世博会上海馆总设计师孙天文：用心理学解读空间 (2)_新浪家居
世博会上海馆总设计师孙天文：用心理学解读空间 (2)
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摘要：他是上海世博会上海馆的总设计师，他的作品屡次获得室内设计大奖，并出版个人专辑《当代建筑与室内设计工作室实录》，他提出了设计的五种环境，将设计与心理学做了巧妙的融合。他就是上海黑泡泡建筑装饰设计工程有限公司总设计师孙天文。采访中，孙天文不仅与...
　　从项目本身出发把握设计心理
　　什么是设计中的心理学？对此，孙天文解释到，不同的环境对人的行为会有不同的影响，设计师正是室内环境规划师，设计师可以通过改变环境来影响人的行为，从而满足这个项目本身的需求。
　　孙天文以莱特的两幅著名作品为例向笔者做了说明。两幅作品中都有露台，同样都有两个悬挑，但一个是表达了一种对幸福生活的向往，另一个却更加刺激了业主征服世界的欲望。再譬如设计一个图书馆，图书馆对人的行为举止有一定要求，所以设计师设计出来的环境一定是符合图书馆本身给人的一个印象，而不是一个像夜总会或者像快餐店一样的图书馆。
　　孙天文指出，很多设计师在做项目的时候最大的一个问题在于他们总是希望这个项目是什么样的然后设计成什么样，而实际上是项目应该是什么样，然后围绕这个项目把它设计成什么样。看似只是切入点不同，但却有本质的区别。前者是站在设计师个人的角度出发考虑问题，而后者是基于项目本身。
　　为什么基于项目本身的设计在孙天文看来才能做出好设计？他举了给我例子，有一次他受业主邀请参观一个大型洗浴中心，男浴区是有一个浴池，浴池主立面是用带年轮的大大小小的原木做的装饰，天花吊了很多丝线，水晶灯在里面穿梭。从浴区到下一个空间就是自助餐厅，这个空间灯光的色温在4000k以上，自助餐厅是两层共享，高度近十米，从墙面、地面到自助餐台都用了白色的大理石，铁艺的椅子也刷上了白油漆，上面放了灰绿色的坐垫。看似是一个充满田园牧歌式的让人感觉放松的洗浴空间，这种风格定位可能是出于业主的要求，也可能设计师本人喜欢这种感觉，然而回归到真正使用者心理层面的感受，刚从澡堂出来，人通常会打一个冷颤，再使用这么高的色温和大量的白色生冷的石材，让人在心理上感觉更冷，这违背了浴室让客人尽量感觉舒服的本意。另外，原木和丝线线帘是吸潮的，时间长了会散发出一种发霉的味道，如果进到一个空间散发一种霉味，客人同样会感觉不舒服。
　　世事洞明皆学问，人情练达即文章。很多室内设计师说，设计的关键就是要满足业主的心理需求。看似是把握了业主的心态，实际上很难说真正满足业主的内在需要。从项目本身考虑做设计，不仅能洞悉业主内心最本质的期望，也充分照顾到了使用者的感受。
　　通过控制环境来影响人心
　　心理学对人更多的是一种潜移默化的作用，如何将隐性的东西运用到具体实践中尤其是室内设计当中？孙天文用自己亲身实践的几个例子向笔者做了解读。
　　孙天文在为一个开发商做的项目中，同一个楼层有一个宴会厅和一个高档餐厅。当时业主就提出了疑问，宴会厅如果组织婚宴，人员过于庞杂，但是高档餐厅的氛围是比较安静的，为了保持它的格调势必不希望让闲杂人员随便出入。然而营业场所又是自由的，不可能阻拦客人，为了解决这个矛盾，孙天文就在宴会厅通往高档餐厅的路上设计了多处转折点，声音是不会转弯的，就解决了高档餐厅过于喧闹的问题。宴会厅的氛围是比较轻松的，但在处理高档餐厅的时候孙天文设计的相对严肃，两个空间的氛围形成了鲜明的对比，这样客人从婚宴厅走进高档餐厅的时候会自然而然的望而却步。
　　再如这个项目中，六楼还有一个小包房，七楼也有一个比六楼大很多的包房。但六楼在规划时被设定为最顶级场所。一般而言包房越大越气派，越小越温馨，但是由于经营需要，这就决定两个包房的氛围要对换。最终，孙天文将六楼小包房设计成内敛的奢华风格，七楼的大包房设计的相对轻松，这样就解决了两个空间先天比例问题，满足了业主的经营需要。
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科目：初中物理
我们可以利用矿泉水瓶做几个小实验来说明一些物理知识．（1）将这个矿泉水瓶立放在水平桌面上，轻轻用力推它的顶部会翻到，但用同样的力推它的底部却会在桌面上滑动，这表明力的作用效果跟力的作用点有关．（2）往空矿泉水瓶内注入少量的热水，摇晃后倒掉并立即盖紧瓶盖，过一会儿发现瓶子慢慢向内凹陷，这表明大气存在压强．（3）在开口的矿泉水瓶侧壁不同高度的地方扎出上、下两个小孔，可以观察到水从两个小孔流了出来，其中下方的小孔流出的水喷的最急，这表明液体内部压强随着深度的增加而增大．
科目：初中物理
