百度拇指医生
&&&普通咨询
您的网络环境存在异常，
请输入验证码
验证码输入错误，请重新输入·７８８·
广西医科大学学报
；）０１５Ｏｃｔ３２（５　２
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＡＮＧＸＩＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　　　　
时间分辨荧光法与化学发光微粒子免疫法
检测血清梅毒抗体的应用分析
荣成智　杨冬梅　张小莲　刘旻雁　劳显均　秦　雪△
（）广西医科大学第一附属医院检验科　南宁　５３００２１
摘要　目的：探讨时间分辨荧光法（与化学发光微粒子免疫法（检测血清梅毒抗体的检测效果，评价其在临床梅ＴＲＦＩＡ）ＣＭＩＡ）使用Ｔ阳性标本再分别进行梅毒螺旋体明胶颗粒毒筛查中的应用价值。方法：ＲＦＩＡ对２１９３７例患者血清进行梅毒抗体筛查，　、凝集试验（检测；以Ｔ分析ＴＴＰＰＡ）ＣＭＩＡ和梅毒甲苯胺红不加热试验（ＴＲＵＳＴ）ＰＰＡ为金标准，ＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ的检测结果的阳性符合率。结果：阳性率为２阳性标本经Ｔ阳性ＴＲＦＩＡ共检出４４５例阳性标本，．０３％；ＰＰＡ、ＣＭＩＡ和ＴＲＵＳＴ联合检测，。以Ｔ检出率分别为８与Ｔ均Ｐ＝０１．８０％、８９．２１％、８．７６％，ＲＦＩＡ阳性检出率比较差异均有统计学意义（．００）ＰＰＡ为金标／准，分别将Ｔ分为１～４、其与ＴＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ化学发光信号／临界值化学发光信号（ＳＣＯ）５～９、０３个水平，ＰＰＡ的阳性≥１　符合率分别为２操作更加简便、６．４７％、４６．００％、９１．９６％；６７．０１％、９４．５５％、９９．５９％。结论：ＴＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ相对于ＴＰＰＡ，快捷，结果重复性好；在临床上ＴＲＦＩＡ、ＣＭＩＡ适用于大样本量血清梅毒抗体的筛查。关键词　Ｔ符合率ＲＦＩＡ；ＣＭＩＡ；ＴＰＰＡ；
）中图分类号：Ｒ４４６．１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５９３０Ｘ（２０１５０５０７８８０３－－－
DOI:10.ki.45-1211/r.
呈世界流行性的性传　　梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的，
。显性和隐性梅毒患者均可以成为传染源，播疾病［人感染２］
。因此，可对人体的各个器官造成严重的损伤［梅毒的后，
系统和ＡＮＹＴＥＳＴ时间分辨荧光分析仪；ＣＭＩＡ为美国雅培ＡＲＣＨＩＴＥＣＴｉ２０００ＳＲ全自动化学发光微粒子免疫分析仪－及配套试剂；ＴＲＵＳＴ使用英科新创科技有限公司的试剂盒；ＴＰＰＡ使用富士瑞必欧株式会社的试剂盒。本次实验的所有试剂均在有效期内。
首先使用Ｔ１．３　检测方法：ＲＦＩＡ对２１９３７例临床血清标本　进行梅毒抗体筛查，然后使用ＴＰＰＡ、ＴＲＵＳＴ和ＣＭＩＡ对阳分析各个检测结果值。同时将Ｔ性标本进行复查，ＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ检出的阳性样本根据其化学发光信号／临界值化学发／光信号（分为１～４、分别分析其ＳＣＯ）５～９、０３个水平，≥１　与Ｔ都严格ＰＰＡ检测结果的符合率。本次实验的所有操作，同时保证测试仪器的质控在按照仪器及试剂盒说明书进行，控和设置阴、阳性对照。
结果１．４　结果判断：ＴＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ为全自动上机检测，／为仪器读取。梅毒螺旋体特异性抗体结果ＳＣＯ≥１为阳性（／。Ｔ正常参考值范围：ＳＣＯ＜１）ＰＰＡ与ＴＲＵＳＴ均为肉眼读取结果，结果严格按照说明内规定的方法读取。对于ＴＰ－本次实验规定：重新检查该血清标本，ＰＡ出现弱阳性结果，２次全为阴性时判读为阴性，否则结果判读为阳性。
本次实验通过Ｓ１．５　统计学方法：ＰＳＳ１３．０、Ｅｘｃｅｌ２０１０软件　以ＴＰＰＡ为金标准计算ＴＲＦＩＡ、ＣＭＩＡ的检测结果的阳性符
合率；计数资料比较采用χ或Ｆｉｓｈｅｒ确切概率法检验，Ｐ＜
早期诊断是治疗梅毒的重要环节。在患者身上找到梅毒病原体是确诊梅毒最有力的证据，但由于梅毒螺旋体的自身特尚不能在实验室全面开展病原体性以及实验室的条件限制，
检测。目前，血清学梅毒抗体检测是临床实验室常用的方法，其主要有两类：一类是以血清类脂质抗原测定梅毒非特、异性抗体，例如梅毒甲苯胺红不加热试验（快速血ＴＲＵＳＴ）浆反应素环状卡片试验（等；另一类是以梅毒组份蛋白ＲＰＲ）检测梅毒特异性抗体，如梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（ＴＰ－、梅毒螺旋体抗体微量血凝试验（等。在临床运ＰＡ）ＴＰＨＡ）任何单独一种血清学检测都无法全面地检测梅毒用中发现，
