细菌和噬菌体直接测序_Sanger测序_一代测序-金唯智
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细菌和噬菌体直接测序（RCA服务）
自1999年起，金唯智持续优化测序流程，并借此推进基因组的研究。金唯智的滚环扩增（Rolling Circle Amplification, RCA）服务帮助客户直接使用细菌或噬菌体进行测序，而无需制备质粒。
滚环扩增（RCA）使用随机六聚体引物对环状模板进行复制，以此获得供测序使用的DNA。金唯智RCA方案能够处理任何规模的测序项目；并且经过我们的优化，可直接使用细菌样本（平板菌落、甘油菌和新鲜菌液）和噬菌体样本（噬菌斑或上清液）获得高质量的序列。当DNA起始材料（例如低拷贝质粒）较少时，RCA也十分有效。
在细胞裂解后，向细菌样本中加入dNTPs、phi29聚合酶以及随机六聚体。随机引物退火至环状模板上，并且同时在许多点上开始复制。
phi29聚合酶具有高稳定性、长持续能力和高保真度的特性，保证其能在多个扩增循环周期中持续进行链置换。
新合成链持续被置换并不断提供新的结合位点，保证新复制事件得以开启；模板借此实现指数式扩增。
扩增6~12 h后，对RCA反应体系加热使phi29失活；此时的产物已可用于测序。
Sanger测序读取长度保证800 bp，最长可读到1000 bp。每份测序结果均提供质量得分（QS）和连续读长（CRL）。
复杂结构的测序方案
有效提升发夹结构和高GC含量 DNA的测序成功率。
金唯智技术支持
金唯智的技术支持会无偿地与您探讨项目进展，解决技术难题。咨询时间为每个工作日上午8点30至下午9点。周末正常发送结果，以供您周末使用。
使用ABI 3730XL 自动测序仪的毛细管电泳和荧光标记技术对您的样品进行测序。
，我们会告知您距离最近的样品箱或运送服务地点，向您提供装运服务。
免费的通用引物
金唯智通用引物适合于大多数商业化载体。您可使用我们的，确定适用的通用引物。
便捷的在线系统
金唯智在线订单系统帮助您随时随地进行在线订购，订单进度查询以及历史数据管理。
合成引物测序
金唯智自有引物合成平台，可为您快速合成指定序列的引物。
shRNA克隆和库筛选：无需制备质粒，可直接对菌落测序。
抗体噬菌体展示库验证：直接对噬菌体进行测序，以便更快地完成筛选和确认。
DNA甲基化分析：直接对PCR产物克隆后的菌落进行测序，从而节约大量时间并获得高质量序列。
寄送1.5 ml 离心管或96孔板；样品必须采用干冰装运。请标明培养基类型。
在平板上按顺序编号并接种，或将待测克隆圈选标注并编号；若无编号将随机挑选。如果使用液体培养基，请将样本分装至96孔板中，并用8联管盖密封。如果提供平板菌落，请将平板用封口膜密封，并使用缓冲垫以防运输过程中出现破损。
噬菌体上清液
请将50 ul的噬菌体上清液装入8联PCR管或1.5 ml离心管中提交，并清晰标注样品编号。
注意：部分实验室并不提供噬菌体测序服务，请与您的销售联系确认。
请将待测的噬菌斑圈选标注并编号。请将平板用封口膜密封，并使用缓冲垫以防运输过程中出现破损。
* 温馨提示：RCA方案可能对部分表达载体和表达菌株不适用。
部分实验室不提供噬菌体测序服务，邮寄样品前请与我们确认。
如需细菌和噬菌体模板的更多相关信息，请阅读
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&&&苏州 & 北京 & 天津 & 广州第十九章 基因操作 自测题
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第十九章 基因操作 自测题
A型题&<font color="#．确切地讲，cDNA文库包含&&&&A.&一个物种的全部基因信息B.&一个物种的全部mRNA信息C.&一个生物体组织或细胞的全部基因信息D.&一个生物体组织或细胞的全部RNA信息E.&一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息<font color="#．在分子生物学领域，重组DNA技术又称A.&酶工程&B.&蛋白质工程C.&细胞工程D.&基因工程E. DNA工程<font color="#．在分子生物学领域，分子克隆主要是指A. DNA的大量复制&&B. DNA的大量转录C. DNA的大量剪切D. RNA的大量反转录E. RNA的大量剪切<font color="#．在重组DNA技术中，能特异切割DNA的酶是A.&限制性核酸内切酶B.&核酸外切酶C.&核酶&D. DNA酶E. DNA连接酶<font color="#．重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是A. DNA聚合酶B. RNA聚合酶C. DNA连接酶D. RNA连接酶E.限制性核酸内切酶<font color="#．在已知序列信息的情况下，目的基因获取的最方便的方法是A.&化学合成法B.&基因组文库法C. cDNA文库法D.&聚合酶链式反应E.&抑制性削减杂交法<font color="#．催化聚合酶链式反应的酶是A. DNA连接酶B.&反转录酶C.末端转移酶&&D. DNA聚合酶IE.&Taq&DNA聚合酶<font color="#．核酸分子杂交试验不能用于A.&单链DNA分子之间的杂交B.&单链DNA分子与RNA之间的杂交C.&抗原与抗体分子之间的杂交D.&基因组DNA与PCR产物之间的杂交E. RNA与RNA之间的杂交<font color="#．用作探针的DNA分子必须A.