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活细胞染料CFSE在人γδT细胞增殖及分泌细胞因子研究中的应用
目的：1.建立活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluoresceindiacetate，succinimidylester,CFDA-SE，也简称为CFSE)染色流式细胞术检测淋巴细胞增殖的方法。2.应用活细胞荧光染料CFSE染色和流式细胞术检测方法观察不同激活剂包括结核杆菌抗原(Mtb-Ag)激活人外周血T细胞后各亚群的增殖反应动力学。3.观察Mtb-Ag激活人外周血中γδT细胞产生白介素2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)与细胞增殖动力学的相互关系。
结论：1以CFSE标记淋巴细胞，用流式细胞术可有效检测出不同T细胞亚群对不同刺激剂的增殖反应以及增殖动力学。2γδT细胞在细胞因子分泌过程中，主要以产生IFN-γ为主。
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万方数据电子出版社咖啡酸苯乙酯对小鼠免疫功能及脑缺血再灌注损伤的影响--《暨南大学》2008年硕士论文
咖啡酸苯乙酯对小鼠免疫功能及脑缺血再灌注损伤的影响
【摘要】：
体外研究咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠T细胞活化、增殖、细胞周期和凋亡以及胞内Ca~(2+)浓度的影响,探讨其对小鼠T细胞免疫功能的作用;研究CAPE对小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7巨噬细胞系(macrophage,Mφ)的增殖、吞噬功能以及产生一氧化氮(NO)的影响,探讨其对小鼠固有免疫功能的作用;建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,初步探讨CAPE对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用。
以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(concanavalin,Con A)刺激T淋巴细胞活化和增殖,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术结合流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞CD69、CD25的表达情况;Fluo-4/AM染色分析细胞内Ca~(2+)浓度变化情况;CFDA-SE染色法结合流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖情况;碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色分析细胞周期分布;Annexin-V/PI双染法检测CAPE对由地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡的影响。MTT法检测CAPE对脂多糖(LPS)刺激的Mφ增殖的影响;用免疫荧光微球结合流式细胞术检测CAPE对LPS刺激的Mφ吞噬功能的影响;Griess反应试剂盒检测CAPE对LPS刺激的Mφ产生NO的影响。
通过外科手术对小鼠左右侧颈总动脉进行结扎建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型(cerebral ischemia reperfusion injury,CIR/I),在术前30mins给小鼠尾静脉注射不同剂量的CAPE。干湿重法测小鼠脑组织水含量的变化;Griess反应试剂盒检测小鼠血清中NO浓度变化情况;H2DCFDA染色法结合流式细胞术检测小鼠外周血中性粒细胞胞内反应氧族(reactive oxygen system,ROS)水平变化情况。
1.终浓度分别为0.5,1,5,10 mg/L的CAPE对Con A诱导T细胞表面活化标记分子CD69、CD25的表达和细胞内Ca~(2+)浓度有明显的下调作用;CAPE能有效地抑制经Con A刺激48h和72h后T细胞的增殖,其中浓度为10 mg/L的CAPE抑制效果最显著;增加处于凋亡峰的细胞数目,减少处于S期和G2/M期细胞数目;对Dex诱导小鼠胸腺细胞的凋亡起到协同促进作用。
