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[供应]免疫组化edta抗原修复液
供应商：上海田源生物技术有限公司
价格：面议
数量：大量
规格：50ml
姓名：杨先生
有效期至：
信息发布： 11:22，审核通过：
11:33，审核人员工号：G0682， 已被浏览3次
产品主要特点：
免疫组化edta抗原修复液描述：抗原修复液edta；特性：适合用于冰冻切片的快速抗原修复，只需室温孵育5分钟即可完成对冰冻切片样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
免疫组化edta抗原修复液基本信息：
*编号：6723074
*产品名称：免疫组化edta抗原修复液
*规格：50ml
*分类：免疫组化试剂
*应用科室：免疫组化
*使用领域：免疫组化学
免疫组化edta抗原修复液货物清单
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关键词：免疫组化edta抗原修复液，抗原修复液
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增值电信业务经营许可证 浙B2-( ）半年前做的蜡块现在还能用吗(抗原,免疫组化) - 免疫实验 - 生物秀
标题: ( ）半年前做的蜡块现在还能用吗(抗原,免疫组化)
摘要: [( ）半年前做的蜡块现在还能用吗(抗原,免疫组化)] 技术员说切面可能已经风干了，这样里面的组织抗原会损伤吗？做免疫组化还行吗？ 关键词:[抗原 免疫组化]……
技术员说切面可能已经风干了，这样里面的组织抗原会损伤吗？做免疫组化还行吗？
只要制作蜡块过程规范，即固定、脱水、透明、浸蜡包埋过程规范，蜡块可以长期保存，一年应该问题不大。但切记每次切完后，一定要用蜡重新封上，否则抗原性的保存就难说了。祝你好运！回复可能你的蜡块没做好。只能试试还能用否。回复个人认为还是可以用得。如果不好切可以取出组织从新包埋了。回复应该能用，做免疫组织化学没有问题，一般1－2年之内都可以。回复技术员说切面可能已经风干了，这样里面的组织抗原会损伤吗？做免疫组化还行吗？做免疫组化的时候，切记要同时加做阳性对照和阴性对照，这样可以检测出是否组织的抗原保持完好。一般来说，蜡块半年不会有问题的，切片的时候技术员会先修蜡块，这时切片刀的进刀幅度会很大，会切掉他所谓“风干”的组织部分。我们这里保存几年的蜡块都可以作免疫组化的。GOOD LUCK!回复应该没问题，我在的病理科做患者组织标本的免疫组化，2~3年前的蜡块都没事，只要当时制作程序规范就好，如果是经过自动脱水机处理的组织肯定跟没问题。但楼上说的很对，一定要做阴、阳性对照，这样判断结果和摸索条件都有标准。祝你好运！回复石蜡切片的好处就是蜡块的保存性很好，保存好的话，十几年都没问题的。
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电话：021-免疫组化的介绍
来源:北京索莱宝科技有限公司
浏览人数: 4614
&免疫组化的介绍
免疫组化---概念
免疫组织化学
& 免疫组化是利用抗原与抗体特异性
结合的原理，通过化学反应使标记抗体
的显色剂 (荧光素、酶、金属离子
、同位素) 显色来确定组织细胞内抗
原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、
定性及定量的研究，称为免疫组织化
免疫组化---分类
根据标记物不同分为：
免疫荧光法
&&&&&&利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。
免疫酶标法
&&&&&&基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。
免疫胶体金法
&&&&&&&用胶体金标记抗体作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。
免疫铁蛋白法
&&&&&&&以铁蛋白标记抗体，铁蛋白含有2000D3000个铁原子的致密铁离子核心，形成四个圆形致密区，所以，具有较高的电子密度，易于电镜观察。
***免疫自显影法
&&&&&同位素标记
&免疫组化---染色方法
即直接法：
&&&&&标记物（荧光素和酶等）直接标记特异性抗体
（一抗），标记抗体和抗原结合
&&&&&标记物（荧光素和酶等）标记在二抗上，通过一
抗与抗原结合
抗体桥法：
&&&&&标记三抗，二抗为未标记桥抗体
&PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶）&
