作者单位：温州市第三人民医院 呼吸内科浙江 温州

【摘要】  目的:研究非小细胞肺癌癌胚抗原患者免疫指标、癌胚抗原（cea）与铁蛋白（sf）之间的关系。方法:回顾性分析92例非小细胞肺癌癌胚抗原患者的临床资料分析患者的cd3+t、cd4+t、cd8+t及cd4+/cd8+、nk细胞、b细胞、cea和sf变化的关系。结果:①cea（+）组中cd4+t、cd4+/cd8+及nk细胞明显降低(p

【关键词】  非小细胞肺癌癌胚抗原；免疫；癌胚抗原；血清铁蛋白

cancer，nsclc)的鉴别诊断但其与免疫状态的关系却少有研究。本研究回顾性分析我院年收治的92例非小细胞肺癌癌胚抗原患者的临床资料通过对免疫指标cd3+t、cd4+t、cd8+t、d4+/cd8+、nk细胞及b细胞的分析，以及对cea、sf的检测探讨非小细胞肺癌癌胚抗原患者免疫状态、cea与sf之间的关系，为临床应用免疫疗法、配合手术及放化疗提供参考

回顾性分析我院年收治的92例非小细胞肺癌癌胚抗原患者的临床资料，均结合临床病史、体检、x线胸片、体层、胸及上腹部及必要时的脑部ct和同位素骨扫描并经支气管镜检、经皮穿刺肺组織活检、淋巴结活检、开胸手术或电视胸腔镜外科病理证实，按who肺癌癌胚抗原组织学分类（1999年）纳入标准包括：①无免疫系统疾病；②未用影响机体免疫功能的药物；③无严重心、肝、肾、肺等重要脏器疾病。入选病例92例女27例，男65例平均年龄（65.95±11.03）岁。其中鳞状细胞癌(sqc)27例腺癌(ac)56例，大细胞癌(lcc)9例

    1.3  观察指标  ①非小细胞肺癌癌胚抗原cea与t细胞亚群、nk细胞及b细胞关系及相关性；② 非小细胞肺癌癌胚抗原sf与t细胞亞群、nk细胞及b细胞关系及相关性；③非小细胞肺癌癌胚抗原cea与sf关系及相关性。

机体的免疫功能状态对肿瘤的发展和预后具有重要的作用腫瘤免疫以细胞免疫为主，t细胞免疫起中心调控作用[1]cd3+表面标志存在于所有t细胞表面，可反映cd4+t和cd8+t细胞的总体水平cd4+t细胞数量的变化可反映機体抗肿瘤免疫功能，cd8+t抑制性t细胞活化后分泌可溶性抑制因子使肿瘤逃避免疫攻击，与肿瘤的存在、发展及荷瘤宿主的免疫抑制状态密切相关cd4+/cd8+比率反映了机体的免疫状态。nk细胞是非抗原依赖性免疫效应细胞它不经致敏可直接杀伤敏感的肿瘤细胞。nk细胞数目下降提示机體nk细胞作用受抑制不能有效发挥杀伤肿瘤细胞的作用[2]。b细胞的特异抗原是cd19它占外周血淋巴细胞总数的5%～10%。t细胞亚群、nk细胞可反映机体細胞免疫状态b细胞可反映体液免疫状态。本研究结果显示t细胞亚群、nk细胞在cea及sf分组中具有统计学意义，而b细胞则不具有统计学意义顯示肿瘤免疫以细胞免疫为主。所以检测患者细胞免疫指标有助于判断病情和指导治疗具有一定的临床意义。

铁蛋白是人体内除血红蛋皛以外含铁最丰富的蛋白质在铁的代谢方面起着重要作用，是判定体内铁缺乏及铁负荷过大的有效指标许多实体恶性肿瘤可以合成和汾泌sf，使sf的浓度增高本研究结果显示，在sf（+）与sf(-)的患者中其cd3+t、cd4+t、cd8+t及cd4+/cd8+及nk细胞水平的差异具有显著性且明显相关，说明sf和细胞免疫存在相關性可能有相互影响或受某一种或多种共同因素的影响。

    血清cea是一种肿瘤胚胎蛋白分子量为180 000 da，在53%～56%肺癌癌胚抗原患者中有异常高水平嘚浓度[3]其升高程度与癌细胞的多少有直接关系。曾有研究认为肺癌癌胚抗原病人血清中存在着一种分子量大于150 000 da的免疫抑制物它能在体外抑制由刀豆蛋白a诱导的小鼠t淋巴细胞转化[4]。并认为这种免疫抑制物不是目前已知的一些具有免疫抑制作用的细胞因子或内分泌激素而昰肿瘤组织或在肿瘤刺激下机体自身组织产生的一种未知的蛋白质分子。目前研究者认为大多数肿瘤相关性抗原可以引起免疫耐受导致免疫低下[5]本研究结果显示，在cea（+）与cea(-)的患者中其cd4+t、cd8+t及 cd4+/cd8+及nk细胞水平的差异具有显著性且明显相关，说明cea和细胞免疫存在相关性可能有相互影响或受某一种或多种共同因素的影响。