2.MTT法检测结果表明,各浓度组的CAPE均能抑制由LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7巨噬细胞系的增殖作用;吞噬实验结果显示,CAPE能促进静息状态下的巨噬细胞对荧光微球的吞噬作用,但对经LPS活化后的巨噬细胞对荧光微球的吞噬功能起到了明显的抑制作用;不同浓度的CAPE能有效地下调LPS刺激下的巨噬细胞NO的水平。
3.实验结果显示,与伪手术组相比,手术组的小鼠脑组织含水量明显升高,表明手术组的小鼠发生了脑水肿,同时血清中NO和中性粒细胞胞内ROS的水平均明显上升;与手术组相比,CAPE治疗组小鼠NO、ROS的水平以及脑水含量明显降低。
1.CAPE能有效地抑制小鼠T细胞的活化和增殖,并阻止T细胞向进入细胞分裂时相,同时又协同促进由Dex诱导胸腺细胞的凋亡作用,表明CAPE是一种潜在的有效的T细胞免疫抑制剂。
2.CAPE能有效地抑制巨噬细胞的增殖,对巨噬细胞的吞噬功能发挥着双向调节作用;同时下调了由LPS诱导的巨噬细胞的NO的释放水平,提示了CAPE还对固有免疫有一定的调节作用。
3.CAPE作为一种强抗氧化剂在小鼠缺血再灌注损伤中起到了有效的保护作用。
【关键词】：
【学位授予单位】：暨南大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2008【分类号】：R285.5【目录】：
中文摘要4-6
英文摘要6-9
1 咖啡酸苯乙酯的研究背景10
2 CAPE的药理作用研究进展10-12
3 对T细胞体外行为的研究12-16
4 巨噬细胞的功能研究16-17
5 脑缺血再灌注损伤和自由基17-19
6 本课题研究研究的意义和设计思想19
参考文献19-23
第一章 咖啡酸苯乙酯对小鼠T细胞体外行为的影响23-40
1 实验材料23-24
2 实验方法24-27
3 数据分析与统计27
4 结果27-37
本章小结38
参考文献38-40
第二章 咖啡酸苯乙酯对巨噬细胞功能的影响40-51
1 实验材料40-41
2 实验方法41-43
3 数据分析与统计43-44
4 结果44-49
本章小结50
参考文献50-51
第三章 咖啡酸苯乙酯对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用51-59
1 实验材料51-52
2 实验方法52-53
3 结果53-56
参考文献58-59
全文总结59-61
英文缩写词63-65
在学期间发表论文65-66
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京公网安备75号非粘附骨髓源干细胞在急性骨髓型放射病救治中的作用及机制研究--《苏州大学》2010年硕士论文
非粘附骨髓源干细胞在急性骨髓型放射病救治中的作用及机制研究
【摘要】：急性放射病(acute radiation sickness ARS)是受照机体的全部或大部分在数秒至数日内受到≥1Gy的电离辐射所引起的一种全身损伤性疾病。机体受到1-10Gy射线照射后,骨髓等造血组织的损伤是决定疾病发展的基本损伤。主要表现为骨髓造血功能受抑或衰竭,全血细胞减少,加之小血管壁的放射损伤,导致广泛的出血和感染,危及生命。鉴此,减轻造血器官的损伤、促进造血重建是治疗ARS的关键。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)是骨髓造血微环境的主要组成细胞,除本身可分泌许多造血生长因子促进造血恢复外,MSCs可增殖、分化填补受损基质细胞,修复造血和免疫器官微环境,支持造血;同时尚具有器官特异性分化潜能,可以促进ARS后多器官损伤的修复;且由于MSCs免疫原性低,与造血干细胞共输治疗各种血液病时可以降低移植后GVHD的发生率。这些独特的生物学性能使MSCs在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域具有十分广阔的应用前景。近年来,有研究发现除粘附状态的MSCs外,非粘附骨髓细胞(non-adherent bone marrow cells NA-BMCs)中还存在着一种更原始的基质干细胞。此种非粘附骨髓源干细胞(non-adherent bone marrow-derived stem cells NA-BMSCs)常规培养条件下可以分化为贴壁的间充质干细胞(非粘附源间充质干细胞NA-MSCs),而NA-MSCs在一定的诱导条件下可以进一步分化为骨、脂肪、神经等;更有研究者认为NA-BMSCs可能是造血干细胞及间充质干细胞的共同干细胞,其生物学特性及其组织重建的功能有待进一步研究。