一抗 + 二抗 + PAP复合物（HRP + 抗HRP抗体[与
一抗统一种属]）+ HRP底物显色&
&SP法（Streptavidin-Peroxidase Methed&链霉亲和素-过氧化物酶法）
&&& 一抗 + 生物素标记二抗 + HRP标记链霉亲和
素 + HRP底物显色
&ABC法（Avidin-Biotin-peroxidase Complex Method&亲和素-生物素-过氧化物酶复合物）
&& 一抗 + 生物素标记二抗 + ABC复合物（亲和素
- HRP标记生物素）+ HRP底物显色
链霉亲和素生物素过氧化
一抗 + 生物素标记二抗 + SABC复合物（链霉亲和素+ HRP
标记生物素）+ HRP底物显色
免疫组化中常用的组织和细胞标
&&& -石蜡切片
&&& -冰冻切片
&& -组织印片
&& -细胞培养片(细胞爬片)
&& -细胞涂片
免疫组化实验流程---石蜡切片、间
&*标本新鲜：一般在2h以内进行，超过2h，
组织将有不同程度的自溶，其抗原或变性消
失，或严重弥散。
&*取材部位：除取病灶或含待检抗原部位
外，还应取病灶与正常交界处，即所取组织
切片中同时应有抗原阳性和阴性区，以形成
自身对照。
&-细胞坏死后，不仅抗原弥散或消失，而且
常引起非特异着色，干扰观察，因此取材时
应尽可能避开坏死区。
&O定义：应用各种方法使组织样本尽量保持其离体前
状态的过程称为固定（fixation）
&O固定的作用：从组织学的角度其简单的定义是，保
持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技
术的角度，固定的作用：是使细胞内蛋白质凝
固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；
防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以
保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织
或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且
不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色
时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断
&O组织固定越新鲜越好。组织一经离体，就能及时地
固定，这是最好的。
对不同类型的组织应适当合理地选择固定液。固定剂的种
类繁多，成份复杂，对组织的作用不尽相同。在科研实验
中，对于组织的固定，应有针对性的选择，方能获得满意
&&& 较好的固定液应具有强渗透力，能迅速渗入至组织内
部；其次不会使组织发生过度收缩变形，并能使组织内易
观察的成分得以凝固为不溶性物质；还要使组织达到一定
硬度，有较好的折光率。固定液分为简单固定液和混合固
简单固定液
&& 1.&甲醛（formaldehyde）
&&& 是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有
强烈刺激气味，常用得是37％～40％的甲醛溶液，商品名
为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福
尔马林，实际含甲醛4％。
&&& 10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定
剂。经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，
称福尔马林色素，影响染色效果。
％中性甲醛固定液：常用的固定液，能满足常规HE及
免疫组化工作。中性甲醛是以&pH 7.2～7.4的***酸缓冲液
为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优
于一般的4％甲醛固定液。
乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬
化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单
％多聚甲醛
多聚甲醛易溶于碱性条件
使用PBS配置，可用NaOH 调节PH促溶
&&&& 多聚甲醛不稳定，存在解聚的 过程，4度 一两周之
内使用完比较好， -20度 一年内不受影响 ，建议现配现
&&&& 多聚甲醛易溶于脂类物质，因此能穿过细胞膜进入细
胞内。用多聚甲醛固定细胞时，能使细胞内的自由氨基基
