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根据实验室应用需求选择合适的色谱柱-协助实验室 提高分析效率-Waters
11/19/2014根据实验室应用需求选择合适的色谱柱 协助提高实验室分析效率沃特世化学消耗品部 庄淑萁 shu_qi_?2014 Waters Corporation1问题：分离度？ C 保留？ C 方法的耐受性？ C 拖尾因子？ C 分析时间？C液相色谱分析中您最关心的参数是什么？?2014 Waters Corporation2111/19/2014AgendaC C C了解反相色谱柱特性及原理填料的性质 硅醇基活性的影响 PH范围C C C如何根据应用需求选择合适的色谱柱宽PH值C18柱在药物分析中的优势 极性化合物，难保留 碱性化合物，峰形不佳USP&621&新视野C C新变化对实验室的影响 CORTECS和XP协助提高实验室效率总结?2014 Waters Corporation 3色谱柱颗粒发展历程原始硅胶颗粒? ?超纯硅胶颗粒? 90年代开始 ?杂化颗粒（1999年）拓宽 PH使用范围 方便方法开发 ? 化学和物理稳定性好? ?金属杂质含量高 碱性化合物拖尾严重低金属杂质含量 ? 获得对称峰形实心核颗粒提高HPLC/UHPLC使用效率 提高速度和杂志分析中分离度 UPLC和HPLC平台颗粒表面带电杂化颗粒 （2010年）低离子强度下，碱性化合物峰形 宽PH范围，支持方法开发 载量高，相对物质分析亚2微米杂化颗粒（2004年）UPLC 技术诞生 速度，灵敏度，分离度 三者兼得 拓展化学键合相* Waters?2014 Waters Corporation为例4211/19/2014传统硅胶填料（A型填料）的生产过程 Na2SiO3 (矿物) + 2H+ Si(OH)4 (原硅酸)+ 2Na+硅胶颗粒 (含金属杂质!)C18/C8 键合 + 封尾 C18/C8 反相填料(最终仍带金属杂质!)?2014 Waters Corporation5传统硅胶柱的弊端 传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐(如泡花碱),具有以下弊端:Hinokitiol低金属杂质O O Si O M n+ O Si心 得 安 和 对 羟 基 苯 萘 甲 酸 丁 酯流动相 pH 7 铝杂质含量~375 ppm二氢苊高金属杂质含量2 4 6 8 MinutesTf USP = 6.5阿米替林35流动相:20 mM Phosphate Buffer pH 3.6 (含 0.05% EDTA): Acetonitrile (50:50)?2014 Waters Corporation51525Minutes45传统型C18硅胶柱上金属杂质对 碱性化合物峰形的影响6311/19/2014超纯硅胶颗粒Symmetry?系列无金属杂质的超纯起始原料Polyethoxysiloxane (PEOS)Tetraethoxysilane (TEOS)?2014 Waters Corporation7硅胶颗粒的表面处理 --键合和端基封尾 --键合和端基封尾1) C18-bonding 2) TMS-endcap并不是所有的 硅羟基发生反应?2014 Waters Corporation记住: 即使在高键合密度下仍有接近~50% 表面硅醇基残留8411/19/2014为什么会看到不理想的峰形？ --硅羟基的离子化硅醇基的活性影响一支色谱柱的选择的性！ 硅醇基的活性影响一支色谱柱的选择的性！表面硅羟基的电荷随流动相PH 发生变化OH Si (pH 3)O Si (pH 7) H+表现为阳离子交换结果: 碱性化合物(正电荷)与离子化的硅醇基表面发生强相互作用?2014 Waters Corporation 9离子模式保留Hydrophobic Interaction with Bonded PhaseO-Si O-Si OH O-Si O-Si OH O-Si OH O-Si O-Si O-Si OH O-Si O-SiIon exchange Interaction with Charged SitesO-Si O-Si OO-Si O-Si + O- (CH ) HN 32 O-Si OO-Si O-Si O-Si OO--Si O-SiMobile Phase pH & 3+ HN (CH3 )2Si - OHMobile Phase pH & 3Si C O-BaseBase?2014 Waters Corporation10511/19/2014超纯硅胶Symmetry C18柱与传统矿物硅胶 C18柱对碱性化合物峰形对比?