求助用宁波超声波细胞破碎仪破碎细胞

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-17 16:31 标签： 超声破碎细胞提取蛋白
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摘要 : 一、原理：微生物细胞在超声波的作用下，细胞结构受到破坏，而使细胞破碎。 二、材料与试剂：超声波破碎仪、显微镜、烧杯、细胞破碎缓冲液(10mmol/L，PH7.4Tris-HCL缓冲液中含5mmol/L的MgCL2)、细胞悬浮液(取50-100mg)大肠杆菌湿细胞悬浮在1ml细胞破碎缓冲液中)、培养基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%，NaCL0.5%制成肉汤液体培养基。取上述肉汤培养基加进2%琼脂，制成固体培养基，用作菌种活化
一、原理：微在超声波的作用下，受到破坏，而使细胞破碎。
二、材料与试剂：超声波破碎仪、显微镜、烧杯、细胞破碎缓冲液(10mmol/L，PH7.4Tris-HCL缓冲液中含5mmol/L的MgCL2)、细胞悬浮液(取50-100mg)湿细胞悬浮在1ml细胞破碎缓冲液中)、培养基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%，NaCL0.5%制成肉汤液体培养基。取上述肉汤培养基加进2%琼脂，制成固体培养基，用作菌种活化与保藏)。
三、操作方法
1、和收集：将活化菌种接入肉汤培养基中，于37℃振荡培养。当到达对数生长期后(约6h)，用离心机收集细胞，8000r/min离心5min，或3000r/min离心20min。
2、在下观察细菌的形态特征。
3、细胞破碎：取湿细胞50-100mg悬浮于1ml细胞破碎中。用20kHz频率，150W的功率，在冰浴中进行超声波破碎，每破碎60s，间隔60s，反复破碎三次。
4、在显微镜下观察破碎后的。
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细胞破碎－超声波和超高压的比较(正文)
细胞破碎－超声波和超高压的比较
    　　破碎细胞，进而提取出高纯度、高活性的蛋白质或多肽，是每个科研工作者和从事生物技术工作的人的共同心声。 超声波破碎法在细胞破碎中应用最普及，它的原理是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。超声破碎操作简便，但是破碎成本高，易引起温度的剧烈上升。在中~大规模操作时，产生的化学自由基能使某些敏感性活性物质失活。对不同菌种的发酵液，超声破碎的效果差别较大。一般地，杆菌比球菌较易破碎，革兰氏阴性细菌细胞比革兰氏阳性细菌细胞较易破碎，对酵母菌的破碎效果较差。随着科研的深入、生产的发展，人们对具有高活性的蛋白质或多肽的需求量越来越大。超声波破碎已不能满足人们的需求。 (超声波空化现象原理图） 高压细胞破碎原理与超声波破碎原理不同，在高压作用下，样品从高压室高速喷出，速度可达每秒几百米。这种高速喷出的浆液又射到静止的撞击环上，被迫改变方向从出口管流出。细胞在这一系列过程中经历了高速剪切、碰撞和空穴效应等，从而造成细胞的破碎。
　一般认为压力超过100Mpa就是超高压。在超高压条件下，生物体高分子立体结构中的非共价结合发生变化，使细胞膜破裂，菌体内成分泄漏，生命活动停止，微生物菌体破坏而死亡。所以，超高压均质仪在细胞破碎等方面得到了重视和广泛应用。 　　　　　　微生物超高压处理前 微生物超高压处理后
　低温超高压连续流细胞破碎仪的问世，填补了市场空白。尤其在保持蛋白质或多肽活性方面，低温超高压连续流细胞破碎仪的效果是显著的①。这是因为进样、破碎、出样全过程在4~6℃低温循环水浴中进行，细胞高压破碎时产生的热量被冷却循环水吸收。在内部核心结构设计方面，低温超高压连续流细胞破碎仪，经过反复设计、计算和实验，找到了剪切、碰撞、空穴三种效应搭配的最佳比例。这种独特设计，既保证了细胞的破碎率，同时最大限度地保持了蛋白质或多肽的活性。　我们曾用某品牌超声波细胞破碎仪和低温超高压连续流细胞破碎仪破碎相同量的大肠杆菌，进行对比实验。实验结果显示，使用某品牌超声波破碎得到的多肽活性为110U/mg, 而使用低温超高压连续流细胞破碎仪得到的数据是155U/mg。用低温超高压连续流细胞破碎仪破碎后的多肽活性比超声波破碎提高了40%。　①参考文献：基因重组胰高血糖素样肽-1衍生多肽的表达和产物纯化与鉴定，中国生物工程杂志，）：1~6。
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超声波破碎细胞原理|超声波细胞破碎仪器|超声波破碎酵母细胞
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产地：上海
厂商性质：生产商品牌：
公司名称： 上海欧河机械设备有限公司
型号：UH300
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