&在杂交前变性B.&在杂交前复性C.&长于30个核苷酸&D.&短于30个核苷酸E.&是双链分子<font color="#．Southern blotting是A.&将DNA转移到膜上所进行的杂交B.&将RNA转移到膜上所进行的杂交C.&将蛋白质转移到膜上所进行的杂交D.&将多糖转移到膜上所进行的杂交E.&将脂类转移到膜上所进行的杂交<font color="#．下列不属于DNA聚合酶的是A.&端粒酶B. Klenow片段C.&Taq&DNA聚合酶D.&反转录酶E. DNA连接酶<font color="#．同位素标记探针检测硝酸纤维素膜（NC）上的DNA分子叫做A. Southern blottingB. Northern blottingC. Western blottingD.&免疫印迹E.&蛋白质印迹<font color="#．PCR的主要步骤不包括A.&设计一对特异性引物&&&&&&&&&&&&&&&&&B. 95℃使模板DNA变性C.&降温到合适的温度时使模板DNA与引物杂交D. DNA聚合酶在dNTP存在时，进行延伸E.&加热使DNA聚合酶失活<font color="#．关于蛋白质组研究的描述，哪个是正确的A.&研究某一组织细胞中的一种蛋白质的功能B.&研究某一组织细胞中的重要蛋白质的功能C.&研究某一组织细胞中的全部蛋白质的功能D.&研究某一组织细胞中的一类蛋白质的功能E.&研究某一组织细胞中的一个蛋白质超家族的功能<font color="#．转基因动物是指A.&把某基因转入动物某组织细胞B.&把某基因从一个动物转移到另一动物C.&把致病基因从动物细胞内转走D.&把某基因转入动物的受精卵中E.&把某基因整合入动物的受精卵中，再导入子宫，从而发育成新个体<font color="#．当要了解某一基因在某组织细胞中的mRNA表达水平时，采用哪种方法最合适A. Southern blottingB. Northern blottingC. Western blottingD.&免疫组化分析E. Dot blotting17．DNA序列自动化测定中不正确的描述是A.&荧光标记代替同位素标记B.&激光扫描分析代替人工读序C.&测序原理与手工测序基本相同D.&不需要引物E.&需要模板<font color="#．用于测序的DNA末端终止法中不需要A.&四种脱氧核苷酸（dNTP）B.&四种双脱氧核苷酸（ddNTP）C. DNA聚合酶D.&32P标记的一种dNTPE. DNA连接酶<font color="#．基因克隆所需DNA载体的最基本性质是A.&青霉素抗性B.&卡那霉素抗性C.&自我复制能力D.&自我转录能力E.&自我表达能力<font color="#．关于基因操作中目的基因的描述，错误的是A.&研究的目标基因B.&需要研究其功能的基因C.&需要克隆的基因D.&需要表达的基因E.&有重要功能的基因<font color="#．cDNA文库的建立需要A.&逆转录酶、DNA模板B.&依赖DNA的DNA聚合酶、mRNA模板C.&逆转录酶、mRNA模板D.&依赖RNA的DNA聚合酶、tRNA模板E.&逆转录酶、rRNA模板<font color="#．限制性核酸内切酶A.&识别并切割RNA的特异序列B.&识别并切割DNA的特异序列C.&限制并保护自身的DNAD.&具有统一的识别和切割位点E.&以上都不对<font color="#．DNA克隆过程不包括以下步骤A.&获取目的基因B.&选择与修饰载体C.&筛选转化子D.&获得重组DNA分子E.&合成探针检测基因<font color="#．目前常用于基因表达的宿主细胞包括A.&E.ColiB.&哺乳动物细胞C.&昆虫细胞D.&酵母细胞E.&以上都对<font color="#．DNA分子的体外连接方法包括A.&合成接头B. Klenow补平C.&粘端连接D.&平端连接E.&以上都对<font color="#．M13噬菌体适用于A.&构建基因组文库B.&构建cDNA文库C.&克隆较大的DNA片段D.&克隆单链外源DNA片段进行序列分析E.&以上都对<font color="#．质粒DNA导入细菌的过程称为A.&转化B.&转染C.&感染D.&传染E.&连接<font color="#．限制性核酸内切酶是一种A. DNA酶B. RNA酶C.存在于细菌中的酶D.识别并切割特异DNA序列的酶E.&切割产生特定大小片段的酶<font color="#．通常所说的“DNA克隆”方法是A. DNA合成仪合成DNAB.&将DNA“插入”载体C. PCR扩增DNAD.&从细胞提取DNAE.&以上都不是<font color="#．所谓“克隆”就是指A.&遗传学上相同的一群细胞B.&一群相同的DNA分子C.&“多莉”绵羊D.&人的复制品E.&同一“拷贝”的集合<font color="#．RNA干扰是指A.&由短双链RNA诱导同源RNA降解的过程&&&&&&B.&由短单链RNA诱导同源RNA降解的过程C.&由短单链DNA诱导同源RNA降解的过程&&&&&&&&&&&&&&&&&D.&由短单链RNA诱导同源DNA降解的过程E.&由短双链RNA诱导同源DNA降解的过程&<font color="#．DNA双链状态下属于完全回文结构的序列是A. CGTGGTGCB. CGTGCGTGC. CGTGCACG&&D. GACTCTGAE. CTGAGATC33．相对载体而言，插入的DNA片段称为A.&筛选基因&&&&B.&可调节基因C.&外源DNA&&&D. cDNAE.&基因组DNA34．