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菌 落 总 数 测 定
& 18:43:38
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验GB 菌 落 总 数 测 定代替GB Microbiological examination of
hygieneDetection of aerobic bacterial count──────────────────────────────────1主题内容与适用范围本标准规定了中菌落总数的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。2术语菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。 本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。3引用标准GB 4789.28微生物学检验染色法、培养基和试剂4设备和材料4.1 温箱:36±1℃。4.2 冰箱：0～4℃。4.3 恒温水浴 :46±1℃。4.4 天平。4.5 电炉。4.6 吸管。4.7 广口瓶或三角瓶:容量为500mL4.8 玻璃珠:直径约5mm4.9 平皿:直径为90mm4.10 试管。4.11 放大镜。4.12 菌落计数器。4.13 酒精灯。4.14 均质器或乳钵。4.15 试管架。4.16 灭菌刀或剪子。4.17 灭菌镊子。5培养基和试剂5.1 营养琼脂培养基:按GB .7规定。5.2 磷酸盐缓冲稀释液:按GB .22规定。5.3 生理盐水。5.4 75%乙醇。6检验程序菌落总数的检验程序如下┌────┐│ 检样 │└────┘↓┌────────────┐│做成几个适当倍数的稀释液│└────────────┘↓┌───────────────┐│选择2-3个适宜稀释度││ 各以1mL分别加入灭菌平皿内│└───────────────┘↓┌────────────┐│ 每皿内加入适量营养琼脂 │└────────────┘36±1℃ ↓ 48±2h┌────┐│菌落计数│└────┘↓┌───┐│报告│└───┘7操作步骤7.1 检样稀释及培养7.1.1 以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8 000～10 000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液), 振摇试管,混合均匀,做成1:100的稀释液。7.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液, 如此每递增稀释一次,即换用1支1mL灭菌吸管。7.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2-3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL 稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。7.1.5 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴 保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液灭菌平皿内作空白对照。7.1.6 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h7.2 菌落计数方法做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平析平均菌落总数。7.3 菌落计数的报告7.3.1 平板菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两 个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时, 则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数, 若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线) ,若仅有一条链,可视为一个菌落;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。7.3.2 稀释度的选择7.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表中例1)。7.3.2.2 若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30～300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2 则报告其中较小的数字)见表中例2及3)。7.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300, 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。7.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。7.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表中例6)。7.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。7.3.3 菌落数的报告菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字, 在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数, 也可用10的指数来表示(见表中“报告方式”栏)。稀释度选择及菌落数报告方式──┬─────────────┬────┬────┬────────例次│稀释液及菌落数│两稀释液│菌落总数│报告方式├────┬────┬───┤之比│个/g或mL│个/g或mL│ 10-1│ 10-2│ 10-2 │││──┼────┼────┼───┼────┼────┼────────1│多不可计│ 164│20│─│ 16400│1×104││││││2│多不可计│295│46│1.6│ 37750│3 ×104││││││3│多不可计│271│60│2.2│ 27100│27 000或2.7×104││││││4│多不可计│多不可计│ 313│─│ 313000 │31 ×105││││││5│27│11│5│─│270│270或2.7×102││││││6│0│0│0│─│〈1×10│＜10││││││7│多不可计│305│12│─│ 30500│31 000或3.1×104││││││──┴────┴────┴───┴────┴────┴─────────────────附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人刘宏道本标准由卫生部委托归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。───────────────────────────────────中华人民共和国卫生部批准实施食品毒素/微生物检测
主题：【讨论】检验固体食品样品时，1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数应如何报告？
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发表于： 16:57:50
检验固体食品样品时，1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数应如何报告？
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报告未检出就行了
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长一个是10个，没长是＜10个？
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原文由 afaf66(afaf66) 发表:报告未检出就行了为什么？说一下理由。
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原文由 tangtang(tangtang) 发表:长一个是10个，没长是＜10个？结果报告表示单位？
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＜10cfu/g?