团发生化学交联。当不同的分子发生交联时，形成一网状
结构，把细胞的各个结构成分连接起来。
免疫组化常用多聚甲醛和中性缓冲甲醛作为固定液；
混合固定液
&简单固定液只是对细胞的某些成分固定较好，而不
能将所有成分都保存下来。相互配合使用能取长补
短，得到比较好的固定效果。
&乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：该固
定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入
95％乙醇脱水。
&B5(醋酸钠一升*一甲醛)固定液：多用于固定淋巴
组织。染色前应进行脱*沉淀处理。
&Bouin固定液：对组织固定较均匀，收缩很少，不
会使组织变硬变脆。需现配现用。
&Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞
质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦
适用于糖原及尼氏小体的固定。
&总之固定液的种类很多，需要根据实验目的来选择
合适的固定液。
&为保证石蜡有可能进入组织内部，采用适当方法，
将已固定和水洗过的组织中的水分彻底驱除的过程
称为脱水（dehydration）。脱水剂必须是与水
在任何比例均能混合的液体。最常用的脱水剂为乙
醇，其它尚有正丁醇和二氧已环以及丙***等。
&脱水用的乙醇浓度一般从70％~75％开始，然后依
次80％&95％&100％，即
由低浓度逐步到高浓度。脱水的时间与组织大小、
厚薄有关系、组织厚&大，脱水时间要长些；而小
薄的组织脱水时间相对的可以短些。
&脱水不完全，将可引起一系列的问题，比如浸蜡不
彻底，切片不好完成，切不完整。由于先天不足，
导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败；脱
水长了也会使组织切片时易脆。
&组织脱水后，要经过一个浸蜡前的中间溶剂透明过
程；才能进行浸蜡。透明的目的：组织经脱水后、
浸蜡前必须经过某些既能与脱水剂相混合又能溶
解石蜡的中间溶剂处理。组织在中间溶剂时，组
织间隙内存留的脱水剂完全为中间溶剂所取代时，
此时即可进行浸蜡。由于常用的透明剂（如二甲
***）作用之后，其折射指数与组织蛋白折射指数
接近，组织显示出半透明状态，因此，通常又称此
过程 为透明（clearing）。
&组织经无水乙醇脱水后转入二甲***透明，组织的
大小、厚薄不同，透明时间也不同。透明时间短
了，透明不完全，导致切不了片，透明时间长了，
透明过度，使组织收缩、变脆，导致切片易粉易
浸蜡与包埋
&组织浸蜡：&　
&组织经媒介（透明）处理后，置入熔化的石蜡内浸渍，使
石蜡分子浸透入组织中的过程称浸蜡或石蜡渗透
（infiltrating）。渗透的过程也可用火棉胶代替石蜡，
称为浸胶。但其透明过程应作相应更动
&用于浸蜡的石蜡最好是熔点稍低（56～58℃），低温浸蜡
对保存组织细胞内的抗原免疫活性，避免组织收缩和变硬
变脆有帮助。
&蜡渗透到组织中起支撑作用，切片时才能把完整的组织和
蜡一起完整切下来。不同大小和厚薄的组织浸蜡时间有所
不同，一般为1～3小时。浸蜡时间过短，蜡没有完全渗入
组织中，组织过软，切片困难；浸蜡温度过高，浸蜡时间
过长，均可导致组织收缩，变硬变脆，难以切出理想切
&组织包埋：　
&把浸蜡的组织包在蜡里成块，使之有一定的硬度和韧度，
便于在切片机上夹持切片，称之为包埋（embedding）。
&包埋时，包埋石蜡的温度要比透蜡石蜡高（约3~5℃），包
埋时，动作更要迅速，否则容易导致组织与石蜡融合不
好，影响切片。
&将包埋组织的蜡块固定在切片机上，修块，切片
，热水漂片（把切片放入50℃水中,摊平后用载玻
片捞 起）蜡片厚度一般在3~5&m。
&切片必须完整、均匀、平展、无皱褶
&应用于免疫组织化学染色的切片，对切片的质量要
求较高，切片必须完整，平展、无汽泡，无邹折
，这样有利在染色时的冲洗，有利于切片的牢固附
贴。如果切片不平展，免疫组化染色后，可出现染
色不均匀的现象，颜色深浅不一。如果切片有汽泡
切片在烘烤时，由于汽泡的破裂影响了汽泡周围的
组织，在其周围可观察到深浅不一的染色。如果切
片有邹折，免疫组化染色后，在邹折的地方有深浅
不一的颜色，这是一种假阳性，容易引起混淆。
染色前处理
&灭活内源性酶及封闭内源性生物素
脱蜡和水化
&蜡不溶于水，不与抗体相融合。脱蜡目的是为了使抗体等试剂能
够充分与组织中抗原等结合反应。
&它只能靠特用的试剂，处理足够的时间，才能将其除去。如果脱
蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起许多弊病，如染色不