流动相条件: 20 mM KH PO /H PO （pH7.0) : ACN(35:65 v/v)2 4 3 4*柱： 对碱性药物阿米替林峰形良好Symmetry? C18硅胶表面具金属活性的传统C18柱： 碱性药物阿米替林峰形严重拖尾*0 10 20 30 40分钟11?2014 Waters Corporation第一代超纯硅胶Symmetry C18柱与传统矿物 硅胶C18柱对碱性化合物峰形对比??2014 Waters Corporation12611/19/2014Waters Shield技术： 带有内嵌极性配体的反相色谱O Si CH3 CH3Polar Group内嵌极性基团配体－ Shield RP8O Si CH3 CH3传统直链烷基配体－ C8a改善碱性物质的色谱峰形 a选择性改变?2014 Waters Corporation13Shield RP18/RP8的可能作用机理H3C N+H CH3水 “屏蔽”层水层”屏蔽 了带负电的 硅羟基“?2014 Waters Corporation改善了反相硅胶表面与水的浸润性－100%水相流动相兼容 降低了碱性化合物的保留 降低了拖尾现象14711/19/2014不同的选择性比较XBridge Shield RP18 vs XBridge C18-宽pH范围、高耐受性、不同选择性：特别适用于方法开发 - XBridge RP18可适用于高水相应用 - XBridge RP18对于中等pH条件磷酸盐体系耐受性与峰形佳(pH 2-11)(pH 1-12)?2014 Waters Corporation15硅胶材料的pH使用极限Hydrolysis of Bonded Ligand1Dissolution of Silica Particle0.1 0 2 4 6pH8101214?2014 Waters Corporation16811/19/2014硅胶表面键合相的水解Monofunctional LigandO Si O OOHH3 C Si ClC C CH3C CC CC CH3+H 3CC Si C CH3C CC CC CH3O Si O OO+ HClLow pH (hydrolysis of ligand)H3COHO Si O OC Si C CH3C CC CC CH3+HONote: Sometimes called “Column Bleed”?2014 Waters Corporation 17How Silica is Attacked at High pHNucleophilic attack?硅胶完全溶解 ? 色谱柱的灾难 ? 短的柱寿命?2014 Waters Corporation18911/19/2014Agenda了解反相色谱柱特性及原理C C C填料的性质 硅醇基活性的影响 PH范围C C C如何根据应用需求选择合适的色谱柱宽PH值C18柱在药物分析中的优势 极性化合物，难保留 碱性化合物，峰形不佳USP&621&新视野C C新变化对实验室的影响 CORTECS和XP协助提高实验室效率总结?2014 Waters Corporation 19PH值在方法开发时的影响-必考察项40AmitriptylinepH 230kRetention Map k versus pH 1001Minutes23Nortriptyline AmitriptylinepH 8pH control critical2081001Minutes23NortriptylineAmitriptyline20 0 1 2 3 4 5 6 pH 7 8Nortriptyline0 1 2pH 1012Minutes 391011Silica-based materials dissolve at high pH?2014 Waters Corporation201011/19/2014第二代杂化颗粒BEH的合成（2004）美国专利号 6,686,035 B2Anal. Chem. 81-6788硅胶基体中插入的桥式乙基Bridged Ethyl Hybrid (BEH)EtO CH2 CH2 OEt O Si Si O Si EtOOOEt Si O Et OO Si OEt O4O EtEtO Si OEtSiEtO EtO+EtO OEt CH2 EtO Si Si OEt CH2 EtO OEtOEtnPolyethoxysilane (BPEOS)?2014 Waters CorporationTetraethoxysilane Bis(triethoxysilyl)ethane (TEOS) (BTEE)21BEH 第二代杂化颗粒为什么具有超强高pH 耐受性？硅胶颗粒OHOH-仅需打断四个硅氧键即可腐蚀一个硅单位 表面腐蚀所产生的硅酸离子在流动相中溶解度大, 使硅胶 基体溶解的反应向右移动, 从而加快了溶解速度 ? pH &7时上述腐蚀过程容易发生? ??2014 Waters Corporation须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位(该过 程极难发生) ? 