只有几种方法的联合应用，才能有效的提高实验室对抗体，
梅毒的诊断。本实验室开展了以时间分辨荧光法（ＴＲＦＩＡ）与化学发光微粒子免疫法（筛查血清梅毒抗体的检验ＣＭＩＡ）体系。本次实验通过与Ｔ探讨ＴＰＰＡ比较分析，ＲＦＩＡ和现报道如下。ＣＭＩＡ在临床上的适用性，
１　材料与方法
收集２１．１　标本来源：０１４年４～８月广西医科大学第一附属医院住院部和门诊患者血清，总共２１９３７例。经ＴＲＦＩＡ初　收集并保存于－２筛得４４５例阳性血清标本，０℃冰箱。１．２　仪器与试剂：ＴＲＦＩＡ使用的试剂盒由新波生物技术有限公司提供，同时还有其配套的ＥＦＦＣＵＴＡ全自动样本处理
０．０５为差异有统计学意义。
２　结　果
２．１　ＴＰＰＡ、ＣＭＩＡ和ＴＲＵＳＴ对初筛阳性结果的复查分析：共检出４２１９３７例血清标本经ＴＲＦＩＡ筛查，４５例阳性标本，　阳性率为２检测．０３％。ＴＰＰＡ对４４５例阳性标本进行复查，
：Ｅ－ｍａｉｌｉｎｘｕｅ９１９＠１２６．ｃｏｍ△通信作者，ｑ收稿日期：２０１５０６０２－－
荣成智，等．时间分辨荧光法与化学发光微粒子免疫法检测血清梅毒抗体的应用分析出３检出率８６４例阳性标本，１．８０％；ＣＭＩＡ复查阳性为３９７例，检出率８检出率９．２１％；ＴＲＵＳＴ复查阳性为３９例，８．７６％。３种方法的阳性检出率与ＴＲＦＩＡ比较差异均有统）。计学意义（．００Ｐ＝０
／２．２　ＴＲＦＩＡ的ＳＣＯ值的结果区间与ＴＰＰＡ检测结果的阳／将Ｔ性符合率分析：ＲＦＩＡ测得的ＳＣＯ分成１～４、５～９、各组与Ｔ０３组，ＰＰＡ检测结果的阳性符合率分别为≥１　／２６．４７％、４６．００％、９１．９６％。各组阳性符合率两两比较，Ｓ
／差异无统计学意义（ＣＯ１～４与ＳＣＯ５～９比较，　　χ＝
·７８９·
３　讨　论
机体在初次感染梅　　近几年来梅毒的感染率呈上升趋势，
毒后即可进入潜伏期，其临床表现隐匿，容易造成漏诊。早给梅毒的早发现、早诊断、早治疗提期的血清梅毒抗体检测，供了重要的实验室依据。
由ＰＰＡ是在ＴＰＨＡ基础上建立起来的一种检测方法，　　Ｔ
于其敏感性强，特异性高，我国大多数性病实验室用其作为
。但是Ｔ梅毒的确诊试验［ＰＰＡ容易受到主观因素的影响，
；／／／３．２７３，．０７）ＳＣＯ１～４与ＳＣＯ≥１０、ＳＣＯ５～９与Ｐ＝０　　
／ＳＣＯ≥１０比较差异有统计学意义（１２．９４５，χ＝１χ＝
实验结果重复性较差。尤其近年来，本院的梅毒检测量日益增大，仅靠经典法Ｔ不仅不能有效、快速地完成工ＰＰＡ检测，作，还会给临床检验带来了巨大的压力。ＴＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ是近几年来被应用到梅毒抗体检测的新技术，其具有操作简可用于自动上机操作、结果重复性好等特点。这两种方单、
法的应用有助于对临床梅毒大样本量的检测。
激素、多肽、抗体等用镧系金属离子标ＲＦＩＡ是蛋白质、　　Ｔ
并与时间分辨荧光分析仪测定技术结合而建记抗原和抗体，
立起来的一种新型非放射性微量分析技术。本实验采用得到４ＴＲＦＩＡ筛查住院部和门诊患者２１９３７例血清标本，４５　例阳性标本，阳性率为２．０３％。使用ＴＰＰＡ、ＣＭＩＡ和阳性检出率分别为８ＴＲＵＳＴ对阳性标本进行复查，１．８０％、８９．２１％、８．７６％。这３种方法的阳性检出率与ＴＲＦＩＡ比较
差异有统计学意义［（９．１１０，Ｐ＝０．０；ＴＲＦＩＡ与ＴＰＰＡ）＝８χ２２（（０．７３６，．０；４６．５７０，Ｐ＝０ＰＴＲＦＩＡ与ＣＭＩＡ）＝５ＴＲＦＩＡ与ＴＲＵＳＴ）＝７χχ
。Ｔ７８．８４８，．００）ＲＦＩＡ与ＴＰＰＡ总阳性符合率为Ｐ＝０见表１。８１．８％，
／表１　ＴＲＦＩＡ的ＳＣＯ值的结果区间与ＴＰＰＡ检测
结果比较（ｎ）ＴＲＦＩＡ检测
１～４　５～９　０≥１　总计
ＴＰＰＡ检测结果阳性９　２３　３３２　
阴性２５　２７　２９　
总计３４　５０　３６１　
合率（％）２６．４７４６．００９１．９６８１．８０
３６４８１４４５　　　
＊／与ＳＣＯ≥１０比较，．００Ｐ＝０　　注：
／２．３　ＣＭＩＡ复查得到的ＳＣＯ值的结果区间与ＴＰＰＡ检测结果的阳性符合率分析：４４５例初筛阳性标本经ＣＭＩＡ复查，／／ＳＣＯ＜１有４８例，ＳＣＯ≥１有３９７例。在ＣＭＩＡ复查的／检测为阴ＳＣＯ＜１的标本中，ＴＰＰＡ检测为阳性结果３例，／）；性结果４阴性符合率为９在ＣＭ５例，３．７５％（４５４８ＩＡ复查／的Ｓ检测为阴ＣＯ≥１的标本中，ＴＰＰＡ检测为阳性３６１例，／。根据ＣＭ阳性符合率为９性３６例，０．９３％（３６１３９７）ＩＡ复／查为阳性标本的Ｓ各组与ＣＯ分成１～４、５～９、０３组，≥１　ＴＰＰＡ检测结果的阳性符合率分别为６７．０１％、９４．５５％、／／９９．５９％。各组阳性符合率两两比较，ＳＣＯ１～４与ＳＣＯ５　　
／／ＳＣＯ１～４与ＳＣＯ≥１０比较差异有统计学意义（～９、　χ＝２
）；／／１５．０１４，４．６１２，．００ＳＣＯ５～９与ＳＣＯ≥１０比Ｐ＝０　χ＝８２
检验要求，使用Ｆ较不符合χｉｓｈｅｒ确切概率法检验，Ｐ＝