生活中处处有物理．我们可以利用矿泉水瓶做小实验来说明一些物理知识：（1）双手挤压空矿泉水瓶可以使瓶子变形，如果施加的力增大，瓶子变形程度就加大，这表明力的作用效果跟力的大小有关；（2）手握空矿泉水瓶并对准瓶口吹气时发出“嗡嗡”的响声同时感到瓶子微微的颤动，这表明一切发声的物体在振动；（3）往空矿泉水瓶内注入少量的热水，摇晃后倒掉并立即盖紧瓶盖，过一会儿发现瓶子慢慢向内凹陷，这表明了大气压的存在；（4）将空矿泉水瓶放倒在水平桌面上，用力向它的侧面吹气它会滚动，但用同样的力向它的底部吹气它却不容易滑动，这表明滚动摩擦小于滑动摩擦．
科目：初中物理
我们可以利用矿泉水瓶做小实验来说明一些物理知识．①在空矿泉水瓶侧壁不同高度的地方锥出上、下两个小孔，往里面倒满水，可以观察到水从两个小孔流了出来，其中下孔流出的水喷得最急，这表明液体的压强和深度有关；②往空矿泉水瓶内注入少量的热水，摇晃后倒掉并立即盖紧瓶盖，过一会儿发现瓶子慢慢向内凹陷，这说明大气压的存在；③双手挤压空矿泉水瓶可以使瓶子变形，如果施加的力增大，瓶子变形程度就加大，这表明力的作用效果跟力的大小有关；④把矿泉水瓶正放在海绵上，海绵下陷，将矿泉水瓶倒放在海绵上，海绵下陷的更明显，这表明在压力相同的条件下，压强和受力面积有关．⑤将空矿泉水瓶放倒在水平桌面上，用力向它的侧面吹气它会滚动，但用同样的力向它的底部吹气它却不容易滑动，这表明在压力相同的条件下滚动摩擦小于滑动摩擦．
科目：初中物理
生活中处处有物理．我们可以利用矿泉水瓶做小实验来说明一些物理知识．（1）双手挤压空矿泉水瓶可以使瓶子变形，如果施加的力增大，瓶子变形程度就加大，这表明：力的作用效果跟力的大小有关．（2）如图甲所示，用一根细绳拉着空矿泉水瓶在光滑的桌面上做匀速圆周运动，空矿泉水瓶的运动状态发生（选填“发生”或“没有”）变化．（3）如图甲，往空矿泉水瓶内注入一定量的水后放在水平桌面上，用手向前一推，瓶离开手后仍能继续向前运动，这是由于瓶和水有惯性的缘故．（4）如图乙所示，将空矿泉水瓶放倒在水平桌面上，用力向它的侧面吹气它会滚动，但用同样的力向它的底部吹气它却不容易滑动，这表明：滚动摩擦力小于滑动摩擦力（选填“大于”或“小于”）．
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PCR引物设计及软件使用技巧张新宇，高燕宁*（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR引物的技巧。在PCR引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524To design PCR primers with Oligo 6 and Primer Premier 5Zhang Xinyu, Zhu Youkang, Gao Yanning(Cancer Institute, Chinese Academy of Medical Sciences,Beijing,100021,China)Abstract: The skill of PCR primer design with software is introduced in this paper. Based on the principal of PCR-primer design, the usage of two kinds of popular primer-design software was reviewed detailedly, including their merit, demerit and usage skills. It is recommended that to use Premier Primer 5 does the usual automatic primers search, but Oligo 6 primers analysis.Key Words: PCR自从1985年Karny Mullis发明了聚合酶链式反应以来，PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一[1]，而引物设计是PCR技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之外的多条带（如形成引物二聚体带），不出带或出带很弱，等等。现在PCR引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。一般来说，专门进行PCR引物设计的专业软件功能更为强大，但使用起来却不太容易。本文将就引物设计原则及软件使用问题进行探讨。1. 