填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低, 因此 容易累积在填料微孔表面, 有时可能会重新连接回颗粒表面, 形成所 谓的‘自我修复’机制。因此, 大大延缓了表面腐蚀的速度。?221111/19/2014高pH条件下，化学稳定性 [来自填料颗粒技术：BEH杂化]注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，并不代表所有应用情况（法律申明）?2014 Waters Corporation 23低pH条件下，化学稳定性 [来自键合相技术：C18三键键合法]%变 改 的 间90 时 留 保 始80 起70100XBridgeTM C18.Zorbax? SB-C18 SunFire? C18 Inertsil? ODS-3 Luna C18(2) ACT Ace C186050 0 50 100在 1% TFA 的水溶液 (pH 1.0, 80℃)的小时数 测试样品：对羟基苯甲酸甲酯注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，并不代表所有应用情况（法律申明）24?2014 Waters Corporation1211/19/2014pH对保留的影响: 反相保留图40 35 Retention Factor (k) 30 25 20 15 10 5 0 0酸性和碱性化合物在其未电离状态下时反相保留最大 中性化合物的保留不受pH影响酸性中性化合物[HA]酸性保留增强碱性2 4 6 pH碱性保留增强[B]81012Silica pH Range Hybrid Particle pH Range Neue et. al. American Laboratory -39.?2014 Waters Corporation 25调节pH使分离最大化100Acid [HA]10 ( Log k)Base 2 [B2] Base 1 [B1] Neutral1Bases 1+2 [BH1+, BH2+]0.1 0 2 4 6 pH 8 10 12Acid [A-]14N B1, B2 AN A B1 B2pH 2pH 10By varying pH, bases are now separated C pH is a powerful tool in methods development for selectivity ?2014 Waters Corporation261311/19/2014碱性药物林可霉素： pH探索性实验结果一览峰形差 柱超载 低保留C 分析物已完全离子化 对杂质的分离效果很差pH 2峰形有所改善 保留较好C 50% 离子化状态 仍存在杂质分离不完全的问题 最佳峰形 最佳保留C分析物呈完全电中性状态 最佳分离pH 7pH 12?2014 Waters CorporationJenkins, Diehl 27药典方法――中-高pH条件趋势药物名称 奥美拉唑镁肠溶片 奥美拉唑钠肠溶片 盐酸克林霉素氯化钠注射液 盐酸雷尼替丁氯化钠注射液 富马酸阿奇霉素片 氟诺昔康 盐酸利多卡因凝胶 米力农 罗红霉素1. 2.现代色谱柱填料技术的发展，已大大提高硅胶填料的化学耐受性，从而允许使用更高 pH条件，获得更好的分离效果； 从理论上来说，低pH条件下，碱性药物的胺基结构完全电离化，C18无法辨识与胺基结 构变化相关的杂质；随着pH条件的提高，保留与分离会大大增强。28检测项目 含量测定 含量测定 有关物质，含量 有关物质，含量 含量 含量 含量 有关物质 含量pH条件pH7.6 pH7.6 pH7.5 pH7.1 pH8.2 pH7.3 pH8 pH7.5 pH6.5?2014 Waters Corporation1411/19/2014伊曲康――离子对试剂真的必要吗？?2014 Waters Corporation29实际样品： 实验：pH 10 vs. pH 3Sam_2mg/ml与BLK (空白)重叠色谱图?2014 Waters Corporation 301511/19/2014要获得好的重现性 pH条件：偏离分析物pKa值±2100Acid [HA]( Log k) 10Base 2 [B2] Base 1 [B1] Neutral-2 +2 +21-2Bases 1+2 [BH1+, BH2+]0.1 0 2 4 6 pH 8 10Acid [A-]1214进入保留曲线平台区，保留的重现性得以增强（即使pH改变较大 C 保留时间改变仍较小）在分析物pKa ±2以外的pH范围内， 方法重现性/耐受性较好?2014 Waters Corporation 31XBridge C18用于诺氟沙星质检 用户体验2010药典方法要求：C18柱，25mM磷酸盐溶液（ 腈流动相体系。