免疫组化法检测VEGF与鼻咽癌颅内转移的关系 2004年第2卷第9A期 | 39康复网 | 医源世界
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免疫组化法检测VEGF与鼻咽癌颅内转移的关系
来源：中华现代临床医学杂志 作者：刘书静田道法李宏燕
摘要: 【摘要】 目的 探讨VEGF基因蛋白表达与鼻咽癌颅内转移发生的关系。方法 用VEGF多克隆抗体对50例鼻咽标本进行免疫组织化学染色（SP法）。结果 在鼻咽癌中，VEGF蛋白表达与颅内转移的发生有关（P0。结论 鼻咽组织中VEGF表达上调对脑转移癌的发生具有重要作用，检测鼻咽癌组织中VEGF蛋白表达水平可能是预测鼻咽癌颅内转移的......
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　　【摘要】 目的 探讨VEGF基因蛋白表达与鼻咽癌颅内转移发生的关系。方法 用VEGF多克隆抗体对50例鼻咽标本进行免疫组织化学染色（SP法）。结果 在鼻咽癌中，VEGF蛋白表达与颅内转移的发生有关（P&0.01）。结论 鼻咽组织中VEGF表达上调对脑转移癌的发生具有重要作用，检测鼻咽癌组织中VEGF蛋白表达水平可能是预测鼻咽癌颅内转移的重要指标。
　　Key words immunohistochemistry VEGF encephalic metastasis of nasopharynx carcinoma
　　鼻咽癌（nasopharynx，NPC）是我国南方常见的头颈部恶性，华南高发区发病率高达14.68～18.53/10万人口 ［1］& 。广东四会县更是高达25.12/10万人口。鼻咽癌病死率在全身恶性肿瘤中的比例，全国居第八位，两广居第三位，湖南居第四位。肿瘤转移对癌细胞来说也是个复杂而艰辛的工程。要完成这个工程，癌细胞必须具备多方面出众性质和获得适当的机会，肿瘤发生至转移形成并非轻而易举。有实验表明，每克瘤组织24h可向血中释放（3.2×l.4）×10 6 的瘤细胞，但最终能存活并形成转移瘤的不足1/0。瘤细胞一旦进入脉管，必须逃逸宿主免疫细胞的攻击和血压、血液旋流的物理性冲击等，绝大部分癌细胞会死亡。肿瘤转移往往是肿瘤患者死亡的直接原因，鼻咽癌是以高转移性为突出特点的恶性肿瘤，大部分患者由于早期发生转移而预后不良 ［2～4］& 。&&& 　　因鼻咽部毗邻颅底，病变容易破坏颅底并向颅内侵犯，颅内转移是鼻咽癌首发或治疗后远处转移的主要部位之一，为威胁鼻咽癌患者生命的主要原因 ［5～8］& 。CT、MRI以其断面成像和良好的组织分辨率，很好地显示了鼻咽部、颅底和绵窦等结构，因而对NPC颅底及颅内侵犯的评价具有重要价值。但我们肉眼可见的直径约1cm大小的瘤体已含的10 9 个癌细胞;故迫切需要阐明鼻咽癌颅内侵袭和转移有关机制对其转移进行有效防治。&& 　　笔者采用免疫组织化学方法（SP法）对50例鼻咽疾患患者鼻咽组织中的VEGF蛋白表达进行研究，探讨鼻咽癌& 脑转移的发生机制。
　　1 资料
　　1.1 一般资料 湖南省肿瘤医院2003年5月～2004年5月首次确诊为鼻咽癌的病人及同期确诊为慢性鼻咽炎的湖南境内患者50例，确诊前3个月未接受特殊治疗的患者。采用随机数字平行阳性对照、自身前后对照观察设计方案。采用临床试验单位的住院病例和门诊病例，住院病例数不少于总病例数的1/2，门诊病例注意严格控制可变因素。男30例，女20例。年龄最小者20岁，最大者63岁，平均年龄37岁。性别，年龄经统计学处理差异无显著性。&&& 　　鼻咽癌上行转移患者（颅神经型，颅神经受侵犯和颅底骨破坏，但无颈部转移，无远处转移）10例，鼻咽癌下行转移患者（颈淋巴结广泛转移型，常有广泛全身淋巴结受累的可能）10例，鼻咽癌上下混合型转移患者10例，鼻咽癌无转移患者10例，鼻咽部慢性鼻咽炎患者10例。&&& 　　1.2 疾病诊断标准 鼻咽癌颅内转移的确定，参照全国常见恶性肿瘤诊治规范 ［9］& 及MRI检查。&& 　　1.3 排弃标准 不符合上述西医诊断标准及中医证候诊断标准;合并有严重的心血管、肝、肾等疾病;精神病患者年龄在20岁以下或63岁以上，妊娠或哺乳期妇女;非湖南出生或非汉民族。&&& 　　1.4 纳入标准 组织标本西医诊断标准。上行转移:鼻咽癌颅内转移。下行转移:鼻咽癌淋巴结转移。上行加下行转移:鼻咽癌颅内转移加淋巴结转移。鼻咽癌无转移。鼻咽部慢性炎组织。其他部位颅内转移活组织固定后做蜡块保存。
