real-realtime ct值大于30pcr中不同的ct值是什么意思

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-07-05 05:32 标签： pcr ct值是什么意思
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求助，real-time PCR 标准样品和部分待测样品，没有CT值
刚做real-time PCR，遇见了一个大问题，待高手解答，先谢谢了！
我的标准样品和待测样品中的8个，都没有CT值
probe用的是TaqMan
PCR 反应溶液组分：
DNA 2 uL, 50-150 ng， 260/280 都在1.8-2.1之间，
probe: 2 pmol
primers: 4 pmol
master mix: 10 ul
总共： 20 uL
plasmid DNA作为标准DNA模板，待测DNA来于活性污泥，目标DNA是RNA
循环了40次，标准样品都没CT值，10个待测样品，只有两个有CT值
该实验重复了一点，结果类似
我用同样的引物，用没稀释的标准DNA和待测DNA，做个常规PCR，跑胶结果显示目标DNA是扩增了的。
real-time PCR 仪器是：Stratagene Mx3000
可能原因是？
我选择的FAM，ROX作为参照
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【求助】Real-Time PCR的cT值如何判定结果
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这个帖子发布于3年零291天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
各位战友你们好，我是PCR新手，以下是我的溶解曲线什么的，然后我不知道该怎么去判断结果师姐说看cT值，有个什么公式的，不是直接看值的，同时又有人说cT值要相近才能说明做的好，但是如果cT值相近的话怎么可能计算出差异来呢，恳请大家指点迷津
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采用相对定量方法（2△△CT）对结果进行比较分析，计算两个复孔的平均值作为每个样本的实际CT值，同一样本的CT值减去其内参β-actin的CT值，获得ΔCT值，然后同一组的样本获得一个平均ΔCT值，在所有实验组的ΔCT值中选择一个最大ΔCT（Max）作为衡量的标准，用其他样本组的ΔCT值减去ΔCT（Max）值,最后根据待测基因和内参循环数Ct值，按照公式相对值=2△△CT计算出待测样本待测基因相对于内参基因的相对表达量。
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无难 采用相对定量方法（2△△CT）对结果进行比较分析，计算两个复孔的平均值作为每个样本的实际CT值，同一样本的CT值减去其内参β-actin的CT值，获得ΔCT值，然后同一组的样本获得一个平均ΔCT值，在所有实验组的ΔCT值中选择一个最大ΔCT（Max）作为衡量的标准，用其他样本组的ΔCT值减去ΔCT（Max）值,最后根据待测基因和内参循环数Ct值，按照公式相对值=2△△CT计算出待测样本待测基因相对于内参基因的相对表达量。非常感谢
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无难 采用相对定量方法（2△△CT）对结果进行比较分析，计算两个复孔的平均值作为每个样本的实际CT值，同一样本的CT值减去其内参β-actin的CT值，获得ΔCT值，然后同一组的样本获得一个平均ΔCT值，在所有实验组的ΔCT值中选择一个最大ΔCT（Max）作为衡量的标准，用其他样本组的ΔCT值减去ΔCT（Max）值,最后根据待测基因和内参循环数Ct值，按照公式相对值=2△△CT计算出待测样本待测基因相对于内参基因的相对表达量。为为什么是“其他样本组的△CT值减去△CT（MAX）”？而不是减去△CT的平均呢？，，，求指教，谢谢
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【求助】帮忙看一下文献中这个real time PCR结果，弄糊涂了
第一个问题：图中纵坐标的△ct，是说明△ct公式还是说纵坐标的值就是△ct呢？
另外，如果△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数低于内参基因，△CT越大，说明目的基因mRNA表达越低啊，
图注中为什么说是更高呢？
第二个问题：如果是临床组织标本做相对定量，最终看有没有统计学意义，是不是应该算出每例标本中目的基因的2~-△△CT或是2~-△ct，然后进行统计分析啊，还是直接用△CT做统计分析?
高手们帮忙看看，多谢啦！
无标题.png
Ct值是底物到达阈值需要的循环数啊，
照您所说，
比如A 20个循环起峰，CT值即为 20
& && &B&&25个循环起峰，CT值即为25
& & 照此来看，A的量多，因为A到达阈值需要的循环数要少
那么△ct=（CT_A&&-&&CT_B）= -5
这个柱状图还是没看懂
anyway ，thank u，希望能继续探讨
那么△ct=（CT_A&&-&&CT_B）= -5 ，错的
反了，人家图上有标注的，是目的基因-内参基因
△CT = CT_目的基因-CT_内参基因
这个公式肯定没有问题，
咱们看图说话，A图中，高级别胶质瘤组，△CT高于低级别胶质瘤组，说明高级别胶质瘤组中目的基因达阈值需要的循环数多于低级别胶质瘤组啊，间接说明目的基因的相对表达量在高级别胶质瘤组要低于低级别胶质瘤组。
而在图注中则说高级别胶质瘤组中目的基因的相对表达量要高
这是矛盾的啊，我就糊涂在这里
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【求助】关于realtime PCR的CT值及统计问题
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这个帖子发布于2年零310天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
一般说CT值越高说明扩增的产物越多，但是CT值大于30以后结果则不可靠，说明含量低没有扩增出来。我现在有两组样本，第一组CT值平均35，第二组CT平均值25，在统计的时候如何比较？是把第一组的平均值认为是0么？还是这种情况不应该出现，属于检测的问题？可能是什么问题？求高手解答。
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一般CT值大于35就没有意义了
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cindahan 一般CT值大于35就没有意义了 知道是没有意义，但是统计的时候如何处理这些值呢？
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既然没有意义，你统计完有什么意义呢？
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cindahan 既然没有意义，你统计完有什么意义呢？ 实际上这个问题的关键是 ：如果CT值大于30，其原因到底是什么？如果是cDNA含量太低，扩增不出，那不是恰好说明我要检测的mRNA含量低么？又或者有其它什么原因造成这种情况，我不知道怎么解释。
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我也很想知道，坐等大神解答！！！
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我最近也在做qpcr，目的基因ct值老是接近35，检测rna质量没问题，反转录的cdna也没问题，普通pcr摸条件有表达，扩增的目的基因应该不属于难表达基因，困惑。
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shadou706 一般说CT值越高说明扩增的产物越多，但是CT值大于30以后结果则不可靠，说明含量低没有扩增出来。我现在有两组样本，第一组CT值平均35，第二组CT平均值25，在统计的时候如何比较？是把第一组的平均值认为是0么？还是这种情况不应该出现，属于检测的问题？可能是什么问题？求高手解答。我检测的CT值也是35左右，请问您解决了吗？
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纠正一下CT值越低，目标基因拷贝数越多，对于两组样品ct值不一致，在pcr的时候需要选择内参，同时做qpcr
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还是要看内参基因检测CT值是不是正常的，如果内参CT值都很大了说明起始的cDNA浓度太低了，内参基因正常，那就基因表达水平低导致
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没有内参，什么问题都说明不了
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