三乙胺调节至pH3)―乙以往存在问题：色谱柱寿命有限，&500针即呈现峰严重拖尾（但使用中性 标样进行柱效检测时峰形正常） 使用XBridge C18后的体验：7个月，累计进样600针，峰形与分离度的表 现仍然良好如初，用户满意！?2014 Waters Corporation321611/19/2014不同的选择性比较XBridge Shield RP18 vs XBridge C18-宽pH范围、高耐受性、不同选择性：特别适用于方法开发 - XBridge RP18可适用于高水相应用 - XBridge RP18对于中等pH条件磷酸盐体系耐受性与峰形佳(pH 2-11)(pH 1-12)?2014 Waters Corporation33XBridge Shield RP18最适于阿奇霉素分析国家食品药品监督管理局关于修订阿奇霉素氯化 钠注射液和阿奇霉素葡萄糖注射液药品标准有关 事宜的公告 照高效液相色谱法（中国药典2005年版 二部附录V D）测定，采用硅胶表面经杂 化处理的十八烷基键合硅胶色谱柱如 Xbridge Shield RP18（规格： 250×4.6mm，5цm）或与之相当的色 谱柱，柱温30℃；以乙腈-磷酸盐缓冲液 （取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20% 磷酸调节pH值至8.2）（58：42）为流动 相；流速为每分钟1.0ml；检测波长为 210nm。?2014 Waters Corporation 341711/19/2014两性霉素，有关物质分离难题杂质A (两性霉素A，Amphotericin A)和制霉菌素(Nystatin)出峰时间基本相同?2014 Waters Corporation35BEH RP18: 两性霉素，有关物质分离杂质A (两性霉素A，Amphotericin A)和制霉菌素(Nystatin)的分离度可达 到1.5303nm?2014 Waters Corporation361811/19/2014Agenda了解反相色谱柱特性及原理C C C填料的性质 硅醇基活性的影响 PH范围C C C如何根据应用需求选择合适的色谱柱宽PH值C18柱在药物分析中的优势 极性化合物，难保留 碱性化合物，峰形不佳USP总论&621&新视野C C新变化对实验室的影响 CORTECS和XP协助提高实验室效率总结?2014 Waters Corporation 37反相色谱填料的内孔表面流动相色谱填料是多孔颗粒（ 色谱填料是多孔颗粒（“海绵” 海绵” ），99％发生色谱分离的表面是 在内孔表面必须允许流动相进入内孔以 保证待分析和分离的化合物 能够和色谱填料有保留 如果内孔“ 如果内孔“干涸” 干涸”，则样品不能够 进入色谱填料的内孔表面， ，则该化 进入色谱填料的内孔表面 合物将不能在色谱柱上保留。 合物将不能在色谱柱上保留。Analyte反相色谱填料内孔表面“干涸”将大大影响到色谱分离?2014 Waters Corporation 381911/19/2014亲水性化合物保留专用柱: XSelect /Atlantis? HSS T3在增强极性化合物保留能力的同时，维持了 对中等和强疏水化合物的适度保留能力 LC-MS兼容 耐受100%水相流动相 分离重现性好 是采用三官能团键合技术，低配基密度 2 ? 烷基链键合和专利的 封端技术 是 公司最先进的键合和封 端技术的有力体现 对 色谱柱的稳定 性进行了更好的提升T3 (~1.6 mol/m ) C18 , WT3 dC18?2014 Waters Corporation39同时测定水溶性和脂溶性维生素极性保留增强 强疏水性保留减弱?2014 Waters Corporation402011/19/2014反相条件下增强极性保留，峰形普遍良好尿嘧啶(Uracil) 是测试反相柱最广泛采用的死体积标记物, 但在Atlantis T3柱上有显著保留ConditionsColumn: Atlantis? T3 4.6 x 100 mm, 3?m Mobile Phase A: 10 mM , pH 5.0 Mobile Phase B: Flow Rate: 1.0 mL/min Gradient: Time Profile (min) %A %B 0.0 100 0 10.0 94 6 15.0 94 6 Injection Volume: 10.0 ?L Sample Concentration: 400 ?g/mL total Sample Diluent: water Temperature: 30 C Detection: UV @ 254 nm Sampling Rate: 5 pts/sec Instrument: Waters Alliance?