　　2 方法&&& 　　2.1 免疫组织化学法观察不同鼻咽组织中或脑组织VEGF的表达&&& 　　2.1.1 材料与仪器 （1）材料:①取材:符合上述标准的鼻咽部或脑组织;②试剂:A4%多聚甲醛（PFA）;B甲醇-H 2 O 2 液;C PBS:10×贮存液，1×工作液，（0.1M、0.5M、2M PBS均相应配制;D S-P封固液。E0.01M枸橼酸缓冲液;F Poly-L-LG蓝色DAB显色试剂盒（4℃保存）。H S-P免疫组化染色试剂盒（4℃保存，免冻）。（2）仪器:①BTS-20-M彩色图像显微分析系统，英国。②828型（台、手执式）PH/ISE测试仪，美国奥立成（orion）公司。③DZF-6050真空干燥箱，上海精宏实验设备有限公司。2XZ-05型旋片式真空泵，浙江黄岩医疗器械厂。④湿盒，100片型，Boster公司。⑤XDS-1B双目显微镜，徕卡公司。&&& 　　2.1.2 方法
　　2.1.2.1 标本取材及预处理 鼻咽部组织或脑组织标本于10%中性福尔马林液中固定24h后，取材编号放入少量伊红染色，放入全自动脱水机脱水透明浸蜡12h，然后包埋，修蜡块。连续切片4μm厚，捞3片，烤干，1片HE染色做常规对照，步骤如下:二甲苯脱蜡10min，无水乙醇2s，95%乙醇2s，80%乙醇2s，水冲洗5min，苏木素染色10min，水冲洗5min，1%盐酸酒精分化20s，返蓝10min，80%乙醇2s，90%乙醇2s，伊红2s，95%乙醇2s，95%乙醇2s，无水乙醇10s，烤干，中性树脂封片。&&& 　　2.1.2.2 载玻片处理 先经洗衣粉浸泡过夜，次日自来水冲洗后，泡酸数小时以上，取出后再用流水冲洗，双蒸水冲洗2～3次，置160℃以上烤箱中烧烤4h以上，或经15磅高压灭菌20min。经以上处理可清除载片上的核酸酶。&&& 　　HCl处理法:试剂:（1）1mol/L HCl;（2）DEPC水;（3）95%乙醇。步骤:（1）玻片在室温下于1mol/L的HCl中浸泡30（2）DEPC水中洗片;（3）95%乙醇中洗片;（4）空气中干燥;（5）重复一遍步骤1～4;（6）铝箔包好备用。&&& 　　2.1.2.3 多聚赖氨酸包被玻片 （1）沾附剂:多聚赖氨酸（poly-L-Lycine，PLL）;储备液（0～5%）:PLL25mg DEPC水5ml按上述剂量充分混合，即为浓度为5mg/ml（0.5%）的PLL液。常分装成1ml液，可反复冻融，无明显影响。用前充分混合。工作液（0.01%）:0.5%PLL1ml DEPC水50ml充分混合，静止待气泡消失。（2）多聚赖氨酸包被玻片的制备方法（其它包被剂相同）:将事先准备好的经160℃以上烘烤，并冷却至室温的玻片（载片或盖片），在0.05%（也有用0.1%）的PLL液中上下浸蘸几下，分散开竖放在架子上，于空气中自然干燥，4℃备用。注意:①浸蘸时，务必使整个玻片完全浸于液体中，否则，包被不完全会产生标本脱落现象;②干燥过程中注意避免尘埃污染;③按上法处理的玻片通常可存放在一定时间（室温1月以上，4℃更长），但仍建议尽早使用。④多聚赖氨酸1mg溶于10ml灭菌的去离子水或1mmol/L的Tris-HCl缓冲液中（PH7.0），将其涂布于玻片上，待干燥后即可使用。该法包被的玻片可用于细胞涂片和切片。（3）将PLL工作液滴至盖玻片上5μl/片，用另一盖玻片以推血涂片方法推片，或用另一盖玻片紧贴于其上，相互磨擦以使两盖玻片相对的一面涂布上PLL。该法制备的玻片，只有一面是包被有PLL，故制备时，待其晾干 后，应作好记号，然后保存后备用。&&& 　　2.1.2.4 微波抗原修复 微波抗原法是众所周知用于恢复福尔马林固定组织的抗原性。标准微波方法:将装有脱蜡切片的器官置于玻片温育盒中，盒中放入工作浓度的抗原修复液，盒盖稍开，并将盒置于微波炉中。将微波炉置于高档，待工作液一沸腾，立即关掉微波炉。