］，可知Ｔ＝０．０ＲＦＩＡ与其他检测方法之间存在差异性。　　根据陈华根
的研究表明，ＴＲＦＩＡ与ＴＰＰＡ之间有较
好的阳性符合率。在本次实验结果中，以ＴＰＰＡ为金标准，／两两比较ＴＲＦＩＡ不同ＳＣＯ值区间的阳性符合率，
／／／／（／／Ｐ（０．０７，Ｐ（ＳＣＯ１～４与ＳＣＯ５～９）＝ＳＣＯ１～４与ＳＣＯ≥１０）和ＰＳＣＯ５～９与ＳＣＯ≥１０）　　　　
／／均为０。表明Ｓ不同ＳＣＯ＜１０时，ＣＯ值区间的阳性符合率差异无统计学意义。由表１结果可知，ＴＲＦＩＡ与ＴＰＰＡ的阳／／性符合率与ＳＣＯ升高趋势是相同的。当ＳＣＯ≥１０时，ＴＲＦＩＡ与ＴＰＰＡ的阳性符合率为９１．９６％。结果表明，ＴＲ－适合于梅毒初筛实验。ＦＩＡ的敏感性高于ＴＰＰＡ，
包ＩＡ是将重组ＴＰ抗原（ＴＰＮ１５、ＴＰＮ１７和ＴＰＮ４７）　　ＣＭ
被微粒子检测样本中梅毒螺旋体的一种新技术。从本次结果来看，以ＴＰＰＡ为金标准，４４５例初筛阳性标本经ＣＭＩＡ／复查后，ＣＭＩＡ的ＳＣＯ＜１时，ＣＭＩＡ与ＴＰＰＡ的阴性符合／；／率为９３．７５％（４５４８）ＣＭＩＡ的ＳＣＯ≥１时，ＣＭＩＡ与ＴＰ－
／。通过χ检验分析ＰＡ的阳性符合率为９０．９３％（３６１３９７）
见表２。０．０２，
／表２　ＣＭＩＡ复查为阳性标本的ＳＣＯ值的结果区间与
ＴＰＰＡ检测结果比较（ｎ）ＣＭＩＡ检测
／ＳＣＯ１～４　５～９　０≥１　总计
ＴＰＰＡ检测结果阳性６５　５２　２４４　
阴性３２　３　１　
总计９７　５５　２４５　
合率（％）
＊６７．０１＊▲９４．５５
可知，总的ＣＭ差异具有统计ＩＡ阳性检出率与ＴＰＰＡ比较，
。可见ＣＭ学意义（．８７３，．０２）ＩＡ的敏感性较Ｐ＝０χ＝９５］
与何惠等［的研究一致。ＴＰＰＡ更高，
／ＣＭＩＡ不同ＳＣＯ值区间　　从表２的分层比较可以看出，
，的阳性符合率比较，差异均有统计学意义（随着．０５）Ｐ＜０／ＣＭＩＡ的ＳＣＯ值的增大，ＣＭＩＡ与ＴＰＰＡ的阳性符合率逐／步升高。ＣＭＩＡ的ＳＣＯ值为５～９时，ＣＭＩＡ与ＴＰＰＡ的阳／性符合率为９阳性符合率为９４．５５％，ＳＣＯ≥１０时，９．５９％，
９９．５９
３６１３６３９７９０．９３　　　
＊／／与Ｓ与ＳＣＯ≥１０比较，Ｐ＝０．００；ＣＯ１～４　　注：　
比较，Ｐ＝０．０２
·７９０·
／接近范婷婷等［报道的Ｓ阳性符合率为１ＣＯ≥９时，００％。
；（）广西医科大学学报　２０１５Ｏｃｔ３２５
／然而，ＣＭＩＡ的ＳＣＯ值为１～４时，ＣＭＩＡ与ＴＰＰＡ阳性符
合率比较低，与张东梅等［的结论一致。其一，可能由于恶
参考文献：
［］Ｓ１ａｒａｌＹ，ＤｉｌｅｋＡＲ，ＤｉｌｅｋＮ，ｅｔａｌ．Ｓｅｒｏｌｏｉｃｄｉａｎｏｓｉｓｏｆ　　　　　　ｇｇ
：［］ｓｈｉｌｉｓｃｏｍａｒｉｓｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉａｎｏｓｔｉｃｍｅｔｈｏｄｓＪ．　　　　ｙｐｐｇ，（）：ＡｃｔａＤｅｒｍａｔｏｖｅｎｅｒｏｌＣｒｏａｔ２０１２，２０２８４８８．　　－［］李　丹，崔　巍，高　伟．血清中梅毒抗体检测的研究２
］（）：进展［内蒙古医学杂志，Ｊ．２０１０，４２３３２１３２４．－［］刘万里，陈志国．３５种梅毒血清学检测方法的临床适用
］（）：性分析［中国性科学，Ｊ．２０１４，１１４６４８．－
［］陈华根．时间分辨荧光免疫技术检测梅毒特异性抗体４
］（）：的应用评价［检验医学与临床，Ｊ．２０１３，１０１５２０２６．［］何　惠，周迎春，刘基铎，等．化学发光免疫测定在梅毒５
］国际检验医学杂志，螺旋体抗体检测中的临床应用［Ｊ．（）：，２０１１，１３１４６９１４７０１４７３．－
［］范婷婷，张　婷，欧阳立杰，等．化学发光微粒子免疫分６
］析法筛查梅毒螺旋体特异性抗体的临床研究［检验Ｊ．（）：医学与临床，２０１４，１０１３１３１３１５．－
［］张东梅，徐韫健，张　婷．化学发光微粒子免疫法和梅７
］毒螺旋体颗粒凝集试验检测梅毒抗体的比较［中国Ｊ．（）：微生态学杂志，２０１３，２５１０１２１２１２１４．－
［］陈忠城，胡　波，李　玛，等．全自动化学发光免疫分析８
］法检测梅毒抗体与Ｔ临床医学工ＰＰＡ的相关性［Ｊ．（）：程，２０１３，１０１２２２１２２３．－
［］潘　顺，唐振华，罗　军，等．９１９９８６例梅毒螺旋体抗体
］（：检测结果分析［国际检验医学杂志，Ｊ．２０１３，２４）３４１０３４１１．－
［］胡风涛，］石成虎．梅毒的检测与诊断［中国医药指南，１０Ｊ．
（）：２０１２，１０１２４７１．
心血管疾病、肝炎、自身免疫性疾病、妊娠等引起性肿瘤、
其二，可能ＴＣＭＩＡ检测的假阳性结果８；ＰＰＡ对Ⅰ期梅毒９］。的敏感性不高造成的漏诊［
ＴＲＵＳＴ检测的是梅毒非特异　　与上述的３种方法比较，
而在性抗体。此类抗体在早期及晚期梅毒患者中浓度偏低，经过治疗后，该抗体浓度在血清中Ⅱ期梅毒中检出率较高；
。因此Ｔ会逐渐的降低［ＲＵＳＴ适用于活动期梅毒治疗疗
效观察、随访以及复查。单独使用于人群梅毒筛查，敏感性和特异性都低。本次４４５例初筛阳性标本，ＴＲＵＳＴ复查的与其他３种方法比较，检验效果偏差。阳性例数仅有３９例，结果稳ＴＲＦＩＡ和ＣＭＩＡ具有自动化程度高、　　综上所述，
