植物细胞悬浮培养培养中有原代培养与传代培养么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-18 14:22 标签： 植物细胞培养
请问在原代培养和传代培养中的“代”具体指的的是什么?0 0这个和我们以前学的“子一代”什么的有联系么?请赐教~
渣攻光d3fOq
其实这个”代“是中文翻译的时候加上的,英文里没有对应的词.原代是primary（最初的、初始的）,传代是passage（传递）.有的同学说的是正确的,细胞有丝分裂一次叫”一代”,其实就像动物生小动物叫“后代”,或者”一代人“的意思一样.可能是最早的翻译者把这个”代“用在细胞培养的翻译里,为了更加形象、便于理解吧.原代培养,就是把细胞从动物体内取出直接培养,这些细胞叫原代细胞,就是”第一代“或者”最早一代“的细胞的意思.传代培养,就是细胞到达一定密度后,将之按照一定比例稀释、再培养的方法,便于细胞继续分裂出下一代,“传下去”的意思.有问题欢迎追问.
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动物细胞原代培养
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&&动物细胞原代培养
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你可能喜欢谁能说一下原代培养和传代培养的区别
原代培养 通过组织块直接长出单层细胞或用酶或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养,在首次传代前的培养可认为是原代培养.原代培养最大的优点是,组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,在一定程度上能反映体内状态.特别是在细胞培养会合时,原代培养的某些特殊功能表达尤为强烈.在这样的培养阶段能更好地显示与亲体组织紧密结合的形态学特征.在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下,采用原代培养做各种实验,如药物测试、细胞分化等,效果很好.但应注意,原代培养组织是由多种细胞成分组成的,比较复杂.即使全为同一类型的细胞,如上皮细胞或成纤维细胞,也仍具有异质性,在分析细胞生物学特性时比较困难.其次,由于供体的个体差异及其他一些原因,细胞群生长效果有时也不一致.原代培养也是建立各种细胞系（株）必经的阶段.假如原代培养能够维持几小时甚至更长,即可进行进一步筛选.有的细胞具有继续增殖能力,有的细胞类型只是存活而不增殖,而另外一些细胞只是在特殊条件下应用而不存活,因而细胞类型的分布将会改变.在单层培养的情况下,瓶底全部铺满细胞,达到会合以后,对密度有依赖性的细胞则逐渐减少生长,而失去密度依赖敏感性的细胞则生长增加,天然或自发转化的细胞则过度生长.借助于频繁传代,保持细胞低密度生长,有利于保存细胞的正常表型（如小鼠成纤维细胞）.而自发转化则倾向于高细胞密度的过度生长.传代培养 原代培养形成的单层细胞汇合以后,需要进行分离培养,否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭,都将影响细胞的生长,这一程序常称为传代或传代培养.原代培养在首次传代时即为细胞系,能连续培养下去的为连续细胞系；不能连续培养的为有限细胞系.通常,传代培养是指扩大培养,也就是将一份细胞一分为二或者一分为三进行培养等.但严格说来,不论稀释与否,将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养.可以理解,在任何时候,细胞从一个瓶子接种到另一个瓶子时总会丢失一部分,因此,在客观上细胞必定有所稀释.传代代数这一概念常常容易同“增殖代数”相混淆.细胞“一代”一词仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间.如某一细胞系为第153代,即指该细胞系已传代153次.它与细胞“增殖代数”（细胞世代或倍增）不同,在细胞一代中,细胞约能倍增3～6次.由此可见,细胞代数与增殖代数相关,确切的代数则依赖于细胞株和培养条件的不同而异.但构成一个细胞系的生长条件必须是同样的,因而细胞系应该表达近似的增殖代数或倍增代数.原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line),由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成.如果不能继续传代,或传代次数有限,可称为有限细胞系(finite cell line),如可以连续培养,则称为连续细胞系(continuous cell line),培养50代以上并无限培养下去.从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群称细胞株(cell strain).所以细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞.从培养代数来讲,可培养到40-50代.
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其实这个”代“是中文翻译的时候加上的,英文里没有对应的词.原代是primary（最初的、初始的）,传代是passage（传递）.有的同学说的是正确的,细胞有丝分裂一次叫”一代”,其实就像动物生小动物叫“后代”,或者”一代人“的意思一样.可能是最早的翻译者把这个”代“用在细胞培养的翻译里,为了更加形象、便于理解吧.原代培养,就是把细胞从动物体内取出直接培养,这些细胞叫原代细胞,就是”第一代“或者”最早一代“的细胞的意思.传代培养,就是细胞到达一定密度后,将之按照一定比例稀释、再培养的方法,便于细胞继续分裂出下一代,“传下去”的意思.有问题欢迎追问.
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细胞有丝分裂一次叫一代。子一代指的是生物个体通过繁殖产生第二代。
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(一)原理 体外培养的或要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。 细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。 &
(二)操作 1．将长成单层的原代培养细胞或HeLa细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中倒掉瓶内的培养液，加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜)，静置5～10分钟。2.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变园，相互之间不再连接成片，这时应立即在超净台中将消化液倒掉，加入3～5ml新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。 3．将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。 &
(三)结果 一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2～4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。&
【器材及液体的准备和无菌操作的注意事项 】&
(一)器材和液体的准备 细胞培养用的玻璃器材，如：培养瓶、吸管等在清洗干净以后，装在铝盒和铁筒中，120℃，2小时干烤灭菌后备用；手术器材、瓶塞、配制好的PBS液用灭菌锅15磅，20分钟蒸气灭菌；MEM培养液、小牛血清、消化液用G6滤器负压抽滤后备用。&
&(二)无菌操作中的注意事项 在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒。操作前20～30分钟起动超净台吹风。操作时，严禁说话，严禁用手直接拿无菌的物品，如瓶塞等，而要用器械，如止血钳、镊子等去拿。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前用乙醇将瓶口消毒，打开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮**，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
ATCC细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏实验方法步骤
三、ATCC细胞 &细胞冻存方法
主要操作步骤为：
（1）选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心（1000r/min，10分钟）。
（2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。
（3）将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。
（4）将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时（此步可省略），再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，最后沉入液氮中。
细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
ATCC细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏实验方法步骤
四、细胞的复苏
一、细胞复苏的原则
在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。
二、细胞复苏的主要操作步骤
(1)佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。
(2)迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化，然后在无菌下取出细胞。
(3)在1000r/min速度下离心5～10分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×109/L，置37℃温箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。
ATCC细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏实验方法步骤
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