血液dna提取存放时间及方式是否会影响到提取DNA的纯度

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DNA和蛋白质是两种重要的生物大分子物质,它们在生物体的生命活动中发挥着重要的作用。请根据所学知识回答下列有关问题:(1)关于DNA粗提取:①DNA的粗提取过程中,需要去除DNA滤液中的杂质。可选择&&&&溶液使DNA充分溶解,使杂质沉淀。②将以上处理过后的滤液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的&&&&溶液,静置2-3分钟,溶液中就会出现&&&&,这就是粗提取的DNA。鉴定DNA时,可用&&&&试剂,需用沸水浴加热5分钟,观察溶液是否会变为蓝色。③若提取到的DNA含量过低,还可采用PCR技术进行扩增,PCR技术中用到的一种重要的酶是&&&&。(2)红细胞含有大量血红蛋白,常用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行提取和分离血红蛋白。①血红蛋白的提取和分离一般可分四步:样品处理、&&&&、&&&&和纯度鉴定。②实验前取新鲜的血液.取血后一般要在采血容器中预先加入柠檬酸钠,加入柠檬酸钠的目的是&&&&。③通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,该方法的原理是相对分子质量较小的蛋白质扩散进入凝胶内部的通道,通过凝胶柱的路程&&&&,移动速度&&&&;相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外移动,路程和移动速度刚好相反,相对分子质量不同的蛋白质分子因而得以分离。最后经&&&&电泳进行纯度鉴定。⑴①适当浓度的氯化钠&&②酒精&&白色丝状物&&二苯胺&③TapDNA聚合酶(或耐高温的DNA聚合酶)&
本题难度:一般
题型:解答题&|&来源:2013-陕西省宝鸡市高三第三次模拟考试生物试卷
分析与解答
习题“DNA和蛋白质是两种重要的生物大分子物质,它们在生物体的生命活动中发挥着重要的作用。请根据所学知识回答下列有关问题:(1)关于DNA粗提取:①DNA的粗提取过程中,需要去除DNA滤液中的杂质。可选择____溶液...”的分析与解答如下所示:
⑴DNA粗提取的大致过程如下:先将材料加入2mol/L的氯化钠中,根据溶解度的不同,去除杂质,然后将处理后的溶液过滤,加入体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液,使DNA析出。鉴定DNA时,加入二苯胺试剂同时沸水浴加热,溶液会变成蓝色。PCR技术所需要的酶是耐高温的DNA聚合酶。⑵蛋白质的提取和分离一般包括样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定四步。利用凝胶色谱法分离蛋白质的原理:相对分子量大的蛋白质不能进入凝胶内部,路程短、速度快,先到达色谱柱的下端,而相对分子质量小的蛋白质则进入凝胶内部的通道,路程长、速度慢,最后达到色谱柱的下端。可用SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
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DNA和蛋白质是两种重要的生物大分子物质,它们在生物体的生命活动中发挥着重要的作用。请根据所学知识回答下列有关问题:(1)关于DNA粗提取:①DNA的粗提取过程中,需要去除DNA滤液中的杂质。可选择_...
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等考点的理解。
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生物技术在食品加工及其他方面的应用
与“DNA和蛋白质是两种重要的生物大分子物质,它们在生物体的生命活动中发挥着重要的作用。请根据所学知识回答下列有关问题:(1)关于DNA粗提取:①DNA的粗提取过程中,需要去除DNA滤液中的杂质。可选择____溶液...”相似的题目:
下图是利用三倍体香蕉的茎尖培养脱毒香蕉植株的过程示意图。下列叙述正确的是①~③过程中发生了有丝分裂和减数分裂①阶段需要生长素而③阶段仅需要细胞分素①阶段细胞增殖能力强,细胞分化速度快X阶段的细胞高度液泡化,排列疏松而无规则
(22分)将等量萌发的种子和煮沸自然冷却后的种子分别放入甲、乙两个试管中,如下图所示本实验中石蜡油短期内不影响生物的生长)。两试管中均无空气存在。据图分析回答:(1)甲试管放置几个小时后,管内顶部出现气泡,其中的气体成分主要是&&&&;将该气体引入&&&&溶液中,可使该溶液变混浊。(2)甲试管中产生气泡的现象是种子进行&&&&造成的,写出表示这一过程的反应式&&&&。(3)乙试管在与甲试管同样的时间内,试管内顶部未出现气泡,原因是&&&&&&&&。(4)乙试管继续放置几天,一些微生物开始繁殖,导致试管内顶部也出现少量气体,这是这些微生物从试管中的&&&&获得了所需要的营养物质进行新陈代谢的结果。一般来说,微生物所需要的营养要素可归纳成&&&&、&&&&、&&&&、&&&&和&&&&五大类。(5)这些微生物可能的来源是(答出两个来源即可。)&&&&&&&&&&&&。&&&&