哪一条单股DNA片段在双链状态下不能形成回文结构A. ATGCGCAT&&&B. ACTGCAGTC. GTCATGAC&&&D. AGTGCACTE. ACTGCATG35．关于限制性内切酶的叙述错误的是A.&它能识别DNA特定的碱基顺序，并在特定的位点切断DNAB.切割点附近的碱基顺序一般呈回文结构C.它能专一降解经甲基修饰的DNAD.是DNA重组的重要工具酶E.主要从细菌中获得<font color="#．重组DNA能在含氨苄青霉素的培养基上生长是因为A.&抗生素失效&&&B.&抗生素过少C.&细菌过多&&&D.&载体含有氨苄青霉素抗性基因E.&以上都不是<font color="#．不符合基因工程中理想载体条件的是A.&具有自主复制能力&&&B.&分子量很大C.&具有限制性内切酶的单一切点&D.&有一个或多个筛选标志E.&易与染色体DNA分离<font color="#．作为克隆载体的最基本条件是A. DNA相对分子质量较小&B.&环状双链DNA分子C.&有自我复制功能&D.&有多克隆位点E.&有一定遗传标志<font color="#．聚合酶链式反应扩增的DNA大小取决于A. DNA聚合酶B.&引物C.&模板D.&循环次数E.&三磷酸脱氧核苷<font color="#．在基因工程中，RT-PCR反应中使用的酶包括A.&依赖DNA的RNA聚合酶&B.&依赖DNA的DNA聚合酶C.&限制性内切核酸酶D. DNA连接酶E.&反转录酶<font color="#．DNA经限制性核酸内切酶切割后，断端易于首尾连接，自行成环。这是因为存在A.&钝性末端&&&&B.&粘性末端C.&平头（端）&D. 5'&端E. 3'&端<font color="#．在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指A.&建立单克隆抗体&&&&B.&建立多克隆抗体C.&构建重组DNA分子&&D.&无性繁殖DNAE.&有性繁殖DNA43．无性繁殖依赖DNA载体的哪种结构A.&筛选标记&&&&&B.&启动子C.&复制起始点&&&D.&多克隆位点E.&反应元件<font color="#．克隆某一目的DNA的过程不包括A.&基因载体的选择B.&外源基因与载体的拼接C.&重组DNA分子导入细菌D.&筛选并无性繁殖含重组分子的细菌E.&表达目的基因编码的蛋白质<font color="#．PCR的特点不包括A.&只需微量模板&&&&B.&只需数小时C.&扩增产物量大&&D.&底物必须标记E.&变性、复性、延伸三个步骤循环进行<font color="#．一种生物单倍体所具有的全部基因称为A.&信息库B.&基因库C.&基因组&D.&基因频率E.&基因型频率<font color="#．DNA重组体的构建是指A.&对目的DNA片段作选择性扩增和表达的检测B.&选择目的基因和表达载体C.&将目的基因和载体在体外重组D.&用一定方法转移目的基因到宿主细胞E.&从细胞中提取DNA，在体外切割所需要的DNA片段<font color="#．DNA克隆的基本步骤是A.&构建重组DNA分子→选择增殖细胞克隆→转化→得到重组DNA克隆B.&构建重组DNA分子→选择增殖细胞克隆→得到重组DNA克隆→转化C.&构建重组DNA分子→转化→选择增殖细胞克隆→得到重组DNA克隆D.&细胞克隆选择增殖→构建重组DNA分子→转化→得到重组DNA克隆E.&转化→细胞克隆选择增殖→构建重组DNA分子→得到重组DNA克隆<font color="#．关于Southern印迹的描述，哪一项是不正确的A. DNA-DNA杂交B.&将DNA样品转移到膜上与探针杂交C.&标记后的探针经电泳分离后在凝胶上与DNA杂交D.&杂交时探针一般过量E.&杂交后进行放射自显影<font color="#．关于Northern印迹的描述，哪一项是不正确的A. DNA-RNA杂交B.&将RNA逆转录为cDNAC.&探针与靶RNA杂交D.&将细胞中提取的总RNA经电泳分离转移到膜上E.&杂交后放射自显影观察RNA的大小与表达量<font color="#．关于Western印迹，不正确的叙述是A.&从细胞中提取蛋白质B.&经电泳分离并转移到膜上C.&应用特异的检测抗体D.&标记的DNA探针与转移到膜上的蛋白质杂交E.&检测基因的表达<font color="#．下列哪项因素是PCR技术所不需要的A.&设计PCR特异性引物B.&必须有dNTP做底物C.&提供DNA模板D. RNA聚合酶的催化E.&三步周期循环扩增<font color="#．第一、二、三代DNA遗传标记分别是A. RFLP，EST，SNPB. EST，STS，SNPC. EST，STR，SNPD. RFLP，STR，SNPE. VNTR，STS，SNP54．首次应用分子杂交法克隆的代表性基因是A.&α，β珠蛋白基因B.&尿苷磷酸激酶基因C.&甲型血友病基因D. Duffy血型基因E.&囊性纤维化基因<font color="#．利用定位克隆策略首先克隆的基因是A. DMD基因&B. CF基因&C.&c-myc基因D. p53基因&E. PAH基因<font color="#．DNA合成仪合成DNA片段时，用的原料是A.&4种dNTP&&&&&&B. 4种NTP&&&&&C. 4种dNDP&D. 4种脱氧核苷的衍生物&&E. 4种dNMP57．下列哪种酶能用来催化PCR反应A.Taq&DNA聚合酶&&&&B. DNA连接酶&&&C.引物酶&D.磷酸二酯酶E.限制性核酸内切酶<font color="#．基因工程中常用的限制性核酸内切酶是A.Ⅰ型酶　&&&&B.Ⅱ型酶&&&&&&C.