PDA乙腈 乙酸铵°Compounds: 1. Cytosine 2. 5-Fluorocytosine 53. Uracil 4. 5-Fluorouracil 55. Guanine 6. Thymine 7. Adenine胞核嘧啶 氟胞核嘧啶 尿嘧啶 氟尿嘧啶 鸟嘌呤 胸腺嘧啶 对嘌呤碱表现良好峰形 腺嘌呤74 1V0 = 1.83 min5 2631.002.003.004.005.00 Minutes6.007.008.009.0010.00?2014 Waters Corporation41保留和分离9种有机酸?2014 Waters Corporation422111/19/2014色谱保留模式ESI-MS ResponseexcellentHILIC Reversed-phaseNormal-phasepoorpolar Compound Indexnon-polar?2014 Waters Corporation43HILIC模式的保留机理综合了液液分配、离子交 换和氢键作用 ? 极性分子首先在主体流 动相与色谱填料表面的半 固定的高极性水膜之间发 生液液分配 ? 次级保留作用包括色谱 填料表面硅醇基和/或极性 官能团与带电分析物发生 的氢键作用 ?离子交换作用发生在带正 电荷的分析物与带正负电 的填料表面硅醇基之间D.V. McCalley, U. D. Neue, J. Chromatogr. A ) 225-229 E.S. Grumbach, D.M. Diehl, U.D. Neue, J. Sep. Sci. 31 (2008),
A. Méndez, E. Bosch, M. Rosés, U. D. Neue, J. Chromatogr. A 986 (2003), 33-44?2014 Waters Corporation 442211/19/2014沃特世HILIC 模式色谱柱类型ACQUITY UPLC? BEH Amide XBridgeTM Amide (pH 2-11) ACQUITY UPLC? BEH HILIC XBridgeTM HILIC (pH 1-9)Atlantis? HILIC Silica (pH 1-5)CORTECS? HILIC Silica (pH 1-5)?2014 Waters Corporation45Additives vs. Buffered Mobile Phases4 1,2 3 0.2% ammonium hydroxide pH 9pH 9 ObservationsAcids are unretained without a buffered mobile phase Selectivity shifts for basic compounds34 120 mM ammonium acetate pH 9 20.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.00Minutes1 30.2% formic acid pH 31. 2. 3. 4. Methacrylic acid Nicotinic acid Nortriptyline CytosinepH 3 ObservationsPoor peak shape and retention for bases without a buffered mobile phase Selectivity shifts for acidic compounds243 1 4 20.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.6020 mM ammonium formate pH 31.802.002.202.402.602.803.00All contain 90:10 MeCN:H2O46Minutes?2014 Waters Corporation2311/19/2014Agenda了解反相色谱柱特性及原理C C C填料的性质 硅醇基活性的影响 PH范围C C C如何根据应用需求选择合适的色谱柱宽PH值C18柱在药物分析中的优势 极性化合物，难保留 碱性化合物，峰形不佳USP总论&621&新视野C C新变化对实验室的影响 CORTECS和XP协助提高实验室效率总结?2014 Waters Corporation 47Ever-Growing Selectivity Range Charged Surface Hybrid [CSH] ParticlesStep 1 Step 2 Step 3CHARGED SURFACE HYBRID PROCESS?2014 Waters Corporation 482411/19/2014对碱性分析物有卓越的峰形与载量 尤其适合LCMS流动相条件0.10 0.080.06 AU0.04嗪 咪 丙0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 Minutes林 替 米 阿ACQUITY CSH C18 1.7 ?m 0.1 % formic acid 2.0 % Amitriptyline1.0 % 0.5 % 0.1 %0.020.00 0.