引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primer length），产物长度1（product length），序列Tm值(melting temperature)，引物与模板形成双链的内部稳定性(internal stability, 用∆G值反映)，形成引物二聚体(primer dimer)及发夹结构（duplex formation and hairpin）的能值，在错配位点（false priming site）的引发效率，引物及产物的GC含量（composition），等等。必要时还需对引物进行修饰，如增加限制性内切酶位点，引进突变等。根据有关参考资料和笔者在实践中的总结，引物设计应注意如下要点：1. 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应[2]。2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发机率增加[2]。3. 引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A[3][4]。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物[2]。4. 引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大[2][5]。5. 引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有多种方法，如按公式Tm＝4(G+C)＋2(A+T)，在Oligo软件中使用的是最邻近法(the nearest neighbor method) [6][7]。6. ∆G值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端∆G值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间∆G值相对较高的引物。引物的3’端的∆G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应[6]。7. 引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行[8]。8. 对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。值得一提的是，各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难，例如GC含量偏高或偏低，导致找不到各种指标都十分合适的引物；在用作克隆目的的PCR因为产物序列相对固定，引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次，尽量去满足条件。2. 引物的自动搜索和评价分析软件的引物设计功能主要体现在两个方面：首先是引物分析评价功能，该功能只有少数商业版软件能够做到，其中以“Oligo 6”最优秀；其次是引物的自动搜索功能，各种软件在这方面的侧重点不同，因此自动搜索的结果也不尽相同。据笔者的经验，自动搜索功能以“Premier Primer”为最强且方便使用，“Oligo 6”其次，其他软件如“Vector NTI Suit”、“Dnasis”、“Omiga”和“Dnastar”都带有引物自动搜索功能，但搜索结果不是十分理想。要想得到效果很好的引物，在自动搜索的基础上还要辅以人工分析。笔者认为引物设计软件的最佳搭配是“Oligo”和“Premier”软件合并使用，以“Premier”进行自动搜索，“Oligo”进行分析评价，如此可快速设计出成功率很高的引物。22.1 Primer Premier 5.0的使用技巧简介2.1.1 功能“Premier”的主要功能分四大块，其中有三种功能比较常用，即引物设计()、限制性内切酶位点分析()和DNA基元(motif)查找()。“Premier”还具有同源性分析功能（），但并非其特长，在此略过。此外，该软件还有一些特殊功能，其中最重要的是设计简并引物，另外还有序列“朗读”、DNA与蛋白序列的互换（）、语音提示键盘输入（）等等。有时需要根据一段氨基酸序列反推到DNA来设计引物，由于大多数氨基酸（20种常见结构氨基酸中的18种）的遗传密码不只一种，因此，由氨基酸序列反推DNA序列时，会遇到部分碱基的不确定性。这样设计并合成的引物实际上是多个序列的混和物，它们的序列组成大部分相同，但在某些位点有所变化，称之为简并引物。遗传密码规则因物种或细胞亚结构的不同而异，比如在线粒体内的遗传密码与细胞核是不一样的。