定、检测速度快、灵敏度高及更好的客观性等优点。ＴＰＰＡ作为目前临床最为常用的梅毒检测试验，除对Ⅰ期梅毒（初期
，梅毒）敏感性稍低外［对其余各期梅毒敏感性和准确性均
对技术人员要求高，因此难以高。但由于其操作过程繁琐，
满足大量临床梅毒标本的检测。本次实验表明，ＴＲＦＩＡ和／并随着Ｓ其与ＣＭＩＡ均具有较高的灵敏度，ＣＯ值的升高，在临床上ＴＴＰＰＡ的阳性符合率不断的增大。因此，ＲＦＩＡ、特别是两者联合使ＣＭＩＡ适用于大样本量梅毒抗体的筛查，／以Ｔ在Ｓ用时达到的效果会更好。但是，ＰＰＡ为金标准，ＣＯ值为５～９时ＣＭ阳性符合率更高，达到了ＩＡ相对于ＴＲＦＩＡ，／在Ｓ９４．５５％；ＣＯ值为１～４时，ＣＭＩＡ和ＴＲＦＩＡ的阳性符／合率都不理想。因此，在Ｓ应使用ＴＣＯ值偏低的情况下，Ｐ－同时结合临床表现和其他临床指标，才能对患者做ＰＡ复查，出准确的诊断。
；（）广西医科大学学报２０１５Ｏｃｔ３２５
ＩｓｏｔｈｅｒｍａｌＭＴＢＴｅｓｔ对分枝杆菌临床分离株的快速鉴定　　
刘旻雁　陈　晋１　白　冰　苏　敏２　李　山△
（）广西医科大学第一附属医院检验科　南宁　５３００２１
（摘要　目的：探讨Ｉ对分枝杆菌临床分离株的快速鉴定。方法：将９ｓｏｔｈｅｒｍａｌＭＴＢＴｅｓｔＩＳＯ－ＭＴＢ）３例已鉴定的分枝杆菌临　　床分离株纳入Ｉ以罗氏培养为金标准分析其结核分枝杆菌（检测性能，并与结核菌荧光ＰＳＯ－ＭＴＢ检测，ＭＴＢ）ＣＲ检测法相比较；以测序为金标准分析其非结核分枝杆菌（检测性能。结果：除４例样本被测为混合菌株，剩余８ＮＴＭ）９例样本被用于ＩＳＯ－特异性、经配对Ｆ差异无ＭＴＢ性能评价：ＭＴＢ检测的敏感性、ｋａａ值分别为９８．１１％、９７．２２％、０．９５，ｉｓｈｅｒ确切概率法分析，ｐｐ），统计学意义（且与结核菌荧光Ｐ特异性、一．０５ＣＲ检测法结果完全一致；ＮＴＭ中鸟型分枝杆菌复合群检测的敏感性、Ｐ＞０致率均为１快速，对分枝杆菌的检测性能良好，且可提示混合感染，有望成为分枝杆菌鉴定的００．００％。结论：ＩＳＯ－ＭＴＢ简单、临床应用新方法。
１同济大学附属上海市肺科医院检验科　上海　２００４３３
２重庆医科大学教育部临床检验诊断学重点实验室　重庆　４０００１６：Ｅ－ｍａｉｌｌｉｓ８８５８＠１２６．ｃｏｍ△通信作者，收稿日期：２０１５０４１３－－
关键词　结核分枝杆菌；鸟型分枝杆菌复合群；核酸扩增技术；ＩＳＯ－ＭＴＢ
中图分类号：Ｒ４４６　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－）９３０Ｘ（２０１５０５０７９００３－－
DOI:10.ki.45-1211/r.
看过本文章的还看过。。。
·788· 广西医科大学学报;)015oct32(5 2journalofguangximedicaluniversity 时间分辨荧光法与化学发光微粒子免疫法 检测血清梅毒抗体的应用分析荣成智 杨冬梅 张小莲.........
表 l 时间分辨免疫荧光法与化学发光免疫分析法对 40 例血清标本 时间分辨免疫荧光法 阳性 hbsag 定性检测结果比较 化学发光免疫分析法 阳性 34 0 34 阴性 0 ........
·检验技术· 时间分辨荧光免疫法筛查低危人群梅毒...化学发光微粒子免疫分析法 ( chemiluminescent microparticle...梅毒螺旋体抗体筛查结果 15 786 例住院患者血清标本.........
化学发光法和时间分辨荧光法与trust检测结果比较 (1)_临床医学_医药卫生_专业...笔者 以梅 毒螺 旋体颗粒 凝集试验 ( t p p a ) 为 确诊梅毒的 血清 .........
型均相时间分辨荧光免疫分析法用于人血清中三碘甲 ...()酶标记免疫分析法 1 (a; 化学发光免疫分析法(...而利用纳米荧光粒子作为生物荧光探针则能很好的解决.........
目的比较微粒子酶联免疫分析法(meia)与化学发光微粒子免疫法(cmia)检测甲型肝炎病毒(hav)抗体igm。方法对中日友好医院349份门诊或体检患者血清(包括10份含干扰物质.........
时间分辨荧光免疫分析技术_生物学_自然科学_专业资料...电化学发光 ⑤时间分辨荧光 ④化学发光③酶联免疫 ...夹心法示意图固相包被抗体 eu eu 孵育 + 待测.........
应用化学发光免疫分析技术(clia) 各种激素、病毒抗原抗体、肿瘤标志物、感染性疾病、心脏标志物、治疗药物检测 等各种抗原、抗体和半抗原时间分辨荧光免疫测定(trfia).........
电化学发光 (精度:10-17moll ) 时间分辨荧光(...血清蛋白) 各种免疫方法学的比较 放射性免疫分析法(...时间分辨法检测“乙肝五项”的意 义原子标记、灵敏.........
发光免疫分析法荧光免疫分析法 化学发光免疫分析法 ...检测最常遇到的样品为血清,它有很高的荧光 背景。 ...时间分辨荧光法 消除样品背景干扰的另一种方法是时间.........
