血液提取dnadna提取为什么用edta抗凝血

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-30 12:14 标签： edta抗凝
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1. 分离外周血白细胞(1)取患者肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10 min。(2)小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml中。(3)在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15 min。(4)2500rpm离心10 min，弃上清。 (5)加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15 min。(6)3000rpm离心10 min，弃上清。(7)倒置，去掉残液。(8)得白细胞，－80&C冻存。2. 从白细胞中提取DNA&&(1)取白细胞，加4.5ml SE，使劲吹打，混匀。(2)沿管壁加入0.5ml的10％SDS。(3)加蛋白酶E 50μl／管。(4)首尾轻摇10 min，混匀。(5)37&C水浴过夜。(6)第二天取出，沿管壁加3 ml饱和NaCL，迅速手摇15秒，使蛋白变性析出。(7)4000rpm离心10 min。(8)取出上清，放于另一管中，加入等体积的三氯甲烷，混匀15 min。(9)2500rpm离心10 min。(10)取出上清，加入等体积的三氯甲烷，混匀10 min。(11)2500rpm离心10 min。(12)取上清，转入50ml管中，加3倍体积无水乙醇。(13)首尾轻摇，见DNA絮状沉淀析出。(14)将DNA挑至管壁，75％乙醇洗涤2遍。(15)将DNA挑至0.5ml管中，冻干。(16)加TE 300μl，使DNA溶解，4&C保存。
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