设定微波炉功率200300W之间，加热10～15min调节功率设置，保证每20～30s开断一次，工作浴每个循环沸腾5～10s。让切片冷却20～30min，然后用蒸馏水多次冲洗。&&& 　　2.1.2.5 S-P免疫组化法（S-P试剂盒Boster公司）染色步骤 另2片多聚赖氨酸包被玻片，做免疫组化进行以下免疫组化染色程序。采用免疫组化S-P法对50例初次确诊的入选患者鼻咽粘膜VEGF的表达进行了检测。一抗为nm23-H，单浓缩型兔抗人VEGF多克隆抗体，购自美国Maxim公司，即用型免疫组化超敏S-P试剂盒购自美国Maxim公司（福建福州迈新生物技术开发公司分装为VEGF工作浓度为1∶50）。将标本切4um厚石蜡切片，微波抗原修复，作免疫组织化学（SP法）染色，对照:以PBS置换抗体阳性对照，以已知VEGF阳性的鼻咽癌组织作阳性对照。步骤如下:二甲苯脱蜡6min，二甲苯脱蜡6min，二甲苯脱蜡6min，无水乙醇2s，95%乙醇2s，80%乙醇2s，水冲10min，过氧化氢6min，PBS2s，PBS2s，热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0），电炉加热至90℃恒温10min，室温下自然冷却后0.1M，抗原修复液Ⅰ:用抗原修复液Ⅰ进一步暴露抗原―――滴加在切片上室温10min后，0.1M PBS洗涤2～3次，蒸馏水洗1次3min，PBS洗涤3次，每次5min，上机（滴加正常山羊血清50μl封闭液，室温5min，甩去多余液体，不洗。滴加适当稀释的一抗，室温1h左右，0.1M PBS洗5min×3次，滴加二抗，20℃～37℃30min。0.1M PBS洗5min×3次，滴加试剂三抗，37℃20min，0.1M PBS洗5min×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒（ED1022）。取85m1蒸馏水，加试剂盒中A、B、C试剂各17滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5～30min之间。PBS洗涤一次，苏木素轻度复染3～4min，1%盐酸酒精分化20s，水洗返蓝6min，60℃烤箱烤干，封片。显微镜观察。&&& 　　2.1.2.6 VEGF蛋白表达指标的检测 将以上程序染色封片后的标本，逐个置于高倍显微镜（10×25）下观察，细丙浆和（或）细胞核显示棕黄色颗粒为Nm23-H1或VEGF阳性细胞。切片经由计算机免疫组化分析系统分析（软件由华东理工大学研制），每张切片在瘤内随机选取五个视野（200X），单个视野约100个细胞进行测定，取其平均值，为该例标本VEGF阳性比率（%）。方法如下，先去除背景，分别扫描阴阳性细胞面积，经计算机自动分析得出阳性比率=阳性细胞面积/阴阳性细胞面积之和（%）。阳性比率&25%为阴性（-），&25%为阳性（+）。
　　2.1.3 统计学方法 使用PEMS（华西医科大学统计学教研室）统计软件包对数据进行统计学处理。
　　3 结果
&&&&&&& 见表1。
　　表1 鼻咽组织VEGF表达 （略） 注: △ P&0.01， ※ P&0.05
　　4 讨论
　　血管内皮生长因子（vasocular endothelial growth factor，VEGF）是目前所知作用最强的促血管内皮生长的细胞因子。VEGF又称血管通透性因子（VPF）是一种功能强大且能产生多种效应的细胞因子 ［10］& 具有增加微血管的通透性，促进不同来源的内皮细胞分裂和血管构建，促进内皮细胞的迁移等多种作用，还可诱导u-PA、t-PA和PAI及整合素的α 3β 3 的表达。　　