均匀，阳性物时隐时现，真假难辨，背景染色增加等。为了解决
上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡。
&目前用于脱蜡的试剂主要是二甲***，因它脱蜡力强，脱蜡时间
&脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜度来决定。原则上是
要彻底，干净，完全地脱去切片上的蜡。为了做到这一步，切片
在脱蜡前的加温将有助于完成上述的要求。
&脱蜡可以先 60 度加温10-20 min ，然后再行脱蜡，这样脱蜡速
度加快，效果更好，但当天制好的切片一般先 60度2-3h。然后
立即二甲***处理。
&水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全，易出现局灶
性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色
灭活内源性酶及封闭内源性生物素
在生物体组织内均含有一定量的内源性酶和内源
性生物素，如富含血细胞的组织标本有大量具有
活性的过氧化物酶，肝、脾、肾、脑及胚胎组织中
富含生物素。如采用过氧化物酶检测系统或碱性
***酸酶显色系统进行免疫组织化学染色时．酶的
作用是催化底物，使显色剂显色，而组织中的内源
性酶同样也能催化底物，使其显色，这就影响免疫
组织化学染色的特异性。在使用亲和素试剂的免
疫组织化学染色中，内源性生物素易结合亲和素，
形成亲和素一生物素复合物，导致假阳性。所以
在染色之前应设法将组织内的内源性酶灭活或将内
源性生物素封闭，以保证染色的特异性。
&&&&& 在抑制内源性过氧化物酶时，也要注意对抗
原的保护，因此抑制也只是部分的，在显色后，会
显示出弱的本底颜色，但足以与真正阳性显色区
(1)灭活内源性过氧化物酶：常用的是0.3%
的H2O2，也可将其称为1%H2O2，因为市售的H2O2
的浓度为30%，按其净含量则为0.3%，如果按其溶
液的用量则为1%。有的使用是单纯的H2O2稀释溶
液，有的使用是H2O2甲醇混合物。甲醇对各种酶
，都有钝化的作用，因此H2O2甲醇的双重作用效果
&&(2)灭活碱性***酸酶：最常用的方法是将左旋
咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH为
7.6～8.2，可除去大部分内源性碱性***酸酶，对
于仍能干扰染色的酸性***酸酶可用0．05mol/L酒
石酸抑制。
&(3)封闭内源性生物素：将组织切片用0.0l％亲
和素溶液室温处理10～20分钟，使其结合位点饱
和，以消除内源性生物素的活性。
&抗原修复用于甲醛固定的石蜡包埋组织切片。石蜡
切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛
键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白
之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在
进行免疫组化染色时，需要先进行抗原修复或暴
露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢
复抗原的原有空间形态。
&抗原修***法可分为化学方法和物理方法.化学方法
是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓
度与消化时间要适度.常用的物理方法有单纯加
热、微波处理和高压加热.在选用这三种加热法时
,浸泡切片的修复液的离子强度和PH值、加热的温
度和时间均影响着抗原修复效果.
&常用的修***法从强到弱：高压修复、微波修复、
胰酶修复。
&抗原修复原理：水解、变性蛋白；酶解消化
&水解作用：高热、高压、微波辐射使得处于抗原修
复液中的蛋白质抗原醛键、抗原与其他分子间的交
联键，或由蛋白质一级结构折叠成的三维结构因水
解而断裂，暴露被掩盖的抗原决定簇；其次高热、
高压、微波辐射可增加各分子间的直接碰撞的机
会，使各物质分子作极性运动，促进形成的醛键断
&通过生物酶解处理方法，破坏蛋白质、醛类分子交
联，暴露和修复抗原。
一、热修复法
（1）水浴加热法&将脱蜡人水后的切片放人盛有修复液
的容器中,放人加热煮沸水中,当修复液温度达到95℃左右
时计时l5min,自然冷却,PBS洗3min&3次.
（2）微波加热法&将切片放入修复液中微波加热使温度在
96℃左右,计时l0min,在微波炉中停留2min,室温自然冷
却,PBS洗3min&3次.
