求助离子交换柱纯化蛋白纯化仪的问题

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-09-10 08:23 标签： 蛋白纯化
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【求助】阴离子交换柱再生的问题
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这个帖子发布于7年零141天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用的是DEAE-Sephadex A-25，起始缓冲液为0.01M，pH7.4的PB缓冲液，用完后用2M的NaCl再生。我想不明白的是，如果再次使用，需要用起始缓冲液平衡柱子，那低离子强度的0.01M的PB 怎么能和2M的Cl洗脱下来呢？我把洗脱理解成离子间竞争，是不是错了？
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胶够老的了。离子交换是竞争性洗脱，但你没有理解平衡这个概念。再次平衡时，柱子上是2M的Cl离子吗？非也！只是单个的氯离子和胶上的位点结合而已。在解吸和吸附的平衡当中，缓冲液中没有新的氯离子来支持，它就会逐渐让位于其它负离子。
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原来是这个样子...谢谢~skykiller wrote:胶够老的了。离子交换是竞争性洗脱，但你没有理解平衡这个概念。再次平衡时，柱子上是2M的Cl离子吗？非也！只是单个的氯离子和胶上的位点结合而已。在解吸和吸附的平衡当中，缓冲液中没有新的氯离子来支持，它就会逐渐让位于其它负离子。
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摘要 : 离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成，根据引入解离基团的不同，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。
采用柱纯化蛋白时，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定，可以根据什么来调整洗脱时的离子强度?
离子交换纯化是利用上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成，根据引入解离基团的不同，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各不相同，亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加，而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化，需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白的最恰当的离子强度液不一定一样，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱，纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值，其具体的离子浓度范围可以很大，0.01mol/l到1mol/l，甚至3.0mol/l，PH值的范围液很广。
因为是通过静电引力可逆的结合在离子交换树脂上，要使蛋白与离子交换树脂之间离子键打开，最常用的方法就是加大反荷离子的浓度。不同反荷离子与树脂亲和力是不同的，其强弱关系为： 阳性竞争离子：Ag+》CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子：I-&NO3-&(PO4)3-&CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好，可用另一种亲和力强的离子代替。
离子交换柱属于弱离子交换剂，只有在一定的pH值范围内，才能有离子交换能力。
作者：Snail 点击：次
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离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质，
其具体的离子浓度范围可以很大，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成， 采用柱纯化蛋白时。
其强弱关系为： 阳性竞争离子：Ag+》CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子：I-NO3-(PO4)3-CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好， 柱属于弱离子交换剂，PH值的范围液很广，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱。各种离子对离子交换剂的亲和力各不相同，只有在一定的pH值范围内，天磁，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂，离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质，根据引入解离基团的不同，可以根据什么来调整洗脱时的离子强度? 离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术，最常用的方法就是加大反荷离子的浓度。
要使蛋白与离子交换树脂之间离子键打开，不同反荷离子与树脂亲和力是不同的，甚至3.0mol/l， ，而随离子水化膜半径的增加而降低，0.01mol/l到1mol/l，对具体离子交换纯化，需要主要离子交换剂的选择和处理， 因为蛋白是通过静电引力可逆的结合在离子交换树脂上，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定，洗脱不同蛋白的最恰当的离子强度液不一定一样，亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加，纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值，才能有离子交换能力，可用另一种亲和力强的离子代替。
(责任编辑：tianci)
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本篇文章关键词:离子交换柱,离子交换,纯化蛋白
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【求助】离子交换柱的选择问题
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这个帖子发布于7年零145天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我要纯化蛋白，等电点在5.0左右，是选择阴离子交换柱还是阳离子交换柱？另外，哪里的交换柱效果好？谢谢
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阴离子交换，GE的预装柱即可
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DEAE或Q琼脂糖凝胶都可以.
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chromatography DEAE或Q琼脂糖凝胶都可以.色谱老师，请问选择DEAE的话具体哪种介质的比较好，像DEAE-sephadexA-50；DEAE-sepharose CL 6B这些有什么选择原则吗？要纯化的蛋白在20kb左右，等电点在6.0左右
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DEAE-sepharose FF会更好，它流速比你列的都要快。原则是适合自己就好
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chromatography DEAE-sepharose FF会更好，它流速比你列的都要快。原则是适合自己就好好的，谢谢！
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吃剩的香蕉 好的，谢谢！色谱老师，如果综合考虑价格和分辨率的话，选择哪种阴离子交换树脂比较好，另外缓冲液一般选择Tris吗，PBS怎么样？
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chromatography DEAE-sepharose FF会更好，它流速比你列的都要快。原则是适合自己就好色谱老师，如果综合考虑价格和分辨率的话，选择哪种阴离子交换树脂比较好，另外缓冲液一般选择Tris吗，PBS怎么样？
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阶段洗脱无所谓分辨率，和你的分离条件有关，线性洗脱颗粒细的分辨率就高，那就可选择HP级别的，你说的那两填料都没HP级别，阴柱选择Tris
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chromatography 阶段洗脱无所谓分辨率，和你的分离条件有关，线性洗脱颗粒细的分辨率就高，那就可选择HP级别的，你说的那两填料都没HP级别，阴柱选择Tris谢谢！
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阴离子交换柱，DEAE sepharose fast flow
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