&Ⅲ型酶　&&&&&&&&&D. I、II型酶&E. II、III型酶<font color="#．下面不能被限制性内切酶切割的序列为A.CAATTG　B.GTATAC　C. AAATTT　D. GATATCE. CAATTT60．Sanger的双脱氧法测序时，为了获得鸟苷酸残基为末端的一组大小不同的DNA片段，应该选择哪种物质A. ddTTP&B.ddCTP　C. ddGTP　　D.&&ddATP&E.ddUTP．通常是线性双链分子环状单链分子线性单链分子环状双链分子以上都不对．聚合酶的主要功能是具有→外切酶的活性具有→外切酶的活性具有→聚合酶的活性　参与细胞内的复制修复功能<font color="#．目前在转基因小鼠中常用的基因剔除技术是根据什么原理设计的A.&反义核酸的抑制作用B.&转座成分的致突变作用　C.&离体定向诱变　　D.&同源重组&&&E.&转录后基因沉默．逆转录酶催化以为模板的合成以为模板的合成以为模板的蛋白质合成以为模板的合成以为模板的合成．印迹的研究对象是蛋白质糖类脂类对一个克隆的片段进行物理图谱分析，需要限制性核酸内切酶核酸外切酶酶连接酶核酶<font color="#.&定性分析DNA的常用方法是&&&A. Southern blotting&&&B. Northern blotting&&&&&&&C. Western blotting&&&&&&D. Dot blotting&&&E.&免疫组化分子上特异识别和结合聚合酶的部位是启动子终止子操纵子衰减子外显子中，若以为引物合成第一链，需要的模板是基因有两条链，与序列相同代替的链叫做有义链反义链重链链模板链下述序列中，在双链状态下属于完全回文结构的序列是用标记一个片段，需用多核苷酸激酶连接酶聚合酶逆转录酶磷酸化酶合成的原料是．、、、．、、、．、、、．、、、　E.&、、、74．标记DNA探针的方法是A.&用放射性同位素标记B.&用生物素标记&C.&用地高辛标记D.&用抗体标记E.&&A、B、C都对．反义的作用机制不包括A.&特异地切割靶RNAB.&阻止核蛋白体与靶mRNA结合C.&改变靶RNA的构象D.&抑制翻译E.&与靶RNA形成局部双链<font color="#．下列不属于核酶作用方式的是A.&异体催化剪切B.&自体催化剪切C.&第一组内含子自我剪接D.&第二组内含子自我剪接E.&第三组内含子自我剪接<font color="#．RNAi技术的基本程序主要为A. siRNA对目标RNA的干扰、确定干扰靶点、合成siRNA&B.&确定干扰靶点、合成siRNA、siRNA对目标RNA的干扰C. siRNA对目标RNA的干扰、合成siRNA、确定干扰靶点D.&确定干扰靶点、siRNA对目标RNA的干扰、合成siRNAE.&以上都不对&&<font color="#．目前使用最广的将外源基因注入动物受精卵的方法是A.&精子载体法&B.&显微注射法&C.&胚胎干细胞法D.&逆转录病毒载体法&E.脂质体包裹法<font color="#．不能鉴定转基因动物体内是否整合及表达外源基因的方法是&A. Southern blotting&B. Northern blottingC. Western blotting&D. RT-PCR&E.核型分析<font color="#．下列哪项不属于基因定位的方法A.&体细胞杂交法B.&原位杂交C. FISH&D.&连锁分析E.酵母双杂交法&<font color="#．下列可用于DNA的定量与定性分析的方法是A. Genomic PCRB. Northern blottingC. RNA酶保护实验D.&RT-PCR&E.免疫印迹<font color="#．构建基因组文库时需要限制性核酸内切酶核酸外切酶聚合酶酶酶&&&&<font color="#．构建打靶载体一般需要通过几次DNA体外重组过程84．某种组织来源的cDNA文库包含该种生物的某些蛋白质的编码序列所有蛋白质的结构基因所有蛋白质的结构基因某些蛋白质的结构基因某些蛋白质的结构基因和转录调控序列<font color="#．下列关于cDNA文库的叙述中，错误的是从特定组织或细胞中提取从特定组织或细胞中提取由反转录酶催化合成与mRNA互补的单链DNA&&以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA&双链DNA与合适载体连接后转入受体菌．关于cDNA的最正确的叙述是&&&&&与互补的单链与互补的双链C.&以mRNA为模板合成的双链DNAD.&以单链DNA为模板合成的双链DNAE.&与mRNA互补的单链RNA87．Southern印迹的DNA探针只与完全相同的片段杂交可与任何含有相同序列的片段杂交可与任何含有互补序列的DNA片段杂交&D.&可与用某些限制性核酸内切酶酶切成的DNA片段杂交E.&以上都正确&&&&&&&<font color="#．对重组体进行筛选,证明外源基因已经表达了的方法是印迹印迹原位杂交以上都正确&89．下列不是Southern印迹步骤的为用限制性内切酶消化与载体的连接DNA片段片段转移到硝酸纤维素膜上&用一个标记的探针与硝酸纤维素膜上的DNA杂交&&&<font color="#．下列哪一项是RNA聚合酶和DNA聚合酶共同具有的性质→外切酶性质<font color="#'&外切酶性质<font color="#'&聚合酶性质需要引物的端都以半保留复制方式进行核酸分子合成&B型题A.&限制性核酸内切酶&&&&&&&B. DNA连接酶&C. RNA聚合酶&&&&&&&&&&&&&D.&反转录酶&E. DNA聚合酶91．PCR反应中需要用到的酶是&&&&92．cDNA第一链合成时需要用到的酶是&&93．