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.000.100.08Superficially Porous C18 1.7 ?m 0.1 % formic acid0.06 AU0.040.02嗪 咪 丙0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 Minutes 1.202.0 % 1.0 % 0.5 %林 替 米 阿0.1 %1.60 1.80 2.00丙咪嗪浓度保持恒定为0.5 mg/mL; 0.1%观察 CSH技术对碱性物 质有卓越的峰形，特 别是使用兼容LCMS 检测的流动相条件 时。 特别有利于对低含量 物质的检测，有好的 峰形、分离度与灵敏 度 度。0.00 0.00 1.40使用利于LCMS分析的 甲酸流动相条件49?2014 Waters CorporationInfluence of Sample Loading on Trace Impurity Detection in UVImipramine0.015 AUAACQUITY UPLC? CSH C18 0.1% impurity 0.1% formic acid0.000BImipramine0.015 AU0.1% impurityCore-Shell C18 0.1% formic acid0.0000.015 AUImipramineC0.000 0.00 0.60 1.20 Minutes0.1% impurityCore-Shell C18 0.05% TFA1.802.403.00?2014 Waters Corporation502511/19/2014Influence of Sample Loading on Trace Impurity Detection with MSTotal Ion ChromatogramIn tensityImipramine8x108ACQUITY UPLC? CSH C18 0.1% impurity (m/z 278.3) 0.1% formic acid4x10800.601.20 Minutes1.802.403.008x108Core-Shell C18 Imipramine Total Ion Chromatogram 0.05% TFAIntensityUV Trace4x1080.1% impurity00.601.20 Minutes1.802.403.00?2014 Waters Corporation51AgendaC C C了解反相色谱柱特性及原理填料的性质 硅醇基活性的影响 PH范围C C C如何根据应用需求选择合适的色谱柱宽PH值C18柱在药物分析中的优势 极性化合物，难保留 碱性化合物，峰形不佳C CUSP总论&621&新视野新变化对实验室的影响 CORTECS和XP协助提高实验室效率总结?2014 Waters Corporation 522611/19/2014USP 视点 加速 UPLC 在制药 QC领域的接受度?2014 Waters Corporation53为什么要改变? 为什么要改变 ?Waters公司引入UPLC 10年来，它已经成为色谱分离的金标准，用户获得 更好的分析数据质量同时缩短了运行时间、节省了成本，Waters 公司凭 借领先的技术优势雄踞UPLC市场霸主地位。 (SDI Report，Waters still owns lionshare of the UPLC Market) 一方面常规HPLC系统的技术、市场愈发成熟， 尚可基本满足一般性的分 离需求；另一方面越来越多的组织和机构意识到UPLC所带来的商业与科学 上的优势，技术的转型升级引发思考： 如何在现今的商业环境及行业趋势 下，最大化现有HPLC设备的效率，同时确保向UPLC技术的顺利过渡升级？?2014 Waters Corporation542711/19/2014改变了什么? 