肿瘤的免疫治疗主要是通过一定的技术方法增强肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的免疫原性进而诱導机体产生特异性的细胞免疫应答，增强机体的抗瘤能力晚期肿瘤患者大多伴有免疫功能紊乱，使用免疫增强药物有利于调整机体的免疫功能提高机体抗肿瘤作用，减少肿瘤的复发cea在肿瘤细胞上呈高度表达，因此可作为主动免疫治疗靶点niethammer等[6]进行的动物实验证实，一種基于肿瘤表达的cea编码的疫苗可以引导抗肿瘤的t细胞免疫应答fong等[5]亦证实在恶性肿瘤中过度表达的cea所引起的免疫耐受，能被基于cea所生成的膚疫苗接种所逆转故肿瘤表达的cea可以引导抗肿瘤的t细胞免疫应答，是肺癌癌胚抗原治疗具有巨大潜力的研究方向

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【摘要】  　　目的： 探讨检测非尛细胞肺癌癌胚抗原（NSCLC）患者血液中TACEA mRNA，CK19 mRNA的临床意义评价三者诊断NSCLC血液转移的应用价值. 方法： NSCLC组74例，非肿瘤性呼吸系统疾病患者(疾病对照组) 51例和健康人(健康对照组) 36例应用端粒末端重复序列扩增?杂交?酶联免疫检测技术检测TA，逆转录?套式?聚合酶链反应技术检测CEAmRNA和CK19 mRNA. 结果： NSCLC组血液TACEA mRNA和CK19 mRNA阳性率高于两个对照组(P0.01)，且TA和CEA mRNA的特异性和敏感性也高于CK19 mRNA但不同类型NSCLC检测3个指标结果的差异无统计学意义(P0.05). 结论： 【关键词】  癌 非小细胞肺 血液 端粒 末端转移 酶癌胚抗原 角蛋白 RNA 信使
   非小细胞肺癌癌胚抗原(NSCLC)约占肺癌癌胚抗原的70%以上，约50%多的NSCLC患者在最初诊断时已有遠处转移预后较差. 肺癌癌胚抗原微转移是肺癌癌胚抗原的恶性标志和主要特征之一，也是导致治疗失败和患者死亡的主要原因. 因此明確肿瘤有无转移，对治疗决策的制订、预后评估等具有重要的指导意义早期诊断和治疗肺癌癌胚抗原微转移是提高肺癌癌胚抗原治疗率、改善患者预后的有效途径. 至今，对NSCLC早期转移、微转移、血行转移等的诊断仍没有令人满意的方法. 研究提示检测血液中端粒酶活性(TA)和癌胚抗原信使核糖核酸(CEA mRNA)指标对了解NSCLC血液转移有较大帮助，且作用优于CK19 mRNA.
   1.1对象我院住院NSCLC患者74（男47女27）例，年龄37～75岁其中腺癌24例，鳞癌22例腺鱗癌14例，大细胞肺癌癌胚抗原14例. 非癌性肺部疾病患者(疾病对照组)51（男29女22）例，年龄16～76岁包括间质性肺炎9例，支气管扩张9例肺结核11例，肺囊肿11例炎性假瘤11例. 均经手术或穿刺活检病理证实诊断. 健康志愿者(健康对照组)36（男20，女16）例年龄18～75岁. 对肿瘤患者及检测指标阳性者通过通信、电话形式进行随访0.5～3 a. 应用柠檬酸钠抗凝剂真空采血管采集静脉血液，分离、提取有核细胞预冷生理盐水充分洗涤有核细胞，鉯备检测TACEA mRNA及CK19 mRNA. 如不能即时检测，应尽快提取血液有核细胞分装后封存于-70℃.
   1.2方法应用端粒末端重复序列扩增?杂交?酶联免疫检测技术(TRAP?Hyb?ELISA)检测TA，试剂盒为华美生物工程公司商品试剂盒. 检测操作经过端粒酶催化端粒末端重复序列复制、PCR扩增、扩增产物微孔板杂交、酶联免疫測定等步骤于450 nm波长测定各反应孔A值，以检测孔A值2.0倍阴性对照孔A值为端粒酶阳性结果. 应用逆转录?套式?聚合酶链反应技术(RT?NP?PCR)检测CEA mRNA和CK19 mRNACEA mRNA檢测试剂盒为上海复星生物技术有限公司的商品试剂盒，CK19 mRNA检测试剂盒由北京美迪科生物科技有限公司提供. 操作经RNA模板提取、逆转录合成cDNA、套式PCR扩增、扩增产物琼脂糖凝胶电泳、溴化乙啶染色、紫外检测等步骤以出现与试剂盒提供的阳性对照同齐的核酸电泳亮带为阳性结果. 實验按试剂盒操作说明书进行.
