ELISA试剂盒实验OD值的范围-技术文章-上海酶联试剂盒检测测定中心（上海酶联生物科技有限公司）
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ELISA试剂盒实验OD值的范围
实验OD值是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，1OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。实验最后步骤中OD值的范围也是有一定讲究的，不容小觑。说到OD值范围，我公司业务员在售后问题的处理过程中也常会有客户咨询其范围是多少。其实是不一定的，我们以A&ELISA为例，2以上就会偏饱和，变化不容易做出来，所以一般把model组控制在0.8-1.5，而control组的话基本跟空白差不多，不到0.1。所以，一般情况下我们会建议先做个标曲以及样品的梯度稀释，然后选择在标曲中间位置的样品稀释度作为以后的参照稀释度。同时，也与使用的detector有关，detector有自己的检测范围和线性范围。如果实验室使用的仪器，说明书上说检测范围是0~4，线性范围是0~3，但我们自己的实验结果显示最好的线性范围是0~2OD。如果只检测空白的没有经过处理的Elisa孔，大致在0左右。HIV抗体ELISA法测定中空白OD值大于阴性对照OD值是什么原因,单波长下和双波长下测定无明显改变空白做的是试剂空白，不加酶,只加显色剂和终止液,阴性对照是试剂盒提供的不用稀释。450nm下测定和450/630nm下测定空白，没明显差别。
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hiv检测中od值多少是被感染？
健康咨询描述：
此外我第二周hiv检测od值就0.077,s/co值0.161，那按这两个值推算cutoff值为0.478，但cutoff值不是0.18吗？我第二周od就这么高是不是可以确定感染了？为什么我的s/co是0.161？谢谢。
曾经的治疗情况和效果：
想得到怎样的帮助：为什么我2周od值就0.077了，s/co0.161,这样我的cutoff值0.478，而这个cutoff值不是临界值0.18的吗？
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擅长: 艾滋病,梅毒,性传播疾病
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&&&&&&病情分析：&&&&&&你好，你现在检查的OD值0.161这个是正常的，这个值大于1以上还是阳性。你这个没有感染的&&&&&&指导意见：&&&&&&不管你的OD值是多少，现在这个值小于1就是判断阴性，就是没事，你不要对号入座，你现在检查的2周结果，你还需要检查6周的结果。
od值是0.077啊，0.161是s/co，可这样算出我的cutoff值是0.478，可cutoff值应该是多少啊？
20:59医生回答：
你的值0.478这个值也是阴性，大于1才是阳性。
可是cutoff值不应该为0.18吗？那医院是怎么计算我的s/co的呢？
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如遇紧急情况，请致电400-第二章&HIV抗体检测(转载，节选)
常规HIV抗体检测的方法和程序
HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。
HIV抗体检测筛查试验
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
&&& 5.1.2.1
常用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA）
目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主，国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定（第四代ELISA试剂）用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4~9.1d。其优点在于能同时检测抗原抗体，降低血源筛查的残余危险度。
&&& 5.1.2.2
快速检测（RT）及其它检测
随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测（VCT）的迫切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种：
（1）明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD
PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA）注册批准；HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。
（2）斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）：以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10
min以内，使用抗原量少。
（3）斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在10?30min内判读结果。
（4）艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIV
IgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法（WB）试剂已经美国FDA批准。
（5）其它快速筛查试验方法：家庭HIV检测（Home Access System）等。
&&& 5.1.2.3
尿液HIV抗体检测
1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂，我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。
根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测（复检）。
&&& 5.1.3.1
初筛试验：以第三代ELISA（双抗原夹心法）为例。
（1）实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18?23&#8451;), 按实验室SOP做好试剂准备。
磷酸盐缓冲液：若液体内有结晶,应放置在37&#8451;直至溶解，用蒸馏水1：25稀释浓缩液，4&#8451;保存2周。
TMB底物液：使用前配制，TMB液和过氧化脲液等量混匀。
&&& 1M硫酸终止液：85
ml蒸馏水中加入5 ml浓硫酸。
备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
（2）实验操作
&#9312;装好所需使用数目的孔条,每孔均加入100μl样品稀释液。设3个阴性对照孔，1个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。
&#9313;每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物球，以免堵塞洗板机孔。可震摇15S，37±2&#8451;孵育60±5min。
&#9314;置洗板机上洗涤6遍（用洗液将反应孔完全加满,静置30?60S,共洗涤6遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干）。