目的基因与载体形成重组DNA分子需要用到的酶是&94．把DNA片段切断需要用到的酶是&&亲和层析．用来鉴定蛋白质的技术是．用来鉴定的技术是．用来鉴定的技术是℃　℃　℃　℃　℃．的变性温度一般为．的复性温度一般为<font color="#ff．PCR的延伸温度一般为&&A.&接合&&&&&&B.&转化&C.&转染&&&&&D.&转座&E.&感染<font color="#ff．重组DNA导入原核细胞的过程称为&<font color="#ff．重组DNA导入真核细胞的过程称为&<font color="#ff．重组病毒导入细胞的过程称为&&A. STR&&&&&B. BAC&&&&&C. RFLP&&&&&&D. SNP&&&&&E. EST&&&&&&&<font color="#ff.&限制性片段长度多态性可简写为&&&&&&&&<font color="#ff.&表达序列标签可简写为&&&&&&&<font color="#ff.&细菌人工染色体可简写为&<font color="#ff.&简单串联重复序列可简写为<font color="#ff.&单核苷酸多态性可简写为&&A. YAC&&&&&&&&&&B.&λ噬菌体&&&&&&&&&C. M13噬菌体&&&&&&D.&质粒载体&&&&&&&&&&&&&E. BAC&&&&109．一般只能接受小于10 kb的外源DNA插入片段的载体是&<font color="#ff．具有单链闭合环状DNA特性的载体是&<font color="#ff．连接目的基因后的载体长度大于载体基因组的105％或小于75％时，其重组载体的活力会大大下降，这种载体是&<font color="#ff．可以接受1000～2000 kb外源DNA的插入片段的载体是&<font color="#ff．可以接受300 kb左右外源DNA的插入片段的载体是&&A. Southern blotting&&&&&&&&&&&&&B. Northern blotting&C. Western blotting&&&&&&&&&&&&&&&D. Genomic PCRE.&原位杂交<font color="#ff．分析某组织细胞中蛋白质的表达水平时，采用&<font color="#ff．分析基因组DNA的分子杂交方法为&<font color="#ff．定性分析mRNA的常用方法为&&A.&分子克隆&&&B.&表型克隆&&&C.&功能克隆&&&&D.&定位克隆&&&&E.&电子克隆&&&&&&&117．先进行基因定位作图，确定疾病基因在染色体上的位置，然后克隆该基因的方法属于<font color="#ff．根据疾病基因所编码蛋白质的信息来克隆致病基因的方法属于<font color="#ff．利用疾病与表型相对应的原理克隆致病基因的方法属于&&A. RNAi&&&B.&反义链&&&C.&反义DNA&&&&D.&反义RNA&&&&E.&有义链<font color="#ff．能与特定DNA或RNA互补结合的DNA片段叫&<font color="#ff．由短双链RNA诱导的同源RNA降解的过程叫&<font color="#ff．根据RNA序列人工合成的互补RNA属于&&A. dNTP&&&&B.&引物&&C.&总DNA &&&&D.&Taq&DNA聚合酶&&&E. Mg2＋浓度<font color="#ff．PCR反应中的底物是&<font color="#ff．可作为PCR反应模板的是&<font color="#ff．PCR反应中的聚合酶是&<font color="#ff．决定PCR扩增特异性的成分是&<font color="#ff．提高PCR反应中聚合酶活性的成分是&&A.&限制性核酸内切酶&&&&&&&B. DNA连接酶&C. RNA聚合酶&&&&&&&&&&&&&D.&反转录酶&E.&Taq&DNA聚合酶<font color="#ff．能识别回文序列的是&<font color="#ff．又称为RNA指导的DNA聚合酶的是&<font color="#ff．能耐热，主要用于PCR反应的是&&X型题<font color="#ff．可用作克隆载体的DNA分子有A.&染色体DNA&B.&病毒DNA&C.&质粒&&D.&噬菌体DNA&E.&线粒体DNA132．&DNA重组技术的基本过程包括A.&目的基因的获取&&B.&克隆载体的选择&C.&目的基因与载体的拼接&&D.&重组分子导入受体菌&E.&重组分子的鉴定与扩增<font color="#ff．重组DNA时，插入的外源基因又称A.&目的基因&&&B.&目的DNA&C.&载体DNA&&&D.&真核DNA&E.&原核DNA134．克隆人DNA时，目的基因可以来自A.&染色体DNA&&B.&病毒DNA&C.&细菌DNA&D.&噬菌体DNA&E. cDNA135．下列参与组成PCR反应体系的有A. RNA引物&&B.&Taq&DNA聚合酶&C. RNA聚合酶&D. DNA模板&E. DNA引物<font color="#ff．基因工程中目的基因的来源可以是A.&化学合成&&B. PCR合成&C.&细胞DNA&&D. cDNA文库&E.&组织DNA137．&DNA重组技术中涉及细菌操作的过程有A.&目的基因的获取&&B. DNA序列测定&C.&目的基因与载体的拼接&D.&重组分子导入受体菌&E.&重组体转化子的筛选<font color="#ff．&DNA重组时，插入的外源基因可以是A.&目的基因&&B.&目的DNA&C.&载体DNA&&D.&真核DNA&E.&原核DNA139．