改变了什么 ?USP 37-NF 32 through First Supplement August 1, 2014VariableUSP 37-NF 32Through first supplement粒径 柱长 流速 色谱柱 ID 进样体积 柱温 流动相pH?2014 Waters CorporationIsocraticL/dP Ratio Constant range -25 to + 50%GradientNo changes allowed No changes allowedF2-F1 x[(dc22 x dp1)/dC12 x dp2)] and Not applicable ±50% Any allowed if linear velocity is No changes allowed constant Can be adjusted as consistent with precision and detection limits Can be adjusted as consistent with precision and detection limits ±10% ±0.2 unit±10% ±0.2 unit55从5um 缩放至 1.7um?2014 Waters Corporation562811/19/2014如何最大程度的利用既有HPLC系统， 系统， 同时确保向UPLC技术的顺利过渡升级？ 技术的顺利过渡升级？?2014 Waters Corporation57CORTECS 2.7 ?m 色谱柱CORTECS 2.7 ?m实心核颗粒色谱柱 可以实现发挥任何HPLC仪器设备 的最高性能CORTECS 2.7 ?m实心核色谱柱优化了HPLC运行背压，可以灵活的选择 更长的色谱柱提高分离度或者更高的流速加快仪器分析时间、提高通量， 无需担忧HPLC的背压问题?2014 Waters Corporation582911/19/2014CORTECS 实心核颗粒 （实物照片）CORTECS Solid-core与全孔型颗粒相比： 仅在颗粒的薄的外层含有多孔以及色谱键合相 表面 中心无孔 外层壳的典型形态是“崎岖不平”，不整齐漂 亮 颗粒粒径分布更窄ρ=实心核内径 / 颗粒粒径66%dcore = 1.1 ?mRho, ρ = 1.1/1.6 = 0.7多孔体积 ρ = 0 → 全孔型颗粒 ρ = 1 → 无孔型颗粒?2014 Waters CorporationG. Guiochon, F. Gritti, J. Chromatogr. A )
Omamogho et al., J. Chromatogr. A ) dp = 1.6 ?m594.6 x 150 mm 色谱柱的反压研究 使用最大年度的乙腈流动相全多孔C18, 2.5 ?m竞争对手的实心核C18, 2.6 ?m传统的HPLC仪器的 压力限CORTECS C18, 2.7 ?mComparative separations may not be representative in all applications.优化了HPLC运行背压，性能最佳！?2014 Waters Corporation 6020%乙腈:水 流动相3011/19/2014高柱效，低背压0.10 0.08 AU 0.06 0.04 0.02 0.00 0.10 0.08 AU 0.06 0.04 0.02 0.00 0.10 0.08 AU 0.06 0.04 0.02 0.00 1.501. 2. 3. 4.Estradiol Ethinyl estradiol Estrone 1 LevonorgestrelConfiguration:2 3 44.6 x 150 mmRs 4.9Fully Porous C18 5 ?m psi 1900 N peak 4 10,400Rs 6.3Fully Porous C18 3.5 ?m psi 2900 N peak 4 17,600Rs 8.2CORTECS C18 2.7 ?m psi 3200 N peak 4 23,6004.00 4.50 5.00 5.502.002.503.003.50 Minutes?2014 Waters Corporation61CORTECS 2.7um HPLC柱 CORTECS 2.7 ?m 实心核颗粒柱效与更小粒径的全多孔颗粒 相当，背压比更大粒径的全多孔颗粒相当。?2014 Waters Corporation623111/19/2014CORTECS 2.7 ?m 色谱柱专门设计用于HPLC和UHPLC分离的2.7 ?m 硅胶基质实心核颗粒 关键优点: ― 更高柱效、低背压 ― 提高分离度 ― 加快分析速度 ― 无缝方法转移 3 种键合相:― C18+ ― C18 ― HILIC?2014 Waters Corporation63等度方法提速案例，无需方法验证：齐多呋定，叠氮胸 苷（抗艾滋病药）?2014 Waters Corporation643211/19/2014CORTECS C18+ 2.7um 4.6*150用于奥美拉唑强 