方法对临床 348 份血清标本、一份 hbsag 高值梯度稀释血清及生物制品检定所标准血清分别用电化学发光 法和时间分辨免疫荧光法分别检测 , 比较两种方法检测结果的.........
i - 2000 system 对我院 4686 例临床标 本进行梅毒螺旋体抗体 - 微粒子化学发光免疫技术 检测, 评价该方法检测临床血清标本梅毒螺旋体抗 体的敏感性和特异性。.........
化学发光、生物发光标记等技术, 其中,时间分辨荧光...应用范围广泛等优点,是一 种新型的免疫标记分析手段...法,先将稀土离子与螯合剂结 合,再与抗原或抗体.........
时间分辨荧光免疫分析法在乙型肝炎病毒表面抗原检测中的应用_生物学_自然科学_...抗体夹心法,具有易操作、重复 性好、试剂稳定等优点;定量分析则有各种化学发光.........
时间分辨荧光免疫分析法 荧光偏振免疫分析法 化学发光免疫分析的临床应用 2 教学目标和要求掌握化学发光免疫分析技术的基本原理、反应的 底物和标记方法以及反应类型。.........
本资料应用时间分辨荧光免疫层析法(倍优)检测中孕期...筛查结果分析 血清法(pe) 高风险阳性(+) 低风险...括时间分辨荧光免疫法、化学发光法、电化学发光法、.........
(精度:10-9 moll ) 化学发光 (精度:10-15moll ) 电化学发光 (精度:10-17moll ) 时间分辨荧光(精度:10-18moll ) 放射性免疫分析法(ria)应用.........
时间分辨荧光免疫技术背景 时间分辨荧光免疫技术应用 ...方面trfia逐渐开始取代ria、酶联免疫分析(eia)法。 ...酶和化学发光物质,标记抗原、抗体、激素、核酸探针等.........
化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝标志物...从方法学角度看,cmia法用顺磁性微 粒作为固相载体,...两对半” 试剂盒 样离心, 分离出血清待测; elisa.........
化学发光免疫分析_生物学_自然科学_专业资料。化学发光...中的应用 无论是化学发光酶免疫测定, 微粒子化学...四、 时间分辨荧光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 (.........
■ 24小时热门信息
电化学发光免疫技术 电化学发光免疫测定法(eclia)发展于 1996年,它在 发光反应中加入了电化学反应,是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫.........
第29 卷 2001 年 1 月 分析化学(fenxi huaxue) 评述与进展 chinese journai of anaiyticai chemistry 第1期 103 ~ 108 电化学发光及其应用徐国宝 董绍俊! (.........
管式与板式化学发光优劣最中肯的比较_临床医学_医药卫生_专业资料。管式与板式化学发光优劣最中肯的比较 管式化学发光 分离手段 标记方法 常用磁珠 吖啶酯类、异鲁.........
229 ? 化学发光 , 只需
01ms 就可发出稳定的光 , 300ms 达到最高峰 , 每秒几十万次的循环电化学发光大 大提高了分析的灵敏度 。 另外 , 通过电极.........
■ 相关热门内容
测试原理 amppd化学发光 包被和分离技 术 分析模式 磁粒子包被,磁性吸 附......
3 美国贝克曼库尔特公司 accessor 全自动微粒子化学发光免疫 分......
access 微粒子化学发光_计算机硬件及网络_it计算机_专业资料 暂无评价|0人阅读|0次下载|举报文档 access 微粒子化学发光_计算机硬件及网络_it计算机_专业资料。.........
方法 利用磁微粒子化学发光法检测血清afp、cea,并进行精密度、灵敏度、特异性......
(夹心法)或下降(竞争法) , 如果不是,须检查是否把定标液位置摆错,或者某一...化学发光常见问题 myoglobin troponin-i 所有感染性疾病项目 对磁性微粒子粘度敏感.........
化学发光法的原理技术要点及评价应用_生物学_自然科学_专业资料。化学发光免疫技术...按分离方法不同分 微粒子化学发光免疫测定 磁颗粒化学发光免疫测定 第一.........
酶联荧光法 微粒子化学发光-amppd标记 鲁米诺异鲁米诺化学发光 微粒子酶免......
直接化学发光的机理 --- 夹心法 磁微粒技术 磁微粒模式图磁性纳米粒子与无机或......
■ 热门推荐梅毒抗体阴性是什么意思
(window.slotbydup=window.slotbydup || []).push({
id: '643393',
container: s,
size: '990,90',
display: 'inlay-fix'
名医在线回答
每周三下午，邀请广州市三甲医院副主任级别以上医师，在线一小时免费解答网友疑问
千万个答案
已解答网友超过1千万个问题，并有多个医生对同个问题进行不同解答，提供多个解决方案梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
专利名称梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
技术领域本发明属于免疫分析医学诊断技术领域，具体地，本发明提供了一种梅毒螺 旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
背景技术梅毒(syphilis )是由梅毒螺旋体(又称苍白螺旋体)引起的常见性传播疾病， 临床表现极为复杂，几乎可侵犯全身的组织和器官，并产生多种多样复杂的临床 症状和体症，早期主要侵犯皮肤粘膜，晚期侵犯内脏器官，严重者可引起严重的 心血管系统和神经系统损害，造成残废甚至危及生命，危害极大。梅毒主要通过 性行为传染给他人，也可通过胎盘传给胎儿，而发生胎传梅毒；极少数患者可以 通过接吻、哺乳、输血、接触有传染性损害病人的日常用品而传染。早期一条毒有 传染性，晚期则无传染性。早期梅毒治疗效果良好，晚期则治疗效果差。近年来 全球梅毒发病率呈逐年上升趋势，据报道全世界每年约有一千二百万例新感染病 例。因此，WHO已将梅毒列为严重危害人类健康的全球性公共卫生问题。在我国， 梅毒疫情报告继20世纪90年代连续6年持续攀升之后，最近3年呈现连年快速 增长趋势一2006年全国梅毒报告数首次超过淋病，总报告数达174506例。为了有 效遏制梅毒的流行，中国的卫生部门已下达指示，各医疗单位必须对结婚、献血、 输血或手术前的人员进行梅毒血清学筛查，对于那些参军、参加招工的人员，以
及从事旅游行业、饮食服务行业的人员及个体摊贩等也必须进行梅毒血清学筛查。 目前，常见的梅毒血清学筛查包括快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、曱 苯胺红不加热血清试验(TRUST )、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA )、梅毒螺旋 体明胶凝集试验(TPPA )、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。其中，RPR和TRUST
法用于检测梅毒螺旋体的非特异性抗体，其灵敏度和特异性较差(具有30%以上 的假阳性和假阴性率)。TPHA的特异性较高，但灵敏度不如ELISA法，且i式剂成 本高，需手动操作，不能实现自动化。TPPA方法是TPHA的升级产品，虽然其特 异性和灵敏度都较高，但所使用的是天然螺旋体抗原，价格昂贵，反应时间长， 试验结果受人为因素干扰较大，不适于大批量的检测。梅毒螺旋体的检测现在大 多使用免疫分析，并且随着对梅毒螺旋体特异性抗体的认识(抗体特异性和变化 规律)的深入，新的检测靶点还会出现，人们正在努力研究梅毒螺旋体特异性蛋 白片段的抗原性差异，以及引发的抗体在梅毒进展各时期的特点。根据目前的研 究，人体中能够涵盖各种类型和疾病发展各时期的特异性抗原片段为(根据分子 量区分)15 (TpN15)、 17 (TpN17)、 33、 37 (TpN37 )、 39、 43、 45 (TmpA)、 47 (TpN47)以及97Kda。而在梅毒血清学检测中最有价值的是15 (TpN15)、 17 (TpN17)、 33、 37 (TpN37)、 39、 43、 45 (TmpA)和47 (TpN47),它们可以 以不同的组合应用于酶免疫分析检测中。实践证明这些重组的抗原具有极好的灵 敏度和特异性。近年来，ELISA被公认为检测梅毒螺旋体抗体的普遍方法。
