western样品可以和adams添加markerr加在同一个孔吗

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Western blotting 蛋白Marker
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联&系&人:张娟娟 销售
企业经济性质:私营独资企业
所&在&地&址:北京北京
详&细&地&址:北京市通州区马驹桥联东U谷
上次登录时间:日
产品详细说明
产品英文名称:
Western blotting protein Marker
产品规格:
Western&Blot&Marker&产品简介:本产品包含5种预染的已知分子量标准蛋白质,分子量范围为43kD-200kD,条带分别为:43,66.2,97.4,130, 220。可以直接观察蛋白质电泳及清晰地判断WesternBlot的转移 效果。经SDS-PAGE凝胶电泳后转移到PVDF或NC膜上可得到清 晰的5条蓝色的蛋白带。储存条件:-20℃保存六个月。避免反复冻融,建议分装后 于-20℃保存。 使用说明:1.开封后,可根据需要分装成小管,建议每管分装10&l,-20℃ 贮存,每次取一管使用。2.本产品已经含有了样品缓冲液,使用前取分装后的小管65℃预 热5分钟即可上样进行电泳,上样量5-10&l。 3.建议分离胶浓度为8%。注意:上样前,蛋白样品65℃预热是必需的,否则电泳后一些蛋 白会沉积在分离胶的上沿,出现一条蛋白杂带。
Western&Blot&Marker&&说明书
货号:PR1800
规格:10T(50&l)&/20T(100&l)
保存:-20℃可保存至少六个月。避免反复冻融,建议分装保存。
本产品由北京索莱宝科技有限公司优惠供应,公司常年现货,欢迎广大科研工作者及经销商同仁前来咨询选购;另外公司专业从事进口科研生化试剂的批发及零售业务,产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学等诸多生命科研领域。因公司业务发展的需要,现诚征各地经销代理商,欢迎有志从事本行业的精英、同行莅临指导。
Western&Blot&Marker是专门为Western&Blot试验设计的分子量标准。传统的Western&Blot试验需要使用预染蛋白Marker来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率。但预染蛋白Marker用在Western&Blot试验中有三大缺点:(1)预染蛋白Marker无法在胶片上曝光,曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断,因此后续的图片需要拼接才能两者合而为一;(2)预染蛋白Marker都经过化学修饰,经过化学修饰的蛋白在SDS-PAGE电泳过程中迁移率发生改变,分子量信息不再准确,往往导致Western&Blot结果判断出现较大偏差;(3)预染蛋白Marker无法检测作为杂交过程的阳性对照。Western&Blot&Marker由6种不同分子量的蛋白组成(20、40、60、70、80、120&KDa),其中70KDa条带为蓝色预染marker,其它五个条带都可与人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、兔的IgG恒定区结合。&Western&Blot &Marker可以直接结合二抗,&或通过结合一抗间接结合二抗,&因此蛋白Marker就能与抗原在同一张胶片上曝出信号,&阳性信号可以直接通过Western&Blot&Marker的位置来判断。&Western&Blot&Marker不经过任何化学修饰,分子量精确。
1.&取出后于室温放置融化;
2.&温和地充分混匀,取&5&l&该&Western&Blot&Marker&至上样孔中,进行&SDS-PAGE&电泳。
3.&电泳完毕后转至&PVDF&膜,与一抗二抗孵育。
4.&孵育完毕,将&Western&Blot&Marker&与抗原一起通过&ECL&曝光至胶片。
Lane&1,2,3:上样量为5、10、20&&l的Western&Blot&Marker
1.&本产品可直接使用,不需要加热。
2.&及时更换电泳缓冲液并使用新配制的凝胶,以免影响电泳结果。
N8010-5Naphthalene&acetic&acid(NAA)&&-萘乙酸5g
CColchicine&秋水仙碱250mg
I8020-13-Indole&acetic&acid(IAA)&吲哚-3-乙酸1g
I8020-53-Indole&acetic&acid(IAA)&吲哚-3-乙酸5g
I8030-1Indole-3-butyricacid(IBA)&吲哚-3-丁酸(水溶)1g
I8030-5Indole-3-butyricacid(IBA)&吲哚-4-丁酸(水溶)5g
A8060-25Abscisic&acid&(ABA)& 脱落酸25mg
AAbscisic&acid&(ABA)& 脱落酸100mg
F8080-1Forchior&fennron&氯吡苯脲&(促进植物细胞分裂)1g
X8040-5Zeatin&玉米素&(细胞分裂素,用于植物组织培养)5mg
T8110-50Trans-Zeatin&(反玉米素&植物细胞分裂素)50mg
TThidiazuron&(TDZ)&噻苯隆100mg
CChlormequat&矮壮素100g
PPaclobutrazol&多效唑100g
D-D&2,4-二氯苯氧乙酸5g
D-D&2,4-二氯苯氧乙酸10g
KKinetin&激动素250mg
A8170-16-Benzyl&Aminopurine&6-苄氨基喋呤1g
北京索莱宝科技有限公司常年供应常规试剂生化试剂抗体和耗材,合作的试剂品牌sigma、amresco、abcam、CST、Roche、qiagen、invitrogen、omega以及耗材品牌corning、axygen、Thermo等。