“Premier”可以针对模板DNA的来源以相应的遗传密码规则转换DNA和氨基酸序列。软件共给出八种生物亚结构的不同遗传密码规则供用户选择，有纤毛虫大核（Ciliate Macronuclear）、无脊椎动物线粒体（Invertebrate Mitochondrion）、支原体（Mycoplasma）、植物线粒体（Plant Mitochondrion）、原生动物线粒体（Protozoan Mitochondrion）、一般标准（Standard）、脊椎动物线粒体（Vertebrate Mitochondrion）和酵母线粒体（Yeast Mitochondrion）。2.1.2 使用步骤及技巧“Premier”软件启动界面如下：其主要功能在主界面上一目了然（按钮功能如上述）。限制性酶切点分析及基元查找功能比较简单，点击该功能按钮后，选择相应的限制性内切酶或基元（如-10序列，-35序列等），按确定即可。常见的限制性内切酶和基元一般都可以找到。你还可以编辑或者添加新限制性内切酶或基元。进行引物设计时，点击按钮，界面如下：3进一步点击按钮，出现“search criteria”窗口，有多种参数可以调整。搜索目的（Seach For）有三种选项，PCR引物（PCR Primers），测序引物（Sequencing Primers），杂交探针（Hybridization Probes）。搜索类型(Search Type)可选择分别或同时查找上、下游引物（Sense/Anti-sense Primer，或Both），或者成对查找（Pairs），或者分别以适合上、下游引物为主（Compatible with Sense/Anti-sense Primer）。另外还可改变选择区域（Search Ranges），引物长度（Primer Length），选择方式（Search Mode），参数选择（Search Parameters）等等。使用者可根据自己的需要设定各项参数。如果没有特殊要求，建议使用默认设置。然后按，随之出现的Search Progress窗口中显示Search Completed时，再按，这时搜索结果以表格的形式出现，有三种显示方式，上游引物（Sense），下游引物(Anti-sense)，成对显示(Pairs)。默认显示为成对方式，并按优劣次序（Rating）排列，满分为100，即各指标基本都能达标（如下图）。4点击其中一对引物，如第1#引物，并把上述窗口挪开或退出，显示“Peimer Premier”主窗口，如图所示：该图分三部分，最上面是图示PCR模板及产物位置，中间是所选的上下游引物的一些性质，最下面是四种重要指标的分析，包括发夹结构（Hairpin），二聚体（Dimer），错误引发情况（False Priming），及上下游引物之间二聚体形成情况（Cross Dimer）。当所分析的引物有这四种结构的形成可能时，按钮由变成，点击该按钮，在左下角的窗口中就会出现该结构的形成情况。一对理想的引物应当不存在任何一种上述结构，因此最好的情况是最下面的分析栏没有，只有。值得注意的是中间一栏的末尾5给出该引物的最佳退火温度，可参考应用。在需要对引物进行修饰编辑时，如在5’端加入酶切位点，可点击，然后修改引物序列。若要回到搜索结果中，则点击按钮。如果要设计简并引物，只需根据源氨基酸序列的物种来源选择前述的八种遗传密码规则，反推至DNA序列即可。对简并引物的分析不需像一般引物那样严格。总之，“Premier”有优秀的引物自动搜索功能，同时可进行部分指标的分析，而且容易使用，是一个相当不错的软件。2.2 Oligo 6.22使用技巧简介2.2.1 功能在专门的引物设计软件中，“Oligo”是最著名的。它的使用并不十分复杂，但初学者容易被其复杂的图表吓倒。Oligo 5.0的初始界面是两个图：Tm图和ΔG图；Oligo 6.22的界面更复杂，出现三个图，加了个Frq图。“Oligo”的功能比“Premier”还要单一，就是引物设计。但它的引物分析功能如此强大以至于能风靡全世界。2.2.2 使用（以Oligo 6.22为例）Oligo 6.22的启动界面如下：图中显示的三个指标分别为Tm、ΔG和Frq，其中Frq是6.22版本的新功能，为邻近6至7个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率。该频率高则可增加错误引发的可能性。因为分析要涉及多个指标，起动窗口的cascade排列方式不太方便，可从windows菜单改为tili方式。如果觉得太拥挤，可去掉一个指标，如Frq，这样界面的结构同于Oligo 5.0，只是显示更清楚了。经过Windows/Tili项后的显示如图：6在设计时，可依据图上三种指标的信息选取序列，如果觉得合适，可点击Tm图块上左下角的Upper按钮，选好上游引物，此时该按钮变成，表示上游引物已选取好。