化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)于1977年问世， 1985年第一代化学发光免疫分析试剂盒研制成功并投放市场。进入九十年代，化 学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进 入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后 发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实 用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免 疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应 的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏度(检测限度可达10_15~ l(r18mol/L)。 化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无 毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。
现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统， 需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临 床诊断和科研工作。本发明的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既可应 用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批 量快检测，使用成本低，更易推广应用。
本发明同时解决了上述问题，即将化学发光技术与梅毒的免疫分析学有效地 结合，同时使用了发光信号强、持续时间长、更高信噪比的自制化学发光底物液， 提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测梅毒螺旋体抗体的试剂盒。本发 明的试剂盒采用的方法比酶免疫分析法灵敏度高，可以缩短检测窗口期，使本试 剂盒适于在产业上有效地推广应用。
本发明的目的是提供一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒。
本发明的再一 目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。
本发明研制的梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)诊断试剂盒(化学发光法)采用的 是双抗原夹心一步法反应模式，采用多种組合的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原 制备固相，特异性的重组蛋白抗原纯度高，无传染性，非特异结合反应小，不需 要特殊实验室就可以大批量生产。
试剂盒的反应原理是在包被微孔中加入酶标记的重组梅毒螺旋体特异性抗 原，然后加入阴、阳性对照或待测血清，通过短时间温育形成固相抗原-抗体-酶标抗原的复合物，温育后洗掉无关的抗体和其他成分后，加入化学发光底物液， 于5 ~ 30分钟内测定其发光强度(RLU),根据临界值判断样本中是否含有梅毒螺 旋体特异性抗体。
根据本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒包括1)梅毒螺 旋体特异性重组蛋白抗原包被的固相载体；2 )梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品； 3)酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；以及4)上述酶所作用的化学发光 底物。
优选地，所述4每毒螺旋体特异性重组蛋白抗原选自包括TpN15、 TpN17、 TpN47、 TpN37和TmpA组中的一种或多种，更优选为TpN15、 TpN17和TpN47 中的一种或多种。
根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管 或磁性颗粒；所述酶为》成性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述化学发光底物为 1, 2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，优选地，所述1，2-二氧乙烷 类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基 -4-(3，，-磷酰氧基)苯基-1, 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。
本发明还提供了 一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤
1) 用高滴度的梅毒螺旋体抗体检测为阳性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阳性 对照品；用梅毒螺旋体抗体检测为阴性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阴性对照品；
2) 用酶标记梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；
3) 用梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被固相载体；
4) 分装上述梅毒螺旋体阴性和阳性对照、酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋 白抗原和该酶所作用的化学发光底物；以及
5) 组装为成品。
优选地，上述方法中所述的包被固相载体的步骤3 )采用以下方法 1 )包被
用0.050M pH值为9.6的碳酸盐緩冲液配制成所需浓度的亲和素包被 液，并将包4皮液负载于固相载体上；
2) 用生理盐水洗涤上述固相载体；以及
用含l。/oBSA, pH值为7.0-7.5,浓度为0.010M的磷酸盐緩沖液作为 封闭液封闭上述洗涂后的固相载体。
具体地，所述包被方法包括可以包括
配制包被液，基于1000mL所述包被液包含1.59g的碳酸钠和2.94g碳 酸氢钠，所述包被液的pH值9.6,然后将制备的包被液与梅毒螺旋体特异性 重组蛋白抗原混合，并将所得混合液负载于固相载体上；
2) 用生理盐水洗涤上述固相栽体；以及
配制封闭液，基于1000mL所述封闭液包含0.2g NaH2P04
2H20、 2.9g NaH2P04
12H20、 10g BSA和lmL生物防腐剂，所述封闭液的pH值为7.0 ~
7.5,然后将所得封闭液负载于上述洗涤后的固相载体上。
优选地，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原选自包括TpN15、 TpN17、 TpN47、 TpN37和TmpA组中的一种或多种；更优选地，所述梅毒螺旋体特异性 重组蛋白抗原为TpN15、 TpN17和TpN47中的一种或多种。
优选地，在上述方法中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁 性颗粒；所述酶为碱性磷酸酶或辣冲艮过氧化物酶。所述化学发光底物为1,2-
二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，优选地所述1，2-二氧乙烷类衍生物 为(金刚烷)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基 -1, 2陽二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。
具体的上述试剂盒可以包括梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品、抗原包被板、 酶标记物与化学发光底物液、20倍浓缩洗涤液等。其中，所述抗原包被板为48或 96孔的微孔板条、酶标记梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原为偶联辣根过氧化物酶、 化学发光底物液为鲁米诺、浓缩洗涤液为Tris-HCl或PBST。