北京索莱宝科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。总部位于北京,并在上海、哈尔滨等全国30多个省市设有经销、代理机构。涉及的产品被中国科学院、清华、北大、复旦等知名科研院所广泛使用,可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念,拥有专业的研发和质量检测团队以及先进的仓储和物流系统。“Solarbio”品牌已经得到全国科研工作者的认可,成为广大经销商推崇的名牌产品。公司拥有一批专业研发人员,专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,索莱宝公司提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达5800多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,索莱宝谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用最专业的态度做最专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和一流的售后服务。索莱宝公司坚持与国际接轨,注重和国际先进企业的合作与交流,目前已经和Sigma、Axygen、Amresco、Corning、DBbiotech、AAT、Applichem、以及Dragon等著名企业结成紧密的合作关系,并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多知名品牌合作,为广大生物科研工作者提供最优质、最专业的服务。公司理念:“为科研服务,为生命尽责”。一个人能够走多远,取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作,为广大科研工作者提供更加优质的产品和服务。索莱宝诚招生物试剂研发人员,期待与广大同行精诚合作,为广大科研工作者提供优质的产品,高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助,您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行,共同创造美好的明天。
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版权声 明&2017产品导购指南中心生物帮产品使用指南手册为广大科研爱好都提供便利平台该指南的快速浏览目录&当前位置: 蛋白质分析>蛋白质分子量标准>详细内容Invitrogen常用蛋白Marker选择指南最后修改日期: 14:19:24作者:wulili■ 预染蛋白Marker货号名称规格应用SDS-PAGEWestern Blot条带锐利估计分子量监测条带迁移银染分子量范围推荐用量价格LC5699250 &lHiMark Pre-stainedNuPAGE TABest for large protein analysisGoodBest for large proteinsGoodGood31-460 kDa10 μl17922 & 250 &lBenchMark Pre-stainedTris-Glycine onlyGoodGoodGoodGoodGood10-190 kDa10 μl1792LC5925500 &lSeeBlue Plus2GoodGoodGoodGoodGoodGood4-250 kDa10 μl1818LC58002 & 250 &lNovex SharpBestBestBestBestBestGood3.5-260 kDa10 μl1974■ 非预染蛋白Marker货号名称规格应用SDS-PAGEWestern Blot条带锐利估计分子量监测条带迁移银染分子量范围推荐用量价格LC5688250 ulHiMarkNuPAGE TAGoodBestBestN/ABest40-500 kDa5 μl2645LC56771 mlMark12GoodGoodBestBestN/ABest2.5-200 kDa5 μl17502 & 250 &lBenchMarkGoodGoodBestBestN/ABest10-220 kDa5 μl1494LC58012 & 250 &lNovex SharpBestBestBestBestN/ABest3.5-260 kDa10 μl1696■ WB蛋白Marker货号名称规格应用SDS-PAGEWestern Blot条带锐利估计分子量监测条带迁移银染分子量范围推荐用量价格LC56021 mlMagicMark XPGoodBestBestBestN/AGood20-200 kDa2-10 μl3455■ 天然Marker货号名称规格应用SDS-PAGEWestern Blot条带锐利估计分子量监测条带迁移银染分子量范围推荐用量价格LC07255 x 50 &lNativeMark UnstainedNuPAGE TA & Tris-GlycineGoodGoodBest for Native ProteinsN/AGood20-1200 kDa5 μl3020■ 特殊蛋白Marker货号名称规格应用SDS-PAGEWestern Blot条带锐利估计分子量监测条带迁移银染分子量范围推荐用量价格LC5928125 &lBenchMark FluorescentGoodGoodGoodBestN/AN/A11-155 kDa5 μl3185LC5606125 ulBenchMark His-taggedGoodGood for Anti-His (C-term) antibody detectionGoodBestN/AGood10-160 kDa5 μl2285■ IEF Marker货号名称规格应用SDS-PAGEWestern Blot条带锐利估计分子量监测条带迁移银染分子量范围推荐用量价格39212-01500 &lIEF Marker 3-10N/AN/AGoodpI 估计N/AGoodpI 3.5-10.710 μl2915上一篇:Copyright (C)
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western blot实验中加样的具体步骤?请有心人士告诉我各个孔应该加入什么,当时听课的时候博士讲的是英语,没有跟的上呀!