讲解物分析（Alliance系统/Qda检测器）?2014 Waters Corporation65可无忧转换的HPLC柱平台提供极佳的pH耐受 性eXtended Performance [XP] 2.5 ?m Columns提供多种选择性1.7 [UPLC], 2.5, 3.5, 5 and 10 ?m1.7 [UPLC], 2.5, 3.5 and 5 ?m CSH 1.8 [UPLC], 2.5, 3.5 and 5 ?m HSS?2014 Waters Corporation663311/19/2014提速USP方法分析克拉霉素HPLC系统上，HPLC分析柱XP柱?2014 Waters Corporation67提速USP方法分析克拉霉素XP柱：HPLC系统UPLC系统?2014 Waters Corporation683411/19/2014可无忧转换UPLC-HPLC的颗粒平台BEH TechnologyHSS TechnologyCSH TechnologyCORTECS SolidSolid -Core TechnologyACQUITY UPLC颗粒 宽pH和温度范围2004第一个保留更长 颗粒与键合相更多选择2006设计提供更多选择性 在低pH条件下 碱性峰形更佳2010柱效与分离度更高 通量更高2013?2014 Waters Corporation69可用资源: 可用资源 :色谱柱挂图 与 色谱柱选择卡键合相类型 可用PH范围 C 温度耐受范围 C 载碳量C C简单列举比较了相关色谱柱参数包含所有HPLC和UPLC色谱柱信息 色谱柱的应用特色与选择苯基柱与氟苯基柱， 可能有利于苯环取代基异构体的辨识?2014 Waters CorporationEN703511/19/2014总结了解反相色谱柱特性及原理填料的性质 硅醇基活性的影响 PH范围C C CC C C C如何根据应用需求选择合适的色谱柱宽PH值C18柱在药物分析中的优势&XBridge BEH C18/RP18& 极性化合物，难保留 &XSelect T3/ HILIC mode& 碱性化合物，峰形不佳 &XSelect CSH C18& 性价比高的硅胶C18 &Symmetry C18―USP方法& 新变化对实验室的影响 CORTECS和XP协助提高实验室效率 &CORTECS 2.7 XBridge/XSelect 2.5um&C CUSP&621&新视野 总结?2014 Waters Corporation7136
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而 waters 却分为软、硬件,只能选择一个,如 果想...气相色谱仪选购要点和思路仅从实验室用气相色谱仪为...件新的分析任务有许多单位,现有的仪器经适当改造,...性分析、市场调研、IPO 咨询等,公司高覆盖、高效率...生产制备柱 13 第四节 色谱柱在各领域的应用情况 ...(waters、安捷伦和 kromasil 等) 80 2、日本阵营(...液相色谱柱的选择 58页 免费 液相色谱柱的应用ding...“添加剂” 在里面, 而这些资料 waters, agilent,...就是延长柱寿命,而没有带来总体 分析效率的提高。 ...水污染控制实验室,成立了由色谱、 光谱、生物等测试...的分析测试中心;紧密结合地方经济和环境保护需求,在...影响 SPME 萃取效率的因素很多,主要是对干扰分析物...气体分析―实验室气相色谱仪气路改装孙志华(南京仁华色谱科技应用开发中心 江苏 ...生产过程控制监测分析、产品质量分析、安全控制分析等各项分析工作的效率和效益;为此...分析方法。分析方法的开发主要包括色谱柱的选择、流动...增加很多,能节省很多的分析时间,极大的提高工作效率...如 Waters 的 Symmetry Shield RP18 或 RP8, ...但来到新公司后,发现大家都没有使用,几个实验室连...规模制备柱的填充;②径向加压法, Waters 专利;③轴...通过选择合适的色谱柱和合适的 pH,可以提高选择 性...操作者可根据需要,选择不同操作界面,适合初学使用、常规实验 分析和专家级分析。...柱温室尺寸:可放置 3 根 300mm 色谱柱 4.1 4.2 Waters 液相色谱仪 第 2 ...(1)塔板理论推导出的计算柱效率的公式用来评价色谱...实验室通常备用哪三种色谱柱,基本上能应付日常分析...(1)外标法 适用条件:对进样量的准确性控制要求较...(GC)和高效液相色谱(HPLC)以及化学分析(CA)的资料...2、在现在市场竞争如此激烈的今天工作速度与效率显的...当一分析方法会在多个实验室应用时,或要比较和评估...
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