本发明"梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)化学发光免疫分析测定试剂盒"采用的 是双抗原夹心一步法反应模式，采用多种组合的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原 制备固相和酶标记物，既有效地利用了化学发光技术原理，又确保了检测的灵敏 度。它具有简便、快速、灵敏、稳定等优点。该梅毒螺旋体抗体测定试剂盒(化 学发光法)的各项指标均达到或优于酶免疫分析法。并且，本发明的检测系统为 开放式操作，简便快速，不需要昂贵的全自动化学发光测量仪，特别适合广大的 中小医院推广使用，为临床诊断和科研工作提供一种非常有价值的检测手段。
本发明的试剂盒应用的是酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号 代替酶免疫分析中的显色底物，因而具有与酶免疫分析同等的特异性，而灵敏度 大大提高，比现今的酶免疫分析的灵敏度提高约IO倍，可为梅毒的诊断提供更为 特异、快速、可靠的依据。
图1说明了本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒临界值的 确定。
具体实施例方式
实施例1制备本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒 一、 酶标抗原制备
釆用过碘酸钠氧化标记法标记三种梅毒螺旋体特异蛋白15(TpN15)、 17 (TpN17)、 47 (TpN47)与辣根过氧化物酶偶联。加入50%甘油后分装，-20°C 保存。
二、 TP阴性和阳性对照品的制备
阳性对照血清经确切方法确定的高滴度阳性人血清混合成阳性血浆(Positive Pool,血浆份数大于5), 56°C l小时加温灭活后，使用新生牛血清进行适当稀释， 加入生物防腐剂和万分之一 (W/V )的食品红使之成为红色，除菌过滤，2 ~ 8°C 保存。
阴性对照血清选用梅毒抗体检测为阴性的人血清混合(血浆份数大于10) 56°C l小时加温灭活后，除菌过滤，2 8。C保存。
三、 酶标抗原浓度选定
采用方阵法选择三种酶标记物最佳的稀释度都为1: 6000
四、 固相包被板的制备 (1)包被
碳酸钠 1.59g
碳酸氬钠 2.94g
双蒸水 1000mL
溶解混匀后，调整PH至9.6，加入适量梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原15 (TpN15 )、 17 ( TpN17 )、 47 ( TpN47 )混匀，然后加入微孔板各孔中，每孔100 u L， 4°C 24h。
2) 洗涤用生理盐水洗三次。
12H20 2.9g
Proclin300 lmL
双蒸水 定容至lOOOmL
将上述试剂称量好;j文入洁净容器中，加双蒸水定容，溶解混匀，测定pH值为
每孔分别加入封闭液180pL,室温放置2小时。甩掉封闭液，在吸水纸上拍干。 室温除湿干燥24小时。立即进行真空封袋。封袋后放置15分钟检查无漏气，如 果有漏气需重新封袋。贴签后置2 ~ 8'C保存。
五、 酶标抗原稀释液
Tris 12.120g
Proclin lmL
双蒸水 lOOOmL
六、 化学发光底物液
A液:在双蒸水中加入3.29gTris、 3.26g硼砂、1.0gBSA、 1.772g鲁米诺、0.5g 苯并荧蒽、lmLProclin300,用双蒸水定容至1000mL,混合均匀，其pH值为8.2
B液在双蒸水中加入36.72gNa2HP(V12H20、 10.21g柠檬酸、1.0mL30。/o的 H202、 1 mLProclin 300,用水定容至100mL，其pH值为5.0 ~ 5.8。 使用方法使用前将A液与B液按1:1比例混合后使用。
七、20倍洗涤液 Tris
调整pH至7.4
Na2HP04.12H20 NaH2P04.2H20 NaCl Tween-20 Proclin 300
24g 160g 4g
15mL lOOOmL
2g 160g lmlL lmlL
调整pH至7.2 ~ 7.4 八、半成品及成品组成
上述步骤所得产品分装即为半成品。抽出三份经过特异性、精密性、灵敏度 及稳定性检定合格才能组装成梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒。组 装成试剂盒后还需抽冲企合格后才能出厂。
综上，在本发明的研究过程中，本发明的发明人首先对所用的原材料进行了 筛选试验和质量鉴定，包括标记抗原与包被抗原的活性、固相载体(如不透光的 白色微孔板)的吸附性能和变异大小、HRP的活性、化学发光底物的发光强度及 发光持续时间等。然后对包被方法进行了研究，用不同的包被緩冲液和保护液进 行试验，选摔出最适合的包被缓冲液和保护液，通过抗体不同包被浓度试验找到 最佳的浓度条件。对于HRP的标记可以有不同的方法，通过反复探索和对比试验 最终找到了简便、产率高、成本低、质量可靠的标记方法，并对不同的酶稀释液 进行了长期的考察试验，配制出了能够使酶标记物长期保持活性稳定的稀释液。
本发明的发明人还对试剂盒的反应模式和反应条件进行了试验研究，最终确 定了双抗原夹心 一 步法反应模式，并就不同的反应时间对试验结果的影响进行了 试验，确定最适合的反应时间。通过对化学发光底物液发光持续时间的测定及不 同发光时间对测定值的影响试验表明在加入化学发光底物液后5-30分钟之间 进行测量为最佳，其结果也较为准确。
实施例2 ~ 3制备本发明的TP测定试剂盒
除以碱性磷酸酶标记TP特异性重组抗原、以AMPPD作为化学发光底物、以 塑料珠作为载体、包被液的pH值为8.4、封闭液的pH值为7.5外，其余均以 与实施例1相同的方法制备TP测定试剂盒。
实施例4制备本发明的TP测定试剂盒
除以磁性颗粒作为载体外，其余均以与实施例1相同的方法制备TP测定试 剂盒。
实施例5本发明的试剂盒的使用方法
以上实施例1制备的TP测定试剂盒的具体操作如下
1. 自4。C冰箱中取出试剂盒，室温平衡15分钟。
2. 每孔加入4寺测标本50(jL,设阴、阳性对照各两孔，每孔加对照品各50 UL,设空白对照一孔。
3. 每孔加酶标抗原结合物50uL (空白对照孔除外)，充分混匀，封板，置 37。C温育60分钟。
4. 弃孔内液体，用稀释后的洗涤液洗板5次，最后在干净的滤纸上扣干。
5. 每孔加化学发光底物液50juL,必须于加化学发光底物液后的第5~30 分钟内测量各孔的发光强度(RLU),测量时间1秒/孔。
6. 均值各孔的RLU值与CUT OFF比较，样品测定值》2.1 x阴性对照，则 判断为阳性，否则为阴性。
实施例6本发明的试剂盒的方法学鉴定
按照本领域中常规的制造及检定规程对实施例1中制备的试剂盒进行鉴定， 见下表1:
&table&complex table see original document page 15&/column&&/row&&table&
说明"梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒"的准确性、精密性、 稳定性是完全合格的。
实施例7正常人的梅毒螺旋体抗体含量及临界值的确定
使用实施例1 ~4中制备的M每毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒" 检测梅毒螺旋体抗体国家参考品中全部的阴性样品和400例健康人血清，求得出 健康人测定值的平均值和标准偏差，计算出上述样本发光值的平均值加上6倍的 标准偏差作为临界发光计数，考虑到每次试验的变动，我们建议采用根据前述确 定的临界发光计数除以阴性对照平均发光值的比值作为倍数，临界值定为此倍数 乘以阴性对照发光值的平均值，根据大样本试验的结果我们确定此基数为2.1,即 CUT OFF = 2.1 x阴性对照发光值的平均值。
实施例8本发明的TP测定试剂盒的临床应用与TPHA试剂盒比较
中国人民解放军总医院基础医学研究所(301医院)使用实施例1的TP测定 试剂盒和英国OMEGA诊断公司的梅毒螺旋体血清血凝试验TPHA试剂检测477 份临床血清样本进行比较，考核本发明的"梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)诊断试剂盒 (化学发光法)"的灵敏度与特异性。
一、临床血清标本的来源
经临床确诊的梅毒病人血清共139例(其中一期梅毒病人血清43例，二期梅 毒病人血清96例)；经确诊的抗核抗体滴度大于1: 160的红斑狼疮病人血清84 例，慢性迁延性肝炎病人血清23例，类风湿关节炎病人血清31例。正常人血清 200例。
注43例一期梅毒患者均于3 ~ 4周前有过不洁接触史，临床均有典型硬下疳皮损， 其中35例经TPHA和本发明化学发光检测均为阳性，另8例均显阴性，但在治疗 后随访过程中血清TPHA出现阳性。
二、试验结果
本发明试剂盒与TPHA检测梅毒及其他疾病及正常人群血清结果比较如表2所
&table&table see original document page 17&/column&&/row&&table&