&&&&&&&&&&VEGF是一个家族，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E以及胎盘生长因子等。VEGF的mRˉNA有五种剪接变异体:VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206分别编码121、145、165、189、206个氨基酸。由于cDNA扩增丰度中VEGF165最高，所以是在临床和动物实验中应用最多的一种VEGF单体。所有的VEGF都有疏水性的前导肽，分泌到细胞外后前导肽被切去，产生成熟的蛋白。VEGF的活性形式是借二硫键连接的同源二聚体VEGF的作用通过受体KDR/F1K1、Flt1、Flt-4介导，VEGF受体主要存在于包绕或穿过肿瘤组织的血管内皮细胞。VEGF在硫酸肝素糖蛋白的参与下与受体结合，发生自身磷酸化而启动下游信号系统发挥作用。缺氧、癌基因及抑癌基因的缺失或变异、低血糖、雌激素作用等也可促进VEGF mRNA的表达 ［11］& 。血管内皮生长因子是最重要的血管生成刺激因子之一，它通过促进肿瘤血管生成从而促进多种肿瘤的转移 ［12］& 。
　　低氧是肿瘤组织中普遍存在的现象 ［13］& ，近年来研究发现 ［14］& 肿瘤微环境低氧可以诱导肿瘤细胞VEGF表达增加，并认为此机制在肿瘤转移的过程中可能起重要的作用。
　　VEGF在体内有两种效应形式即长期效应和短期效应。VEGF可以在短期内（5min）增加血管通透性，其效应是组胺的几万倍，导致循环中大分子外渗促进细胞外纤维蛋白基质的沉积，以利于成纤维细胞及内皮细胞的迁移及增殖。肿瘤组织中的基质细胞如内皮细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和肿瘤细胞均可分泌VEGF。有人认为 ［15］& 肿瘤基质细胞产生的VEGF在肿瘤的血管形成过程中作用更关键。
　　本组实验结果显示鼻咽癌颅内转移组及混合转移组VEGF表达水平明显高于其他组，与其他组比（P&0.01）有统计学意义。与姜凯等 ［16］& 的报道相符。VEGF与鼻咽癌颅内转移已有很多学者对VEGF与鼻咽癌转移及预后的关系 做了大量的临床及基础研究 ［17、18］& ，亦有学者研究了VEGF与脑转移瘤的关系 ［16］& ，认为VEGF的表达水平与鼻咽癌的预后呈负相关，表达水平越高，脑转移的发生率亦越高。
　　血管形成过程中产生的一系列细胞因子，也是肿瘤细胞转移的温床。肿瘤转移最终能否形成，还取决于肿瘤细胞在继发部位是否能获得充足的血供。所以研究肿瘤的血管形成及血管形成与肿瘤转移的系，是预防为主和治疗肿瘤转移的十分有效的途径。&&& 　　参考文献
　　1 李振权，潘启超，陈剑注.鼻咽癌临床与实验研究.广州:广东科学技术出版社，-167.&&& 　　2 Lin JC，Chen KY，Wang WY，et al.Detection ofEpsteinBarrvirus DNA the peripheral-blood cells of patients with nasopharyngeal carciˉnoma:relation to distant metastasis and survival.JClinOncol，）:.&&& 　　3 Lo YM，Chan AT，Chan LY，et al.Molecular prognostication of nasophaˉryngeal carcinoma by quantitative analysis of circulation Epstein-Barr virus DNA.Cancer Res，）:.&&& 　　4 Varisaka N.Wen QH，Yoshizaki T，et al.Association of vascular enˉdotheliagrowth factor expression with angiogenesis and lymph node metastasis in nasopharyngeal carcinoma.laryngoscope，0-814.&&& 　　5 Chong VFH，Fan YF，Khoo JBK.Nasopharyngeal carcinoma with inˉtracranial spread:CT and MR characteristics.J comput Assist Tomegr，.&&& 　　6 Mancuso AA，Bohman L，Hanafee W，puted tomography of the nasopharyhx:Normal and variants of normal.Radiology3.