为获得有功能的蛋白质，较理想的表达体系包括A. E.coli表达体系&&&B.&原核表达体系&C.&酵母表达体系&D.&昆虫表达体系&E.&哺乳类细胞表达体系<font color="#ff．人类基因组计划的研究内容包括A.&遗传图&&&&B.&物理图谱&C.&基因组序列图&D.&蛋白质表达图&E.&转录图<font color="#ff．后基因组的研究内容包括A.&测定全部基因组序列&B.&研究基因产物的功能&C.&测定一条染色体上DNA的序列&D.&研究不同组织细胞中基因表达的差异&E.&测定cDNA的序列<font color="#ff．有关转基因技术的正确描述是A.&将目的基因转入胚胎细胞&B.&将目的基因转入胚胎干细胞&C.&将目的基因整合入受精卵细胞核DNA中&D.&基因转移能在同种异体之间进行&E.&基因转移可以在异种动物间进行<font color="#ff．从动物体内去除某种基因的技术称为A.&基因靶向灭活&&B.&基因剔除&C.&基因转移&&D.&基因克隆&E.&基因重排<font color="#ff．人类基因组计划中所用的EST是A.&用于分析转录图&&B.&用于遗传多态性的标记&C.&以基因组DNA为标志&D.&以DNA中碱基对的大小为标志&E.&提取组织中的RNA反转录成cDNA测序后得到<font color="#ff．某个基因中的碱基序列发生突变时，可采用哪些方法测定A.&限制性内切酶水解，观察条带的变化&B.&单链构象多态性分析&C. PCR反应&D.&序列测定&E.&与正常基因进行杂交<font color="#ff．克隆某一目的DNA的过程包括A.&载体的选择&B.&外源基因与载体的拼接&C.&重组DNA分子导入受体菌&D.&筛选并扩增含重组分子的细菌&E.&表达目的基因编码的蛋白质<font color="#ff．&DNA重组技术中，常用到的工具酶是A.&限制性核酸内切酶&B. DNA连接酶&C. DNA聚合酶&D.&反转录酶&E. DNA解链酶<font color="#ff．载体通常包括A.&质粒&B.&噬菌体&C.&病毒&&D. cDNA&&E.&人基因组DNA149．Klenow片段具有→聚合酶活性→外切酶活性→外切酶活性切割、杂交链中未配对的单链部分连接酶活性<font color="#ff．可用于RNA的定性与定量分析的方法包括A. Northern&印迹&&&&&B. RT-PCR&C.&实时RT-PCR&&&&&&D.芯片技术&E. Southern&印迹（二）名词解释&．基因克隆（）2．基因组文库（genomic DNA library）3．cDNA文库（cDNA library）4．转基因动物(transgenic animal)5．基因剔除（gene knockout）6．RNA干扰（RNA interference，RNAi）7．Southern印迹（Southern blotting）8．Northern印迹（Northern blotting）9．反转录PCR（reverse-transcription PCR, RT-PCR）．核酶（）&&（三）简答题&．什么叫载体？载体应具备哪些条件？．基因克隆的基本过程是什么？．原核表达系统与真核表达系统各有何优缺点？．简述法的测序原理。．什么叫技术？简述目前其常见研究路线。（四）论述题．试述基因工程在医疗卫生事业中的主要用途。．试述人类基因组计划与后基因组计划研究的主要内容及它们对医学发展的意义。参考答案与提示（一）选择题题号答案考察的知识点题号答案考察的知识点<font color="#EcDNA文库的概念<font color="#D重组DNA技术的概念<font color="#A分子克隆的概念<font color="#A限制性内切核酸酶的概念<font color="#CDNA连接酶可催化3’，5’-磷酸二酯键生成，连接DNA<font color="#D已知序列信息，可设计特异引物，利用PCR获取目的DNA最方便<font color="#ETaq&DNA聚合酶的特性<font color="#C核酸分子杂交的概念<font color="#A杂交前DNA探针要先变性为单链<font color="#ASouthern blotting的概念<font color="#EDNA聚合酶的种类<font color="#ASouthern blotting的概念<font color="#ETaq&DNA聚合酶的耐热性<font color="#C蛋白质组的概念<font color="#E转基因动物的概念<font color="#BNorthern blotting的概念<font color="#DDNA自动化测序的原理<font color="#EDNA末端终止法测序的原理<font color="#C载体的定义<font color="#E目的基因的概念<font color="#CcDNA文库的概念<font color="#B限制性核酸内切酶的概念<font color="#E基因克隆的基本步骤<font color="#E基因表达常用体系和细胞<font color="#EDNA分子体外连接方法<font color="#D载体的性质<font color="#A转化的概念<font color="#D限制性核酸内切酶的概念<font color="#BDNA克隆的概念<font color="#E克隆的本质<font color="#ARNAi的概念<font color="#C回文结构的概念<font color="#C载体与插入DNA的区别<font