试验结果表明本发明的"梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒" 对检测梅毒病人血清抗体总的灵敏度为90.65%,高于TPHA88.49。/。的总体检测灵 敏度，这主要是由于"梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒"对于一期 梅毒阳性率69.77%高于TPHA试剂(62.79%)，即阳性检出率优于梅毒病人血 清检测的TPHA检测，可以用于临床梅毒病人的血清学检查。
实施例9本发明的TP测定试剂盒的临床应用与ELISA试剂盒比较 首都医科大学附属北京友谊医院用本发明的测定试剂盒和北京万泰生物药业 有限公司生产的梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试剂盒检测335份临床血清样本进 行比较，对本发明试剂盒进行临床检测评估。
一、临床血清标本的来源
北京友谊医院性病门诊已确诊阳性样本155份，其中早期潜伏梅毒血清10份， 一期梅毒血清42份，二期梅毒血清103份。体检正常人血清180份。
二、试验结果
本发明试剂盒与ELISA检测梅毒及其他疾病及正常人群血清结果比较如表3 所示
&table&table see original document page 18&/column&&/row&&table&
经检测155份梅毒患者血清，本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测 定试剂盒的灵敏度(99.35%)比梅毒螺旋体抗体酶免(Anti-TP-ELISA)检测试剂 盒(98.71%)稍好。用两种检测系统对180份正常人血清检测无一例阳性结果， 特异性达100%;由此可见，梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒可以应 用于临床。
1、一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括1)梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被的固相载体；2)梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品；3)酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；以及4)上述酶所作用的化学发光底物。
2、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重組蛋 白抗原选自包括TpN15、 TpN17、 TpN47、 TpN37和TmpA组中的一种或多种。
3、 如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重 组蛋白抗原为TpN15、 TpN17和TpN47中的一种或多种。
4、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为微孔板、塑 料珠、塑料管或磁性颗粒。
5、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶或 辣根过氧化物酶。
6、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为1,2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。
7、 如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述1,2-二氧乙烷类衍 生物为(金刚烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基) 苯基-1， 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。
8、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物包括 A液和B液，其中，基于1000mL所述化学发光底物A液，包括3.29g Tris、 3.26g硼砂、l.Og BSA、 1.772g鲁米诺、0.5g苯并荧蒽、lmL Proclin 300,其pH值为8.2-8.8; 基于lOOmL所述化学发光底物B液，包括36.72g Na2HP04.12H20、 10.21g柠檬酸、1.0mL30。/。的H202、 1 mL Proclin 300，其pH值为5.0 - 5.8。
9、 一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤1 )用高滴度的梅毒螺旋体抗体检测为阳性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阳性 对照品，用梅毒螺旋体抗体检测为阴性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阴性对照品；2) 用酶标记梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；3) 用梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被固相载体；4) 分装上述梅毒螺旋体阴性和阳性对照品、酶标记的;f条毒螺旋体特异性重组 蛋白抗原和该酶所作用的化学发光底物；以及5) 组装为成品。
10、 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述包被固相载体的步骤 3 )釆用以下方法1) 包被用0.050M pH值为9.6的碳酸盐緩冲液配制成所需浓度的亲和素包被 液，并将包被液负载于固相载体上；2) 用生理盐水洗涤上述固相载体；以及3) 封闭用含P/oBSA， pH值为7.0-7.5,浓度为0.010M的磷酸盐緩冲液作为 封闭液封闭上述洗涤后的固相载体。
11、 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋 白抗原选自包括TpN15、 TpN17、 TpN47、 TpN37和TmpA组中的一种或多种。
12、 如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋 白抗原为TpN15、 TpN17和TpN47中的一种或多种。
13、 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述固相载体为微孔板、 塑料珠、塑料管或磁性颗粒。
14、 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过 氧化物酶。
15、 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物为1，2-二氧 乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。
16、 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述1,2-二氧乙烷类衍生物为(金 刚烷)-l ,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)墨4陽曱氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-1, 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。
本发明公开了一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，属于免疫分析医学诊断技术领域。所述试剂盒包括1)梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被的载体；2)梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品；3)酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；以及4)上述酶所作用的化学发光底物。进一步，根据本发明制备上述试剂盒的方法包括以下步骤1)配制TP抗体阴性和阳性对照品；2)以酶标TP特异性重组蛋白抗原；3)包被载体；4)分装；以及5)组装为成品。利用该试剂盒进行检测梅毒螺旋体抗体具有操作简便，快速，易推广，灵敏度高，特异性强，重复性好，安全无毒无污染等优点。
文档编号G01N33/571GKSQ
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者应希堂, 黎 张, 胡国茂, 詹先发 申请人:北京科美东雅生物技术有限公司