　　7 Teresi LM，Lu fkin RB，vinuela F，et al.MR imaging of the nasopharynx and floor of the middle cranial fossa PartII Malignant tumors.Radioloˉgy，7.&&& 　　8 Tech TB，Epidermoid carcinoma of the nasopharynx among Chinese:a study of necropsies，J pathology and Bacteriology，.&&& 　　9 中国抗癌协会.新编常见恶性肿瘤诊治规范.北京:北京医科大学.中国协和医科大学合出版社，1999，21.&&& 　　10 Mashimo T，Bemdyopadhyay S，Goodarzi G，et al.Biochem Biophys Res Commun，（2）:370-376.&&& 　　11 肖扬，焦炳华，缪炳华，等.血管内皮细胞生长因子研究进展.生物化学与生物物理进展，）:131-135.&&& 　　12 Ferrara N.Role of vascular endothelial growth factor in the regulation of angiogenes.Kidney Int，）:794-814.&&& 　　13 Rofstad EK.Microenvironment-induced cancer metastasis.IntJ Radiat Biol，）:589-605.&&& 　　14 Rofstad EK，Danielsen T.Hypoxia-induced cancer metastasis of huˉman melanoma cells:involvement of vascular endothelial growth factor-mediated angiogenesis.Br J Cancer，）:.
　　15 钱孝贤.国外医学?免疫学分册，）:192-195.&&& 　　16 姜凯，黄志强.肿瘤血管形成与肿瘤浸润转移的研究进展.肿瘤防治杂志，）:329-331.&&& 　　17 邱彦，芮耀诚，张黎，等.血管内皮生长因子对大鼠脑血管通透性的影响及丹酚酸B对其抑制作用.解放军学报，）:17-18.&& 　　18 蒙翠原，邱前辉，林秋雄.血管内皮生长因子在鼻咽癌中的表达及其意义.广东医学杂志.）:932-933.&&&& 　　（收稿日期:） （编辑元 红）
　　作者单位:1410007长沙湖南中医学院&&&&&&&&&&&& 2410006长沙湖南省肿瘤医院
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请问什么情况下要做免疫组化？
状态：就诊前
希望提供的帮助：
请问胡医生，是不是只有在活检高度怀疑癌的前提下，才会要求做免疫组化？
检查资料：
对的。有时候需要明确诊断，与其他的鉴别
状态：就诊前
有可能免疫组化出来的结果是不患癌吗？
疾病名称：鼻咽癌转移&&
希望得到的帮助：希望有好心的大夫能够给我们提供帮助 ，把病情控制下来
病情描述：2011年鼻炎癌 ，放化疗
2015年11月肺癌
2016年12月
放疗+热疗 +赫斯婷
肺部有结节
目前暂无治疗
疾病名称：鼻咽癌，淋巴恶性肿瘤&&
希望得到的帮助：是否需要手术
病情描述：刚拿到病理报告，想请医生看一下，这属于早中晚哪一期，严不严重，有没有治疗方案可以建议的
疾病名称：头痛去医院检查出鼻癌&&
希望得到的帮助：如果是肿瘤还在那接下来怎么治疗，才做完放疗疗体质还是很弱
病情描述：我爸爸是鼻癌颅骨破坏了还能治愈吗，还有就是他现在才做完最后化疗头又痛了是不是病情没控制住，但是做了检查颅骨还是和以前相仿没变大也没见恢复这样是肿瘤还在吗？
疾病名称：下巴与和脖子连接处起了一个肿块&&
希望得到的帮助：害怕是旧病复发
病情描述：前几天下巴与脖子连接处起了一个肿块，仰头能摸到，但是平常的姿势，在同一位置摸不到，这几天变小了，请问可能是鼻咽癌复发吗
疾病名称：鼻咽癌局部晚期&&
希望得到的帮助：请问现在患者这种情况还有机会吗？已经劝服去医院治疗，肯定比两年前恶化了。这种情况...
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希望得到的帮助：鼻塞严重不通怎么办?
病情描述：鼻咽癌复发放疗后患侧鼻子严重堵塞怎么处理?洗鼻子也洗不通。
疾病名称：颈静球体瘤&&
希望得到的帮助：专家建议先取鼻咽部活检
病情描述：做过颌下囊肿手术己好，现有听力下降，检查出颈静球体瘤，鼻咽部肿瘤待取鼻咽部活检
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希望得到的帮助：请问王教授会不会化疗后中性粒细胞一次比一次低，照这样下去会低到什么程度，我该注意...