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同意tangtang的答案: ＜10cfu/g
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应该＜10cfu/g
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原文由 tangtang(tangtang) 发表:＜10cfu/g?是啊，应该是以“CFU(菌落数)”表示，不是以“个”数表示，cfu→CFU应为大写
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检验固体食品样品时，1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数应如何报告？＜10 CFU/g的报告表示是对的，但另外值得探讨的是＜10 CFU/g，在&&GB 10食品安全国家标准&&食品微生物学检验 菌落总数测定7.1.5 的表述中：若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。按照这一要求我们是否对这个结果报告表述为：＜1×10 CFU/g更加规范呢？“×10”则表述为1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，一看结果就很容易理解和明白。如果是1/100稀释液平皿上未出现菌落生长，结果报告则表述为： CFU/g
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原文由 【四季风】(gpwrx) 发表:检验固体食品样品时，1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数应如何报告？＜10 CFU/g的报告表示是对的，但另外值得探讨的是＜10 CFU/g，在&&GB 10食品安全国家标准&&食品微生物学检验 菌落总数测定7.1.5 的表述中：若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。按照这一要求我们是否对这个结果报告表述为：＜1×10 CFU/g更加规范呢？“×10”则表述为1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，一看结果就很容易理解和明白。如果是1/100稀释液平皿上未出现菌落生长，结果报告则表述为： CFU/g对以上的结果表述，你的看法如何？君，已阅读到文档的结尾了呢~~
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稀释度选择及菌落总数报告方式.ppt
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&&&&&&&&&供应通用型菌落总数测试纸
供应通用型菌落总数测试纸
[更新日期:]
产品型号：24片/包
原产地：广州
品牌：绿洲
价格：98元
产品数量：50
产品关键字：试纸
经营性质：个体经营
所在区域：&
地址：沈阳市沈河区十一纬路169号富中大
产地：广州
等级：优级品
颜色：暖白
品牌：绿洲
型号：24片/包
加工定制：是产品说明
1、原理及适用范围
&&菌落总数是指样品经过处理在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数是最常用的微生物检测项目。菌落总数测试片（FilmplateTM Aerobic &&BB）是一种预先制备好的一次性培养基产品含有标准的营养培养基冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC）菌落在测试片上呈红色这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定（GB/T .2-）。
2、操作方法
&&2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内制成1:10的样品匀液必要时用1mol/LNaOH或1mol/L&&HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL注入含有9mL稀释液的试管内振摇后成为1:的样品匀液以此类推做出1:等稀释度的样品匀液每次换一支吸管。 &&2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB）置于平坦实验台面揭开上层膜用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上然后再将上层膜缓慢盖下静置10s左右使培养基凝固每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。 &&2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口透明面朝上水平置于恒温培养箱内堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃培养48h。 3、结果判读
&&细菌在测试片上生长后会显示红色斑点选择菌落数适中（30～个）的测试片进行计数乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。 4、计数原则及报告方式
&&4.1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内计算两个纸片菌落数的平均值再将平均值乘以相应稀释倍数作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。 &&4.2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时按式(1)计算: 式中：
N——样品中菌落数；
∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；
n1——第一个适宜稀释度测试片数；
n2——第二个适宜稀释度测试片数；
d——稀释因子(第一稀释度)。
示例：
上述数据经“四舍五入”后表示0或2.5×。
&&4.3、若所有的稀释度菌落总数均大于CFU则对稀释度最高的测试片进行计数其他测试片可记录为多不可计结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 &&4.4、若所有的稀释度菌落总数均小于30CFU则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 &&4.5、若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 &&4.6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30CFU～CFU之间其中一部分小于30CFU或大于CFU则以最接近30CFU或CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 4.7、菌落总数的报告
&&4.7.1、菌落总数在CFU以内时按“四舍五入”原则修约采用两位有效数字报告。 &&4.7.2、大于或等于CFU时第三位数字采用“四舍五入”原则修约后取前两位数字后面的0代替位数也可用10的指数形式来表示按“四舍五入”原则修约后采用两位有效数字。 4.7.3、若测试片上一片红色无法计数时则报告多不可计。
4.7.4、若空白对照上有菌落生长则此次检测结果无效。
&&4.7.5、称重取样以CFU/g为单位报告体积取样以CFU/mL为单位报告。 5、表面取样方法
&&加1mL灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在测试片上至少静置10S使培养基凝固；提起上层膜使中央滤纸部分贴到待测物表面用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上置培养箱内培养。 6、附加说明
&&6.1、菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80％以上山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87％。 &&6.2、磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于mL蒸馏水中用大约mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2用蒸馏水稀释至mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL用蒸馏水稀释至mL分装于适宜容器中℃高压灭菌15分钟或者放入消毒碗柜中消毒。 &&6.3、生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到mL蒸馏水或纯净水中先煮开后进行分装取9mL加入到10mL洁净试管中盖上硅橡胶塞或棉纱塞放入红外线消毒柜中消毒。 7、保存条件