color="#E回文结构的概念<font color="#C限制性酶的概念、来源与应用<font color="#D载体的性质<font color="#B基因工程中理想载体的条件<font color="#C载体的特点<font color="#B引物的设计决定待扩增DNA片段的大小<font color="#E反转录酶的用途<font color="#B粘性末端的特性<font color="#D分子克隆的本质<font color="#C载体的基本特性<font color="#EDNA克隆的过程<font color="#DPCR的原理与特点<font color="#C基因组的概念<font color="#CDNA重组体的构建过程<font color="#CDNA克隆的基本步骤<font color="#CSouthern印迹的基本过程<font color="#BNorthern印迹的基本过程<font color="#DWestern印迹的基本过程<font color="#DPCR的基本步骤<font color="#DDNA遗传标记的发展<font color="#A分子杂交法在医学中的应用<font color="#A定位克隆策略在人类医学中的应用<font color="#APCR的基本步骤<font color="#APCR反应的步骤<font color="#B限制性核酸内切酶类型的特点<font color="#E回文序列的概念<font color="#CSanger的双脱氧法测序步骤<font color="#CRNA的结构<font color="#CTaq&DNA聚合酶的特性<font color="#D基因剔除技术的原理<font color="#A逆转录酶的特性<font color="#BWestern印迹的概念<font color="#A物理图谱的概念<font color="#ASouthern blotting的应用<font color="#ARNA聚合酶与启动子的关系<font color="#B反转录的概念<font color="#ADNA转录的特性<font color="#C回文结构的概念<font color="#CDNA聚合酶的应用<font color="#CPCR反应所需的底物<font color="#EDNA探针标记的种类<font color="#A反义RNA的概念<font color="#E核酶的生物学功能<font color="#BRNAi技术的基本程序<font color="#B转基因动物的制备<font color="#E转基因动物的鉴定方法<font color="#E基因定位的常用方法<font color="#ADNA的定量与定性分析方法<font color="#A构建基因组文库需要的工具酶<font color="#B打靶载体的构建过程<font color="#AcDNA文库的概念<font color="#AcDNA文库的概念<font color="#CcDNA的概念<font color="#CSouthern印迹杂交的特点<font color="#E外源基因表达的检测<font color="#BSouthern印迹的杂交步骤<font color="#CRNA聚合酶和DNA聚合酶的聚合方向<font color="#E基因工程中常用酶的用途<font color="#D基因工程中常用酶的用途<font color="#B基因工程中常用酶的用途<font color="#A基因工程中常用酶的用途<font color="#C分子杂交技术的应用<font color="#B分子杂交技术的应用<font color="#A分子杂交技术的应用<font color="#APCR反应中的温度变化情况<font color="#DPCR反应中的温度变化情况<font color="#0CPCR反应中的温度变化情况<font color="#1B转化、转染和感染的区别<font color="#2C转化、转染和感染的区别<font color="#3E转化、转染和感染的区别<font color="#4CRFLP的中文名称&&&&<font color="#5EEST的中文名称<font color="#6BBAC的中文名称<font color="#7ASTR的中文名称<font color="#8DSNP的中文名称<font color="#9D常用载体的容量和特性<font color="#0C常用载体的容量和特性<font color="#1B常用载体的容量和特性<font color="#2A常用载体的容量和特性<font color="#3E常用载体的容量和特性<font color="#4C常用分子杂交方法的概念<font color="#5A常用分子杂交方法的概念<font color="#6B常用分子杂交方法的概念<font color="#7D定位克隆的概念&<font color="#8C功能克隆的概念<font color="#9B表型克隆的概念<font color="#0C反义DNA的概念<font color="#1ARNA干扰的概念&&<font color="#2D反义RNA的概念&&<font color="#3APCR反应中各成分的作用<font color="#4CPCR反应中各成分的作用<font color="#5DPCR反应中各成分的作用<font color="#6BPCR反应中各成分的作用<font color="#7EPCR反应中各成分的作用<font