐渐加大,加上在扩大化的过程中会发现很多新问题,所以投入的人力物力是很大的,时间也很久,说十年都有可能。用来做试验,希望得到能创收的生物材料也会从最初的100种,到最后确定下来的一种,可能是百里挑一。我们的酵母曾经给中粮试过,但数据比不上我们在实验室做的好,到了工厂之后就比不上安琪酵母了,我们也正在进行选育,争取对安琪酵母有更大的优势。中粮试过的酵母不止是安琪酵母,也有全国各地的公司和实验室的酵母品种,所以这个战况也是惨烈的。
仔细看了你的两个回帖,觉得你并没有说明应该采用什么方法来测定生长曲线,更像是说生长曲线该不该测定。你想表达的意思似乎是“生长曲线不一定有必要测定,而应该更注重于某些目标产物的产量,以求更可能得到实际利益。为了得到更高的产量,可以考虑优化发酵条件,包括中间补料和控制pH值等”,是吗?我觉得这应该是学生和导师交流之后,最终由导师来作决定的,我没有想到楼主是不是应该问一下导师“是不是非要测定生长曲线不可”这个问题。回复
当时我写了申诉材料,三个盲审,就只有这个给了个“补实验,再答辩”当时来不及了,导师也支持我,但答辩主席不同意!
PS:答辩的人中,我一届同门分最低,下一届的师弟也是如此! 省科技厅的项目,假如是偏向于工业化的话,又是利用农副产品,那么评审要求可以适当宽一些,可以适当参考实际生产的情况。那个评委给评语也比较绝,可能是不怎么注意生产,或者本身就半桶水不懂装懂,懂一半剩下一半就瞎猜。就我的看法,生长曲线不是所有硕士学位论文都要测定的,要看这项数据对于实验的目的能不能产生参考价值。
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电话:021-为什么要用OD600来测细菌/真菌浓度? - 实验交流 - 生物秀
标题: 为什么要用OD600来测细菌/真菌浓度?
摘要: [为什么要用OD600来测细菌 真菌浓度?] 为什么要用OD600来测细菌 真菌浓度?而不在其他的吸光值下测量呢?有没有什么依据呢? 关键词:[细菌 真菌 分光光度计 密度 光密度 微生物 培养液]……
为什么要用OD600来测细菌/真菌浓度?而不在其他的吸光值下测量呢?有没有什么依据呢?回复有依据的,600nm是大部分近似球形的细菌最大的吸收波长。如果是丝状真菌是不可以用OD表征的。酵母菌可以看成近似的球形。波长的选择时根据最大吸收波长确定的。回复600NM 对浊度的反应比较敏感,而不是峰的最高吸收波长。也不能用最高的吸收波长来测浊度的,因为这也可能是溶液的吸收高峰,不一定是菌的。。。个人理解。。。。。回复OD600称为浊度,在600nm下,形状规则的(近似球球形)微菌浓(干重)和吸光度有线性关系,比如细菌、酵母等。
若是形状不规则的如某些霉菌、放线菌,干重不能代表细胞数量,那么OD600和菌浓(细胞浓度)也就没有正比关系了。
当然,OD600不单代表菌浓,如培养基中有混浊物质,那OD600就不适用了回复实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。2、OD值的名词解释与测量方法的实现&#6 OD值名词定义:OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,是检测方法里的专有名词,检测单位用OD值表示,1OD=1og10(1/trans),其中trans为检测物的透光率T值。光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。从上面的定义可以看出,OD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。通过吸光值的定义可以知道,吸光值正比于溶液中的吸光物质的浓度,相应地与样品的透过率T值成反比,在数值上来说,它们之间是对数关系。回复作为这方面新手 表示长见识了!谢谢!:victory:回复要交流要交流~:jok:回复每个菌种对应的OD值不太一样,可以作为参考。
如果要相对精确一些,自己用目标菌做个标准曲线,在曲线范围内测量,这样更准确一些。回复
每个菌种对应的OD值不太一样,可以作为参考。
如果要相对精确一些,自己用目标菌做个标准曲线,在曲线范围内测量,这样更准确一些。 在哪个波段的话,那是根据不同的菌的在不同的波长是有最大吸收峰值 的吧~回复如果你是看文献中的最大吸收波长数据的话,我建议你还是先用测出这种菌的最大吸收波长是多少,然后在进行测定OD值,这样能得到尽量精确的数值。仅供LZ参考。:cool:回复
在哪个波段的话,那是根据不同的菌的在不同的波长是有最大吸收峰值 的吧~ 最常用的是用大肠杆菌(Escherichia coli)作为参考的。
10E10的OD600是1,我记得好像是这个样子的。回复
如果你是看文献中的最大吸收波长数据的话,我建议你还是先用测出这种菌的最大吸收波长是多少,然后在进行测定OD值,这样能得到尽量精确的数值。仅供LZ参考。:cool: 那这个这种菌的吸收的最大吸收波长是不是在一定的波长范围内都测其吸光值,然后找出其最大的吸收值的地方呢?回复剛好書報討論要用到~
講解得很清楚^^
學到了~謝謝
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