病情描述：王教授您好：我是您的病人鼻咽癌肝转移。在您高超的医术下，我的病情明显好转，减轻。现在身体感觉不错，今天（化疗后第七天）去验血中性粒细胞很低只有0.2，（第二次化疗后验血中性粒细胞也很低...
疾病名称：CT考虑左侧鼻咽部占位并颈深部淋巴结转移&&
希望得到的帮助：是否做活检在问诊可以不
病情描述：请问若是来医院是直接做活检还是要做其它的，做活检是门诊还是住院
疾病名称：非角化非分化性鼻咽癌没有鼻血只有偶尔头痛&&
希望得到的帮助：希望不化疗 只吃药治好。
病情描述：一个月前颈部位置肿块，一个月后的昨天到长沙肿瘤医院发现是非角化非分化型鼻咽癌， 没有流鼻血，只有偶尔头痛。
疾病名称：鼻咽未分化非角化癌t4n3m1 ivb期&&
希望得到的帮助：目前患者有颈部疼痛和肺炎(没有咳嗽和痰，想要了解如何减轻症状
病情描述：目前患者有颈部疼痛和肺炎(没有咳嗽和痰)
疾病名称：鼻咽部长了两个肉豆，影响正常呼吸&&
希望得到的帮助：非角化性鳞状鼻咽癌，未见分化。应该如何治疗
病情描述：单侧鼻孔堵塞，呼吸困难，睡觉打呼噜，右耳麻木感
疾病名称：鼻咽部低分化鳞状细胞癌，以扩散至肺部&&
希望得到的帮助：如何控制病情，你们医院现在能立即放疗化疗吗？
病情描述：鼻子里面有异物都塞，鼻涕里夹杂少量鼻血，耳朵听力下降，间断完全听不到，脑袋里面疼，晚上睡不着。
疾病名称：鼻咽部长了两个肉豆，影响正常呼吸&&
希望得到的帮助：求求大夫全力以赴，救救我父亲。西医中医结合治疗
病情描述：鼻塞症状明显，无其他病状。打呼噜严重，又口渴症状
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病情描述：鼻咽癌放疗10年后，现以岀现鼻咽后壁溃疡。
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病情描述：男,31岁。放疗后三个月出现耳鸣的情况。是放疗后的后遗症，还是复发的前兆？
疾病名称：鼻咽癌放疗后。现鼻子打喷嚏会带有鼻血。&&
希望得到的帮助：希望医生帮忙看看检查的报告单
病情描述：2008年放化疗后，今年鼻子打喷嚏会有鼻血，耳朵也会有堵住的感觉。
疾病名称：鼻咽癌放疗后。现鼻子打喷嚏会带有鼻血。&&
希望得到的帮助：检查结果麻烦医生看一下谢谢！
病情描述：2008年得鼻咽癌放疗在一医院放化疗，今年基本每天会打一个喷嚏带有鼻血。耳朵也有堵的感觉。
疾病名称：鼻咽癌放化疗后8年，现鼻血流不止&&
希望得到的帮助：有什么方法止血？
病情描述：岀鼻血不止，血滴下来较多，有时要吐血且多
疾病名称：发现颈部淋巴结肿大5月余，现确诊为鼻咽癌&&
希望得到的帮助：希望能挂上您的门诊，得到您的治疗和指导。
病情描述：5月份发现右侧颈部肿块，10月下旬来贵院经检查确诊为鼻咽癌。
投诉类型：
投诉说明：（200个汉字以内）
胡超苏大夫的信息
肿瘤的放射治疗，头颈部肿瘤尤其是鼻咽癌的综合治疗及靶向治疗
胡超苏，男，教授，主任医师，硕士生导师，博士生导师，参加“八五”攻关课题“鼻咽癌综合治疗最优方案的研...