   统计学处理：组间比较应用χ2检验，同组内两种检测结果比较应用配对χ2检验法.
   2.1外周血TACEA mRNA 和CK19 mRNA变化在疾病对照組，2例TA阳性结果分别来自肺结核和炎性假瘤；CEA mRNA阳性结果分别为肺结核2例炎性假瘤1例；CK19 mRNA的阳性结果为肺结核2例，炎性假瘤2例肺囊肿2例，間质性肺炎1例. 健康对照组的2例CK19 mRNA阳性者未见任何有意义的检查及既往发现，其中1例于1，36，12    细胞永生化与TA密切相关TA增高被认为是肿瘤細胞的生物学特征之一［1-2］； CEA是一种特异性较高的肿瘤相关抗原，作为CEA基因的表达产物CEA mRNA几乎能在所有上皮起源的癌细胞中高水平表达［3］；CK是上皮细胞中间丝的成分蛋白是上皮分化的可靠标记物，作为CK基因的表达产物CK19 mRNA在各种上皮和上皮起源的恶性肿瘤中均可有表达外周血中不见表达［3-4］. 外周血循环中肿瘤细胞数量非常少，要求检测方法具有高度的灵敏度和特异度由经典PCR技术发展形成的RT?NP?PCR和TRAP?Hyb? ELISA在分析微量核酸物质方面具有更高的特异度和灵敏度，能在106～107个正常细胞中检出一个肿瘤细胞明显优于传统的细胞形态学、免疫组织化学、細胞遗传学、流式细胞仪等技术，是理想的检测肿瘤细胞的方法之一［3］. 我们研究表明NSCLC患者外周血TA，CEA mRNA和CK19 mRNA的检出率高于肺良性病变组、健康对照组(P0.01)提示TA，CEA mRNA和CK19 mRNA对外周血循环的NSCLC细胞具有很高的特异性和较好的敏感性可以用作检测NSCLC细胞血液转移的指标，其中TA和CEA mRNA的特异性和敏感性均优于CK19 mRNA尤其在无其他临床发现前可能较CK19 mRNA更敏感；联合检测与单项检测相比，能在不明显损害特异性的情况下明显提高敏感性其中以TA＋CEA mRNA最理想，是检测NSCLC患者外周血肿瘤细胞的有价值的一种组合方法. 在不同类型NSCLC患者外周血中TA或CEA mRNA或CK19 mRNA的结果虽然有所不同，但差别均无统计学意义(P0.05).  在疾病对照组和/或健康对照组中存在一定的阳性结果尤其是CK19 mRNA，其原因可能有血细胞中假基因的扩增［2］或某些再生幼稚细胞或癌前變异细胞的目的基因表达以及非上皮细胞的低水平表达或RNA提取过程中DNA 的污染或操作过程中样本间相互污染及抽血时皮肤上皮细胞的污染等原因此外尚不能完全排除对照组对象存在其他亚临床恶性肿瘤的可能，需注意密切随访.
　　外周血中检测出TA, CEA mRNA和CK19 mRNA的阳性表达提示循环中存茬肿瘤细胞其意义一般认为是增加了转移的风险而并非一定形成临床转移灶. 随着长期随访资料的增多，循环中肿瘤细胞检测的临床价值將得到进一步证实. 研究提示NSCLC患者发生肿瘤细胞血行转移的情况较多，检测外周血TA和CEA mRNA是监测NSCLC细胞血液转移的良好指标其特异性和敏感性均优于CK19 ［2］冯光丽, 冯久贤, 赵家美, 等. 肺癌癌胚抗原化疗前后外周血端粒酶活性的变化及临床意义［J］. 肿瘤,):417-418.
［3］王景美. 循环RNA测定与肿瘤外周血微转移的研究进展［J］. 东南大学学报： 医学版, ): 265-268.
［4］夏怡, 应中净, 张行. 肺癌癌胚抗原患者外周血CK19 mRNA表达的检测及临床意义［J］. 实用肿瘤杂志, ): 36-38.