color="#8A基因工程中常用工具酶的特性<font color="#9D基因工程中常用工具酶的特性<font color="#0E基因工程中常用工具酶的特性<font color="#1BCD常用克隆载体的种类<font color="#2ABCDE重组DNA技术的定义<font color="#3AB目的DNA的称谓<font color="#4AE目的基因的来源<font color="#5BDEPCR反应体系的基本组分<font color="#6ABCDE目的基因的来源<font color="#7DE重组DNA的基本过程<font color="#8ABDE目的基因的来源<font color="#9CDE原核与真核表达体系的优缺点<font color="#0ABCE人类基因组计划中的四张图<font color="#1BD后基因组的研究内容<font color="#2BCDE转基因动物的定义及外源基因注入方法<font color="#3AB动物体内灭活基因的技术<font color="#4AEEST的概念及应用<font color="#5ABD单个碱基突变的检测方法<font color="#6ABCDDNA克隆的具体步骤<font color="#7ABCD重组DNA技术常用的工具酶<font color="#8ABC常用载体<font color="#9ABKlenow片段的特性<font color="#0ABCD用于RNA定性与定量分析的方法（二）名词解释．指把一个生物体中的遗传信息（基因片段）转入另一个生物体内进行无性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又称为克隆。2．指含有某种生物体全部基因片段的重组DNA克隆群体。即将原核或真核细胞染色体DNA提纯，用机械法或限制性内切酶将染色体DNA切割成大小不等的片段，插入适当的克隆载体中，继而转入受体菌扩增，由此获得含有众多克隆的基因组DNA文库。3．指含有某种组织细胞全部mRNA信息的重组DNA克隆群体。以细胞总mRNA为模板，利用逆转录酶合成与mRNA互补的cDNA第一链，进而形成cDNA双链，与合适载体连接后转入受体菌扩增，由此建立cDNA文库。4．指应用转基因技术培育出的携带外源基因的动物，是通过gain of function途径研究基因功能的重要手段。将外源基因导入受精卵细胞或胚胎干细胞核内，使外源基因通过随机重组插入受体细胞的基因组中，并随细胞分裂而将外源基因遗传给后代。5．指通过基因同源重组定向地从活细胞的基因组中移除特定基因的过程，是通过loss of function途径研究基因功能的重要手段。．由短双链诱导同源降解的过程，是一种特异的转录后基因沉默现象，可以认为是生物体在核酸水平的免疫反应。7．是DNA定性及定量分析的方法之一，过程为&&提取细胞中的总DNA，用限制性内切酶水解后进行电泳，并转移到硝酸纤维素膜上，用DNA探针与结合在膜上的DNA分子退火形成双链，检测靶DNA的含量。8．是RNA定性及定量分析的方法之一，过程为&&将细胞中的总RNA分子进行电泳分离，并转移到硝酸纤维素膜上，用DNA探针与结合在膜上的RNA分子退火形成双链，检测靶RNA的含量。9．提取细胞总RNA作为模板，由逆转录酶催化生成cDNA。再以cDNA为模板，由一对特异性引物引发，在Taq&DNA聚合酶作用下，通过变性、复性、延伸三步循环，复制生成大量双链DNA片段的过程。．是具有酶活性的，主要参与的加工与成熟。（三）简答题．载体是指能够携带目的基因在宿主细胞内扩增或表达的分子，应具备的条件有复制子。有单一限制性内切酶位点。有筛选标志。表达型载体具备完整的转录单位。．基因克隆的基本过程包括获得目的基因。限制性内切酶消化载体。连接目的基因和载体。重组导入宿主细胞。筛选并扩增获得重组克隆。．原核表达体系的优点培养方法简单、迅速、经济，适合大规模生产。原核表达体系的缺点缺乏转录和翻译后加工机制，表达的蛋白质可能没有生物学活性。真核表达体系的优点①&具有酵母、昆虫以及哺乳动物细胞等多种表达系统。&②&具有转录和翻译后修饰系统，表达获得有功能的活性蛋白。真核表达体系的缺点操作有一定难度，费时、费力。．法的测序原理为双脱氧核苷酸（）在合成过程中代替相应的脱氧核苷酸（）作为底物，不能形成－磷酸二酯键而导致链延伸终止。5．根据特定RNA序列人工合成短双链RNA（siRNA），并将siRNA导入靶细胞，降解特定RNA，使相应的基因表型丧失的技术称作RNAi技术。其基本程序主要包括&(1)确定干扰靶点。(2)构建能够转录生成小发夹RNA（shRNA）的载体。(3)shRNA表达载体转染细胞。(4)检测干扰效果。(5)检测干扰细胞的功能变化。&（四）论述题．基因工程在医疗卫生事业中的主要用途有研究人类基因组的全序列、功能基因组和蛋白质组。人类疾病的基因诊断与基因治疗。人类基因工程产品的开发与利用，如蛋白质药物等。人类遗传病的预防与预测。．人类基因组计划的主要内容包括基因组全序列测定。遗传图谱的构建与分析。物理图谱的构建分析。转录图谱的构建与分析。数据资料的有效收集、储存和分析。人类后基因组计划的主要研究内容功能基因组学。蛋白质组学。人类基因组计划与后基因组计划对医学发展的意义理解基因结构与功能的关系，揭示人类生命活动的奥秘。阐明人类遗传性疾病的致病机理。有助于进行疾病易感性的研究，有效预防疾病。阐明癌症等重大疾病的发病机制。推动药物基因组学的研究，开发新药。
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