&#9315;每孔加入100μl底物液，勿搅动，室温避光孵育30±2min。
&&& &#9316;每孔加入100μl
1M硫酸终止反应，充分混匀。
&#9317;在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长450/630nm测OD值。
（3）实验结果
&#9312;阴性对照（NC），HIV-1阳性对照（PC1），HIV-2阳性对照（PC2）
必须＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，计算NC平均值。
NC界限范围：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。
&#9313;符合以下条件的实验成立：
两个以上的NC可用。
&&& PC1-NC均值 ≥
0.4，PC2-NC均值 ≥ 0.4
&&& &#9314;Cut off值 =
阴性对照均值 + 0.100
小于Cut off为阴性，大于或等于Cut off为阳性
（4）报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。
&&& 5.1.3.2
复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见图1）。
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TITLE="第二章&HIV抗体检测(转载，节选)" />
初筛试验结果的报告
对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告（可用附表1）；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1）。
初筛试验呈阳性反应样品的转送
如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV抗体复测送检单”（附表2），经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。
对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。
HIV抗体确认试验
确认试验的试剂
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。
确认试验方法
包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK
HIV&#8546;）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。
文章来自中华检验医学网（），原文地址：
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以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。林丽华1&& 罗宏活2(1 福建省三明市妇幼保健院&
三明市疾控中心&& 365001)
&&&&&&& 一、资料
&&&&&&& 某女，25岁,于日到三明市妇幼保健院接受婚前医学检杳,通过妇检已孕16+5，以下称孕妇，在HIV初筛实验室检测抗HIV抗体阳性，实验室所用的方法是酶联法（ELISA）试剂由英科新创生物试剂公司提供的抗HIV抗体1+2双抗原夹心法(批号:,有效期:)检测结果：初筛实验HIV抗体阳性（OD值为3.05,SMCO值为20.21）, 随即采用丽珠生物试剂的抗HIV抗体1+2双抗原夹心法 (批号:,有效期:)进行检测,结果为阳性（OD值为1.37,SMCO值为6.24）,采用胶体金免疫层析试验结果阳性,实验过程严格按规范操作，标本没有溶血、黄疸、脂血。1月11日用以上方法对重采的血标本进行检测，结果：抗HIV抗体为阳性。 按规定取2毫升的血清送到三明市疾控中心（简称CDC）抗HIV抗体确认实验室做抗HIV抗体确证检测，（该实验室是福建省疾控中心指定的抗HIV抗体确证实验室）检测，结果：用ELISA试验检测抗HIV抗体阳性，用免疫印迹（WB）检测，结果为不确定，建议四周后复检。初查及随访复查的结果见表：
&&&&&&& 受检者HIV抗体的检测结果&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&&&& 为排除孕妇的自身免疫性疾病，进行其它项目的检查：自身抗体检查ELISA法检测ANA(抗核抗体)阴性、抗线粒体抗体阴性、胶体金试验检测抗一dsDNA(抗双链DNA抗体)阴性、试剂由美国HOPE公司提供；乳胶凝集试验检测RF(类风湿因子)阴性、试剂英科新创生物试剂公司提供，因此排除有其它疾病及自身免疫性疾病。进行随访该孕妇产后42天再到三明市妇幼保健院抽取5毫升静脉血，用英科新创生物试剂公司的抗HIV抗体1+2双抗原夹心法（ELISA）进行HIV抗体检测结果为阴性。送到（CDC）HIV确认实验（WB）法检测不再出现P24条带，结果为阴性。
&&&&&&& 二、讨论
&&&&&&& 1.本文1例孕妇HIV抗体假阳性属于孕期的假阳性，特别是使用ELISA检测法影响更为明显，文献报道：其原因可能为间接法测抗HIV试剂盒中所用的酶标记抗人IgG可与非特异性吸附的IgM或RF、ANA等自身抗体结合,导致假阳性的产生［1］。引起假阳性的原因是多方面的，[1]主要包括：（1）个人身体原因，如一些特殊体质、过敏体质、孕产妇，容易产生非特异反应。我们在日检常测中就遇到过。（2）感染其他疾病，如HBV、HCV、梅毒等，可能会造成一些非特异的交叉反应。（3）试剂原因，因为任何一种试剂都难以达到100％准确。（4）操作原因，如操作中的交叉污染。因此，在日常检测中要引起重视，慎重出报告，避免给孕妇带来紧张情绪。
&&&&&&& 2.HIV抗体筛查呈阳性反应的标本由于存在假阳性的可能，必须做确认试验。国际上有3种确认试验方法，包括免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验及免疫荧光试验，目前以免疫印迹试验最为常用。确认试剂必须经SDA注册批准。免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型，按《规范》要求，一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，根据《规范》中判定免疫印迹试验结果的基本原则并参照所用试剂说明书综合判定，无HIV抗体特异带出现的报告HIV抗体阴性；出现HIV抗体特异带，符合HIV-1抗体阳性判定标准，则报告HIV-1抗体阳性。如出现HIV-2型的特异性条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做单一的HIV-2型抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应的则报告HIV-2抗体血清学阳性，如需鉴别应进行核酸序列分析。如果出现HIV抗体特异带，但带型不足以判定为阳性，则判为HIV抗体不确定。对HIV抗体不确定者应按《规范》要求进行随访，必要时可做HIV-1P24抗原或核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。
[1]袁克宇，伏春琴，蔡红军.ELISA法检测抗-HIV假阳性原因探究.中国输血杂志，）：246-247.
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