（3）高压加热法&将修复液在高压锅中煮沸,切片插在染色
架上,放入锅中（要使修复液淹没切片）开始喷气时盖上压
力阀.计时2min,冷水冲至室温取出切片,PBS洗3min&3
次.本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
二、酶消化方法
（1）&0.1%胰蛋白酶&主要用于细胞内抗原的修复.
37℃作用5~30分钟
&&&&（2）&0.4%胃蛋白酶&主要用于细胞间质或基底膜抗原
的修复. 37℃作用30min.
&&&& 也有用蛋白酶K孵育15-30分钟的。
三、综合方法
微波炉加胰酶修复法：
&&&& 蛋白酶K消化结合微波炉加热法：
&抗原修复缓冲液有多种，如PBS、重金属盐溶液、
柠檬酸盐缓冲液、Tris、&EDTA等，以0.01M枸橼酸
盐缓冲液（pH6.0& CB）最常用。溶液的浓度对修
复效果无任何影响，而PH值则影响较大。
&目前首选0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0），优点
是染色背景清晰，适合于大多数抗体.
0.05mol/L Tris-HCl(pH 1-12系列)和0.05mol/L
EDTA(pH8.0)缓冲液两种修复液对部分抗原修复效
果较强，但其染色背景同时加深，如使用不当易造
成假阳性。
&没有一种抗原修复液能适合于所有的抗体，柠檬酸
缓冲液可作为免疫组织常规使用的抗原修复缓冲
液，但也不能除外某些抗体适用于EDTA和Tris缓冲
修复液。一般抗原比较难于表达的抗体多选择Tris
和EDTA缓冲修复液。
X1020 0.1%胰蛋白酶液消化液 10ml 120
C1010 柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L， pH6.0，干粉 1L/2L 8/12.
&须适当合理地使用封闭试剂
&为了减少背景产生的非特异性染色，在免疫组化染色的过
程中，在加入一抗孵育前，常常加入BSA或非免疫动物血
清，以减少背景的染色。
&抗体是高度的电荷分子，可能与带有相应电荷的组织成分
无特异性地结合（如胶原）。由于这种非特异性结合，将
导致标记的部分局部化和胶原的假阳性染色。要用一种不
相干的抗体居先处理，能减少和标记的抗体无特异性结合。
封闭用血清如：小牛血清，马血清，山羊血清，绵羊血
清，兔血清
&用5-10%正常动物血清封闭（1:10-1:20倍PBS稀释），室温
孵育5-10分钟。清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一
抗或一抗工作液，37℃或室温孵育1-2小时或4℃过夜。
SL1-10 封闭用马血清（原液） solarbio 10ml
SL2-10 封闭山羊血清正常（原液） solarbio 10ml
SL3-10 封闭兔血清正常（原液） solarbio 10ml
SL4-10 正常人血清 solarbio 5ml
SL5-10 封闭绵羊血清正常（原液） solarbio 10ml
SL6-10 封闭用 鸡血清（源液） solarbio 10ml
SL7-10 封闭用驴血清（源液） solarbio 10ML
封闭用驴血清（冻干粉） jackson原装 10ml
&细胞通透：目的是使抗体能够充分地进入胞内进行
结合反应。一般用&Triton X-100 、蛋白酶k 等通
透液。如 Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核
膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物
质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推
荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结
&在免疫组织化学（&10um厚切片）& 和免疫细胞化
学中一般用 Triton X-100&作为细胞通透剂，在膜
上打孔。同时也是一种去污剂，一般在 PBS 中加
入后终浓度是 0.05% 即可，石蜡切片 4um 左右可
以不通透，因为细胞已经被切开了。
&T8200& Triton X-100&曲拉通X-100&非离子表面活性剂
&一抗、二抗结合
&脱水、透明、封片
一抗、二抗结合
&一抗和二抗浓度和孵育时间：一抗孵育条件在免疫
组化反应中最重要，包括孵育时间、温度和抗体浓
&一抗孵育温度有几种：4 度、室温、37度，其中 4
度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有
关，一般 室温或37度1-2h，而4 度一般孵育过
夜。具体条件还要摸索。
&二抗孵育条件：二抗一般室温或37度30min-1h，具