&&本产品需存放在4℃～10℃冰箱中保质期为一年铝箔袋打开后未用完的纸片要放回铝箔袋中封好放到冰箱中一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水最好在拆封前将整包回温至室温。
联系我时，请说是在搜了网上看到的，谢谢！
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食品卫生微生物学检验之菌落总数测定
15:58|作者：陈秀鹏 来源: 北京泽优 | 查看: 25| TAG:
食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 【中华人民共和国国家标准 中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验 GB 4789.2-
&&&&食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 【中华人民共和国国家标准 中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验 GB 菌落总数测定 代替 GB Microbiological examination of food hygiene Detectionof aerobic bacterial count───────────────────────────────────────1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于食品中菌落总数的测定2 术语菌落总数指食品检样经过处理,定条件下培养(培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数本方法规定的培养条件下所得结果,只包括群营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数菌落总数主要作判定食品被污染程度的标志,也以应用方法观察细菌食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据3 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂4 设备和材料4.1 温箱：36±1℃4.2 冰箱：0～4℃4.3 恒温水浴：46±1℃4.4 天平4.5 电炉4.6 吸管4.7 广口瓶或三角瓶：容量500mL4.8 玻璃珠：直径约5mm4.9 平皿：直径90mm4.10 试管4.11 放大镜4.12 菌落计数器4.13 酒精灯4.14 均质器或乳钵4.15 试管架4.16 灭菌刀或剪子4.17 灭菌镊子5 培养基和试剂5.1 营养琼脂培养基：按GB .7规定5.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB .22规定5.3 生理盐水5.4 75％乙醇6 检验程序菌落总数的检验程序下┌─────┐│ 检 样 │└─────┘↓┌─────────────┐│ 做成几个适当倍数的稀释液 │ └─────────────┘↓┌──────────────┐│ 选择2～3个适宜稀释度 ││ 各以1mL分别加入灭菌平皿内 │└──────────────┘↓┌─────────────┐│ 每皿内加入适量营养琼脂 │└─────────────┘36±1℃ ↓ 48±2h ┌─────┐│ 菌落计数 │└─────┘↓┌──────┐│ 报 告 │ └──────┘7 操作步骤7.1 检样稀释及培养7.1.1 以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液固体检样加入稀释液,最好置均质器中以8 000～10 000r/min的速度处理1min,做成1∶10的均匀稀释液7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶100的稀释液7.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,此每递增稀释次,即换用1支1mL灭菌吸管7.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2～3个适宜稀释度,分别做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿7.1.5 稀释液移入平皿,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照7.1.6 待琼脂凝固,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h7.2 菌落计数方法做平板菌落计数时,用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏记下各平板的菌落数,求出同稀释度的各平板平均菌落总数 7.3 菌落计数的报告7.3.1 平板菌落数的选择选取菌落数30～300之间的平板作菌落总数测定标准个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中个平板有较大片状菌落生长时,则宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作该稀释度的菌落数,若片状菌落平板的半,而其余半中菌落分布又均匀,即计算半个平板乘2以代表全皿菌落数平皿内有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有条链,视个菌落；果有同来源的几条链,则应将每条链作个菌落计7.3.2 稀释度的选择7.3.2.1 应选择平均菌落数30～300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表中例1)7.3.2.2 若有两个稀释度,其生长的菌落数均30～300之间,则视两者之比何来决定若其比值小于或等于2,应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)7.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以释稀倍数报告之(见表中例4)7.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)7.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表中例6)7.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均30～300之间,其中部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)7.3.3 菌落数的报告菌落数100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,二位有效数字面的数值,以四舍五入方法计算了缩短数字面的零数,也用10的指数来表示(见表中“报告方式”栏)稀释度选择及菌落数报告方式──┬─────────────┬──────┬────┬─────────│ 稀释液及菌落数 │ │菌落总数│ 报告方式例次├────┬────┬───┤两稀释液之比│个/g或mL│ 个/g或mL│ 10-1 │ 10-2 │ 10-3 │ │ │──┼────┼────┼───┼──────┼────┼─────────1 │多计│ 164 │ 20 │ - │ 16 400 │16 000或1.6×10**42 │多计│ 295 │ 46 │ 1.6 │ 37 750 │3 ×10**43 │多计│ 271 │ 60 │ 2.2 │ 27 100 │27 000或2.7×10**44 │多计│多计│ 313 │ - │ 313 000│31 000或3.1×10**55 │ 27 │ 11 │ 5 │ - │ 270 │270或2.7×10**2 6 │ 0 │ 0 │ 0 │ - │ ＜1×10│ ＜107 │多计│ 305 │ 12 │ - │ 30 500│31 000或3.1×10**4──┴────┴────┴───┴──────┴────┴─────────────────── 附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草本标准主要起草人刘宏道本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释───────────────────────────────────────中华人民共和国卫生部批准 实施消息发布日期：
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