放疗科可通话专家
副主任医师
天津医科大学肿瘤医院
福建省肿瘤医院
放射治疗科
副主任医师
中山大学肿瘤医院
副主任医师
山东省肿瘤医院
安徽省立医院西区
肿瘤放射治疗中心
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角质素免疫组化染色在鼻咽癌病理组织学分类&及临床中的作用
来源：青年人()&更新时间： 17:48:32 &【字体： 】
探讨角质素免疫组化染色在鼻咽癌（NPC）病理组织学分类中的作用及其在临床放疗中的意义。
1　材料与方法
1.1　材料　　1985年10月～1998年3月，首程放疗的NPC患者122例，男92例，女30例；年龄15～75岁，中位年龄46岁。所有患者放疗前的鼻咽活检标本，制成3μm厚的切片，用SP法进行免疫组化染色。1.2　结果观察及判断　　角质素阳性细胞的标准为：癌巢内肿瘤细胞膜有棕色沉着的细胞。记数标准：阳性程度按细胞着色强度和阳性细胞数综合进行分级：阴性—阳性细胞数为0；＋—细胞着色强度淡（棕色）和阳性细胞数&20％；＋＋—细胞着色强度中等（棕黄色）和阳性细胞数在20％～60％；＋＋＋—细胞着色强度深（棕褐色）和阳性细胞数&60％。1.3　分化表型的确定　　高分子角质素（K17）阳性为向鳞癌分化；低分子角质素（K18）阳性为向腺癌分化；K17和K18均阳性为向腺鳞癌分化；仅全角质素（PK）阳性，K17、K18均阴性，则按光学显微镜观测的病理结果。
2.1　122例NPC光学显微镜和角质素免疫组化染色后的病理组织学类型　　见表1。
表1　122例NPC光学显微镜和角质素免疫组化染色后的病理组织学类型例(％)
光学显微镜
角质素免疫组化染色
低分化鳞癌
泡状核细胞癌
向低分化腺癌分化
向低分化腺鳞癌分化
　　χ2=24.527　P=0.001
2.2　71例NPC免疫组化染色后的病理组织学类型与T、N、M及临床分期的关系　　见表2。
表2　71例NPC免疫组化染色后的病理组织学类型与T、N、M及临床分期的关系例
低分化鳞癌
向低分化腺癌分化
向低分化腺鳞癌分化处理
颈结（－）
颈结（＋）
　　注：除去角质素免疫组化染色后仅PK阳性，K17、K18均阴性，　　按光学显微镜诊断的NPC51例，可分析的NPC病例仅71例
　　放疗前颈结肿大52例，放疗结束时，低分化鳞癌组、向低分化腺癌分化组和向低分化腺鳞癌分化组的颈结残留分别为：13例、5例和7例；颈结全消分别为：17例、8例和3例。χ2=2.664，P=0.264，无统计学差异。
　　鼻咽癌可始于鼻咽被复鳞状上皮的基底细胞，形成小梭形癌细胞，进而鳞化成鳞状细胞；也可始于柱状纤毛上皮的储备细胞，这是一种原始多功能细胞，既可向鳞状细胞分化，也可向柱状细胞分化。电镜下可见鼻咽癌细胞内既有张力原纤维（鳞状上皮成分），又有胞浆泡状系统（柱状上皮成分），说明这种双向分化的细胞在癌变中可能很重要。有作者认为未分化癌具有一定程度的鳞状或腺状分化，电镜下可见双向分化的表现，故应属于分化极差的腺鳞癌。K17能特异性地标记基底细胞，K18能特异性地标记腺上皮，对NPC低分化鳞癌、泡状核细胞癌、向低分化腺癌分化和向低分化腺鳞癌分化的诊断，角质素免疫组化染色结合光学显微镜与单纯光学显微镜的诊断有非常显著性差异，P=0.001。本组向低分化腺癌分化的阳性率为12.3％（15/122），高于以往报道的NPC低分化腺癌的发生率（0.26％～1.32％），此外，还发现NPC向低分化腺鳞癌分化13例（10.7％）。　　71例NPC免疫组化染色后，低分化鳞癌组、向低分化腺癌分化组和向低分化腺鳞癌分化组的T、N及临床分期均无统计学上的差异（P&0.05)，放疗结束时的颈结残留和全消无统计学上的差异（P=0.264)，提示上述三种病理组织学类型的临床生物学行为及放射敏感性可能相似，但例数尚少，需进一步研究。
(韩豫生 校对)
本文课题受海南省自然科学基金资助(89602)韦雄（海南省人民医院放疗科，海口市　570311）唐启信（海南省人民医院放疗科，海口市　570311）蔡白振（海南省人民医院放疗科，海口市　570311）林少民（海南省人民医院放疗科，海口市　570311）王奋（海南省人民医院放疗科，海口市　570311）王岩（海南省人民医院病理科，海口市　570311）
&&&&责任编辑：刘小蜗&
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