体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩
液还要摸索浓度。
&在免疫组化中一般先把二抗浓度和孵育时间先定
下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。建议一抗反
应在 4 度最佳，反应温和，但时间最好超过
以DAB 显色为例：
&背景的深浅和特异性染色的深浅均可以由 DAB 孵
育条件决定。DAB 显色时间不是固定的，主要由显
微镜下控制显色时间，到出现特异性染色较强而
本底着色较浅时即可冲洗；
&抗体浓度过高或抗体孵育时间过长， DAB 显色时
间很短就出现很深的棕褐色，需要下调抗体浓度或
缩短你的抗体孵育时间；若很短时间就出现背景
很深，可能前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延
长封闭时间；DAB 显色时间很长才出现阳性染色
，一方面是抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一
抗4&度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。
&免疫组化染色后必须进行衬染，以衬托出组织细胞的形态结构，
使形态与机能密切相关，从而更好地对目标蛋白进行定位，以利
于结果分析。常用的免疫组化衬染剂有苏木素、甲基绿、核固红
等。免疫酶组化（HRP）一般用前两种，石蜡切片常用苏木素，
冰冻切片用甲基绿较好。
&苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位
等情况，一般数秒- 数分钟，胞浆蛋白可以适当时间长一点，而
胞核蛋白则要短。
&不过这个如果染色不理想可以补救的。方法是：染色深则分化时
间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。盐酸酒精是
分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置
于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨
水中返兰即可。
分化：能使切片上需要显示的结构清晰，而使不需要显示的结构脱去颜色。主
要是将过染的颜色及不该染的染色去除掉，这一步要掌握得当，必须靠经验，
核的染色清楚与否靠分化这一招，分化过度，核染色淡，分化不足，核染色质
一团，分不清。 &
G1080 Mayer苏木素染液(免疫组化) 10ml/100ml/500ml 60/320/1400&
免疫组化的染色过程，除了前面的处理和加入的抗体外，
都在PBS的冲冲洗洗中度过，PBS冲洗的正确与否，也是导
致最后结果的关键。
①单独冲洗，防止交叉反应造成污染。
②温柔冲洗，防止切片的脱落。
③冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。
④PBS 的PH和离子强度的使用和要求。中性及弱碱性条件
（PH7－8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利
于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子
强度则有利于分解。免疫组化常用的PBS的PH在7.2-7.4浓
度是0.01M，PBST:&Tween吐温是一种离子表面活性剂，它
可加速抗体非特异性结合的分离。 Tween-20&&0.5%（V/V&
体积浓度）
脱水、透明、封片
&如果组织片中有水分，则光不宜通透，在显微镜下
观察不清组织的结构，所以必须经过脱水。透明剂
能增强组织的折光系数。这样，才能在显微镜下
观察。 在70%、80%、90%和100%的酒精中脱水。
在二甲***中透明。
&封片： 从二甲***中取出载玻片，未等二甲***挥
发，在组织切片上滴加适量封片剂，上面再加盖玻
片（倾斜放下）封固。
&&& 封片目的：（1）便于保存；（2）应用合适折
光率的封片剂使组织结构能在镜下很清晰地显示出
&G8590 中性树胶 国产
S2100 抗荧光衰减封片剂 5ml/25ml/100ml/500ml
&中性树胶应用于组织切片的的封固与保存。
&将盖玻片与载玻片粘合在一起，能有效避免组织直接与空气接触后的氧化。
&中性树胶为一种天然树脂，溶解于二甲苯中，不溶于水。干燥后凝结成透明无色固体，无收缩、不会出现变黄、纹裂等现象。其折光率及色散作用近似于玻璃，可获得清晰的镜检效果。
符合物镜粘合剂的特点：1.透明度高，几乎和光学玻璃一样清晰。&& 2.不腐蚀玻璃，因为它是中性的，而玻璃对碱性敏感，3.不容易长霉，可能是因为中性树胶的溶剂二甲苯有杀霉菌作用。
