dna能直接溶到tcep水溶液沉淀法提取dna中吗

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&DNA不能大量的连到纳米金胶上去
DNA不能大量的连到纳米金胶上去
作者 试管杨
各位,虫友,最近花了近50几天,用DNA连金一直出问题老连不上。所以想咨询各位虫友意见!
我目标是在金表面连上一个双链DNA,其中一条一端连金,另一条在远离金一端标记荧光基团,所以如果连上就有荧光
我的实验步骤:首先将50uL 10uMDNA用5uL 10mMTCEP活化2小时,然后将其和1mL金胶一同加入NaOH处理过的玻璃瓶中,然后在避光的条件下在摇床上摇晃16h,温度37℃,然后,向反应瓶中加入0.1M PB、0.1%SDS使其浓度达到0.01M PB、0.01%SDS。然后,隔2h逐滴加入2M NaCl溶液时玻璃瓶中NaCl浓度达到0.05M,然后,每隔6-8h滴加2M NaCl溶液,使NaCl浓度达到0.1M、0.2M、0.3M. 然后在8500转(离心力在5500g)下离心25min,然后用0.3M NaCl的0.01M PB进行洗涤,重复三次,最后用1ml 0.3M NaCl的0.01M PBS进行溶解,然后和目标链在70度下保持10min中,然后缓慢将至室温,然后静置12h。最后8500转(离心力在5500g)下离心25min,最后用1ml 0.3M NaCl的0.01M PBS进行溶解。然后用荧光测定,发现荧光量很小。所以,几乎链接DNA很少。
求问:这问题出在哪里?
TCEP活化时间变短,第一段DNA修饰后时间放久一些,我看有文献老化后还要放2天,不过这一步应该很容易联,我们不加TCEP连的也很好。互补链的结合条件就不懂了
引用回帖:: Originally posted by 试管杨 at
谢谢!目前改步骤也解决!
... 和楼主碰到了同样的问题 操作一样 结果也一样 标上去的链特别少 想请教一下 楼主最后是怎么解决了的,
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