下游引物的选取步骤基本同上，只是按钮变成Lower。∆G值反映了序列与模板的结合强度，最好引物的∆G值在5’端和中间值比较高，而在3’端相对低（如图：）Tm值曲线以选取72℃附近为佳，5’到3’的下降形状也有利于引物引发聚合反应。Frq曲线为“Oligo 6”新引进的一个指标，揭示了序列片段存在的重复机率大小。选取引物时，宜选用3’端Frq值相对较低的片段。当上下游引物全选好以后，需要对引物进行评价并根据评价对引物进行修改。首先检查引物二聚体尤其是3’端二聚体形成的可能性。需要注意的是，引物二聚体有可能是上游或下游引物自身形成，也有可能是在上下游引物之间形成（cross dimer）。二聚体形成的能值越高，越不符合要求。一般的检测（非克隆）性PCR，对引物位置、产物大小要求较低，因而应尽可能选取不形成二聚体或其能值较低的引物。第二项检查是发夹结构（hairpin）；与二聚体相同，发夹结构的能值越低越好。一般来说，这两项结构的能值以不超过4.5为好。当然，在设计克隆目的的PCR引物时，引物两端一般都添加酶切位点，必然存在发夹结构，而且能值不会太低。这种PCR需要通过灵活调控退火温度以达到最好效果，对引物的发夹结构的检测就不应要求太高。第三项检查为GC含量，以45-55％为宜。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高，导致引物的GC含量不能被控制在上述范围内，这时应尽量使上下游引物的GC含量以及Tm值保持接近，以有利于退火温度的选择。如果PCR的模板不是基因组DNA，而是一个特定模板序列，那么最好还进行False priming site的检测。这项检查可以看出引物在非目的位点引发PCR反应的可能性。如果引物在错配位点的引发效率比较高，就可能出假阳性的PCR结果。一般在错配引发效率以不超过100为好，但对于特定的模板序列，还应结合比较其在正确位点的引发效率。如果两者相差很大，比如在正确位点的引发效率为450以上，而在错误位点的引发效率为130，那么这对引物也是可以接受的。当我们结束以上四项检测，按Alt+P键弹出PCR窗口，其中总结性地显示该引物的位置、产物大小、Tm值等参数，最有用的是还给出了推荐的最佳退火温度和简单的评价。由于“Oligo”软件的引物自动搜索功能与“Primer Premier 5”的相类似，并且似乎并78不比后者更好用，在此不再赘述。其实，使用软件自动搜索引物就是让计算机按照人的要求去寻找最佳引物，如果参数设置得当将大大提高工作效率。除了本地引物设计软件之外，现在还有一些网上引物设计软件，如由Whitehead Institute 开发的“Primer 3”等（本网站http://210.72.11.60已引进并调试好该软件，欢迎使用）。该软件的独特之处在于，对全基因组PCR的引物设计；可以将设计好的引物对后台核酸数据库进行比对，发现并排除可引发错配的引物。因此建议经常做全基因组PCR的用户试用。参考文献（References）：(1) H.A.艾得希主编,田丁等译. PCR技术——DNA扩增的原理与应用. 北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1991.(2) 林万明著. PCR技术操作与应用指南. 北京:人民军医出版社,1993.(3) 朱平主编. PCR基因扩增实验操作手册. 北京: 中国科学技术出版社, 1992(4) 郑仲承. 寡核苷酸的优化设计. 生命的化学, ):254~256.(5) George H.Keller Mark M.Manak. DNA probes. 1992.(6) Oligo软件帮助文件(Oligo.HLP).(7) Martin, F.H., Castro, M.M., and Tinoco, Jr. I. Base pairing involving deoxyinisine, implications for probe design. Nucleic Acids Res, 27~8938.(8) Rychlik, W. and Rhoads, R.E. A computer program for choosing optimal oligonucleotides for filter hybridization, sequencing and in vitro amplification of DNA. Nucleic Acids Res, 43~8551.
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