鉴此,我们通过反复转移的方法分离人胎儿骨髓中NA-BMSCs,分析NA-MSCs与MSCs的异同点,并建立急性骨髓型放射病小鼠模型,深入探讨NA-BMSCs在急性骨髓型放射病救治中的作用及可能机制。
第一部分非粘附骨髓源干细胞的培养及鉴定
目的观察人胎儿骨髓中是否存在NA-BMSCs,并探讨NA-BMSCs生物学特性及与MSCs的异同点。方法分离人胎儿四肢长骨,冲出骨髓并接种于培养皿,24小时后转移未贴壁的NA-BMCs到新的培养皿中继续培养,共转移四次,首次贴壁的细胞即为MSCs,最后一次转移后所得贴壁细胞即为NA-MSCs。取第7代的两种细胞,MTT法绘制两种细胞的生长曲线,流式细胞仪检测其细胞周期及表面标记物的表达,并分别用油红O及VonKossa试剂盒鉴定细胞的成脂、成骨分化能力。结果反复转移的NA-BMSCs可以不断形成具有贴壁能力的MSCs,并进一步分化为成纤维细胞样细胞并形成集落,即(CFU-F)。NA-BMSCs贴壁后的形态与MSCs极为相似,反复多次传代后仍具有较强的增殖潜能和多向分化潜能;表型分析显示两类细胞均不表达CD14、CD34、CD45等造血细胞表面标志,低表达CD106,高表达CD29及间充质干细胞表面标志CD105、CD73等,并极低表达与移植物抗宿主病相关的因子HLA-DR。然NA-MSCs的生长速度明显快于MSCs,培养13代后仍保持较强的分裂速度;且NA-MSCs具有较高的成骨分化能力。结论人胎儿骨髓中存在NA-BMSCs;NA-MSCs可进一步分化为MSCs,证实骨髓非粘附细胞中存在较MSCs更早期、具有多向分化潜能的干细胞。
第二部分非粘附骨髓源干细胞救治急性骨髓型放射病小鼠的实验研究及机制探讨
目的研究NA-BMSCs在急性骨髓型放射病救治中的作用,并探讨可能的作用机理。方法BALB/c小鼠受8.5Gy一次性全身均匀x线照射后随机分成移植组和照射对照组,移植组小鼠在照后2h内经尾静脉输注含3×106 CFDA-SE标记的人胎儿NA-BMSCs来源的NA-MSCs的细胞悬液0.3ml,照射对照组小鼠在照后2h内经尾静脉输注0.3ml生理盐水。观察小鼠照后60d存活率、不同时间点各组小鼠外周血象变化、骨髓病理变化及骨髓中新生血管形成情况。结果照后60d移植组小鼠存活率(14/21)明显高于对照组(2/21);且与对照组相比,移植组小鼠外周血白细胞计数下降慢且恢复迅速,照后14d左右达最低,照后30d基本恢复至正常水平。照后21d,移植组骨髓增生活跃,骨髓腔内新生造血灶显著多于对照,血管密度(31.7±3.61)亦显著高于对照组(11.2±2.33)。结论人胎儿NA-BMSCs可以促进急性骨髓型放射病小鼠骨髓内新生血管形成,从而改善急性放射病小鼠的造血功能。
【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：R818.71【目录】：
中文摘要4-7Abstract7-12研究背景12-19 一 急性放射病与造血组织损伤12-15 二 间充质干细胞与造血调控15-17 三 非粘附骨髓源干细胞17-19第一部分 非粘附骨髓源干细胞的培养及鉴定19-30 前言19 材料和方法19-22 结果22-23 讨论23-25 附图25-30第二部分 非粘附骨髓源干细胞救治急性骨髓型放射病小鼠的实验研究及机制探讨30-40 前言30-31 材料和方法31-33 结果33-34 讨论34-37 附图37-40结论40-41参考文献41-48缩略词表48-50攻读学位期间公开发表的论文50-51致谢51-52
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“药物洗脱外周血管支架系统”通过CFDA创新医疗器械特别审批
发布时间： 02:18
发布方：弗锐达医疗器械咨询机构
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近日，经国家食品药品监督管理总局审查办公室组织有关专家审查，我省医疗器械生产企业浙江归创医疗器械有限公司的药物洗脱外周血管支架系统和浙江巴泰医疗科技有限公司的紫杉醇洗脱PTA球囊扩张导管通过特别审批申请审查，将按照《特别审批程序（试行）》进行审批。药物洗脱外周血管支架系统由药物洗脱支架和输送器组成，用于治疗髂动脉、股浅动脉和/或近端腘动脉的原发性狭窄或再狭窄病变；紫杉醇洗脱PTA球囊扩张导管为经导丝型（OTW）球囊扩张导管，由尖端、标记环、球囊及药物涂层、导管、导管加强件、导管座组成，适用于对患有股浅动脉和/或腘动脉原发与继发的重度狭窄或闭塞病变患者进行经皮腔内血管成形术。以上两项产品分别是浙江省通过总局创新医疗器械特别审批申请审查的第10个、11个产品。&&