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阳性对照、阴性对照、你的样品.如果同时做两块胶,其中一块用来做染色的话,最好加上marker.除了marker,其他的样都要加等量的上样缓冲液.
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【求助】western blot为什么marker能转上而样品转不上?
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最近做western blot,marker转的很好,可是与marker分子量同样大小的样品却转不上,我用的转移缓冲液按millipore说明配的,加了20%的甲醇,没有加SDS(因为担心转印过程中有气泡产生),湿转,12%的胶厚度1mm,250mA,3h,60kDa以下的marker全转上(非预染),90kDa的marker未转上,可是60kDa以下的样品很多都没有转上,不知是什么原因?请各位帮忙!查看完整版本请点击这里:
one ( 11:11:32)
蛋白没有转上,很可能是因为蛋白的浓度过低,提高蛋白的浓度试试看。
toy ( 11:11:55)
谢谢!但是胶用考马染带很清晰,好像就是样品带没过去,这是浓度低的原因吗?显色结果出来有带但是不如以前做的带亮且有杂带,版主说的转膜太过是什么意思?
toy ( 11:12:13)
补充一下因为封闭没有用立春红染有样的膜,我通常是染一下胶看看转印的好坏,因为以前转膜后胶上几乎没有带,而这次胶上带太多且清晰,我测完浓度上样30ug左右。
u234 ( 11:12:30)
你转膜同时那个电源上不能插别的电泳仪或转膜仪,不然会分散电压,达不到250mA的效果
IAM007 ( 11:12:51)
我曾经遇到过这种情况,用氨基黑染过,没有目的条带,后来经过重新配了电泳液才消失
原因有可能是电泳液比较陈旧,离子浓度不一致,导致蛋白和MARKER跑的位置不一致,裁胶的时候把蛋白裁掉了,因此我现在基本电泳液最多用3次
zzzz ( 11:13:10)
QUOTE:原帖由 toy 于
11:10 发表
最近做western blot,marker转的很好,可是与marker分子量同样大小的样品却转不上,我用的转移缓冲液按millipore说明配的,加了20%的甲醇,没有加SDS(因为担心转印过程中有气泡产生),湿转,12%的胶厚度1mm,250mA,3h,60kDa以下的marker全 ... 不知你要检测的目的蛋白的大小是
多大。其实如果仅是定性检测目的蛋白
的表达之类的问题,你完全可以往下做,
只要WB有阳性结果就可以了。
BTW:我以前看到marker都转的不好,
就一直停在这步上。后来索性继续往下做,
出阳性结果就OK了。
toy ( 11:13:38)
谢谢各位,我换了另一个公司的甲醇,转膜好了许多,但是出现了新的问题,抗体孵育和显色的条件都没有变,为什么总是有杂带且较多,而且以前显色半小时就差不多(用的BCIP/NBT),且就一条带,而现在时间很长,且杂带多,已经一个月了总这样,实验一直不稳定,请各位高手帮忙!先谢了!
huifeng0516 ( 11:13:55)
杂带多那你减少一抗浓度阿
是不是你原来的甲醇过期了阿,就没有效果拉
toy ( 11:14:13)
我的甲醇都是刚买的,不过厂家不同,甲醇是不是气味越柔和越好啊!但是我用气味越柔和的越做的不好,用比较刺鼻的反而好,我用的是天津和济南产的,结果济南产的好像做得好,大家不知都用什么牌子的甲醇。
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