&抗荧光衰减封片剂以高纯度甘油为介质，内含抗荧光淬灭剂，有强烈的抗荧光衰减作用，用于对荧光组织和细胞样品的封片。样品封片后4&C或－20&C避光保存2-3周，可最大限度延长荧光持续时间和维持荧光发光强度，同时封片剂中的其它成分有助于保持组织抗原抗体处于结合状态。适用于所有光谱范围的荧光。
冷冻切片的方法是一种最省时最快速的制片方法。其原理
很简单：冷冻使组织变硬，以代替石蜡做浸蜡。组织中的
水分起着浸 蜡的作用，可用OCT做冷冻包埋剂，置入恒冷
箱切片机冰冻切片 ，不需要经过脱蜡，可随时染色，节省
时间。另外，在冷冻切片的过程中，组织未接触到任何有
机溶剂或其他试剂能溶解或破坏组织中的脂肪、酶以及抗
&石蜡切片是先甲醛固定再制片；冰冻切片是先制片后丙酮
固定。 染色步骤基本一致。
&取材、速冻包埋、切片（4℃丙酮固定 ）、抗原修复(可
选)、内源性酶或生物素灭活、封闭、抗体孵育、显色复
染、封片观察
&冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱
中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内
各种物质都在没有任何变化的情况下被固定
起来，核染色质清晰，核仁明显，其他物质
都完好保存。
&石蜡切片：组织形态保存好&&
冰冻切片：抗原性保存好
&1、一抗的选择：有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
&2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
&3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
&4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡水化、抗原修复等过程，比较繁琐。
&5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，立即固定染色，抗原保存好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。&
厚度0.8mm-1.2mm。
单头双面磨砂磨砂边
显微镜载玻片，抛光边，单头双面磨砂磨砂边&角，夹纸为拷贝纸单层玻璃纸包装，片盒
&必须对新的载玻片进行处理，新的载玻片表面看起来很干
净，但是新出厂的载玻片，表面复盖着开一层油脂样的物
质，如果不加以处理，对切片的附贴是极为不利的。 一般
使用清洗剂清洗后放入酒精中浸泡，再做粘附剂处理。
玻片的处理：玻片一定要洗干净，并涂以多聚赖氨酸，烘
多聚赖氨酸防脱载玻片
&&&& 多聚赖氨酸载玻片是广泛应用的载玻片，组织切片与
玻片黏合，通过多聚赖氨酸（P-L-L）多聚阳离子分子与组
织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。适用组
织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交
等，以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，
增加细胞贴壁能力。
&一般常见的分子量有3-7，7-15，15～30万和&30万，分子
量越大，黏附力越强，但相对完全溶解较困难。 P8130
&&&&& 常用的多聚赖氨酸包被可以用水或者PBS配置，工作
浓度一般为用0.1 mg/ml
P2100&& 10&多聚赖氨酸& 10ml&
浓度为1mg/ml 使用去离子水或高纯水稀释10倍使用
免疫组织化学染色中常见脱片原因
& 1．组织固定、脱水、透明不充分。
& 2．组织切片过厚。
& 3．组织切片有折叠
& 4．过度的热抗原修复(高压、微波、水煮)
处理或抗原修复液的pH偏高。
& 5．操作过程中，冲洗方法不正确等。
防脱载玻片
它是通过对玻璃表面起化学修饰作用，改变其表面
的化学物理特性，使组织切片或细胞牢固的贴于玻
璃片上，防止抗原修复过程中由于高温、高压的诸
多因素所造成的脱片现象
1.能吸附不易固定的组织切片
2.完全节省玻片预处理的时间
3.能较好吸附细胞和组织
4.防止原位长时间的原位杂交技术中的组织脱失
5.能防止免疫细胞化学技术中的组织脱失，同时还
能避免背景着色
&切片盒：盒内为塑料托架,每一托架有50对
或100对沟槽并以数字相配,保证切片易于取
&湿盒：塑料盒子，里面的隔断可以放置载玻
片，冲洗片子可以使用，四度过夜时将里面
加入水，隔断上放入片子，可以防止片子干
掉造成假阳性。
更多产品信息请联系业务：010- 张净花
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