下列有关生物技术的说法,正确的是民间常利用酵母菌将豆腐制作成腐乳需借助胚胎移植技术才能获得克隆牛生产香蕉脱毒苗的原理是基因工程单倍体育种过程不涉及脱分化和再分化
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摘要 : 从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择最适合的方法,成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面,层层剥茧,分析最佳的实验方法。
从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择最适合的方法,成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面,层层剥茧,分析最佳的。
1、 全血的采集保存和
I. 用 含抗凝剂的采血管进行采血,抗凝剂一般有EDTA和肝素,EDTA更好一些,不会影响下游的反应,如果没有采血管,也可以自己添加抗凝剂EDTA,提前准 备0.04M的,每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液,颠倒混匀即可。保存于-20℃至-80℃,一般2-3年内均可以提取,保存时间越短,提取的质量越高,最好在2个月内提取。
II. DNA提取方法的选择:全血提取试剂盒一般有离心柱和溶液型两种(比如Qiagen、 Promega、B摒弃酚氯仿手提的方法,时间长毒性大),原理及步骤基本相同。虽然各公司推出了N多型号,让人不知如何去选择,但从原理 和操作步骤看,基本就是离心柱和溶液型两种。一般来说,离心柱(DP1801)的提取纯度高一些,但是处理量小(0.1-1ml)、得率略低;溶液型 (DP2101或DP2201)的提取量大(1-10ml)得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上,一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和 进口差别的时候,很多人以为进口一定比国产的好,我们觉得没有最好,只有更好!在不断的进行试验优化之后,全血试剂盒DP2101或 DP2201开创了第三代技术,不需要蛋白酶K消化,进口的都是要借助蛋白酶K的啊!DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用的麻烦和消化的时 间,而且提取量和稳定性更好。
III. 非抗凝血(凝固血)能否提取?答案是肯定的,而且一点都不麻烦,提取效果和抗凝血没有差别!在你找遍了进口的所有品牌都找不到后,回过头来您才发现原来他就在身边,百泰克的凝固血基因组已经有很多忠实的用户。
2、 全血如何提取
I. 全血过程哪些是RNA降解的因素?
全血中RNA酶是非常丰富的,RNA在没有保护的状态下很 容易降解!哪些是状态RNA不受保护呢,比如红细胞裂解液裂解红细胞的过程,红细胞裂解液是低浓度的平衡盐溶液,没有抑制RNase的成份,这时候RNA 不受保护;DNA酶消化的时候RNA也不受保护,这个时候也没有抑制RNase的成份。
II. 什么样的提取方法更好?
我们在选择方法的时候要倾向于对RNA全程有保护的方法!一般的方法都是先用红细胞裂解液裂解红细胞,然后从白细胞提取核酸,还要经过DNA酶的消化去除DNA,这种并不是最好的方法,过程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最好的方法,将采集的血液迅速加入3倍体积的裂解液RLS&&血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)的裂解液,迅速颠倒混匀。裂解液RLS含有强烈的蛋白变性剂,能迅速变性蛋白,是RNase变性,不能对RNA降解。裂解后的混合液还可以用来运输,以避免RNA降解,这个方法成为博奥生物制作表达谱芯片RNA运输和提取的推荐方法/newsf/8.htm
农药、除草剂、各种污染物、人工合成物等异生物质,对环境和土壤微生物的多样性、种群变化产生明显影响;转基因作物是否发生土壤基因转移的检测,转基因作物的安全性评价等
方面的研究,都需要准确的提取高质量的DNA进行检测!
土壤中可培养的微生物可能不及所有微生物总数的0.3%,常规提取DNA的方法很难提取到DNA,很难把土壤中的腐殖酸去除干净,而微量的腐殖酸就可能导致PCR失败。
目前国际上商用的试剂盒虽然能提取到土壤中微生物的DNA,但由于破碎方法采用玻璃珠或者钢珠破碎,导致基因组断裂严重,影响DNA质量;第二,由于必须购买破碎专用的破碎机或振荡器,增加其使用成本;第三,其试剂盒为了保证DNA纯度,采用了包括玻璃奶、离心吸附柱串联的纯化方式,导致了DNA大量的损失,得率很低,很难真正反映出土壤中微生物的多样性。
百克推出的土壤基因组DNA快速提取试剂盒(DP4001)采用创新技术,摒弃了机械破碎细胞的方法,采用酶法破碎,保证了基因组的完整性,摒弃了玻璃奶、离心吸附柱串联纯化DNA的方式,极大的提高了DNA的得率,几乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出来,能真正反映土壤中微生物的多样性!
作者:青岚 点击:次
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