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肝胆肿瘤细胞中urvivin和oct-4基因表达相关性及调控机制的研究.pdf 71页
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肝胆肿瘤细胞中urvivin和oct-4基因表达相关性及调控机制的研究
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肝胆肿瘤细胞中Survivin 和Oct-4 基因表达
相关性及调控机制的研究
The investigation of relationship regulation
mechanism between the level of survivin/Oct-4
expression in Hepatobiliary Cancer Cells
项目来源：
国 家 科 技 重 大 计 划 新 药 创 制 项 目
国家自然科学基金 (No.,
Significant
Technology
Creation(No.-235)
National Natural Scientific Foundation of China
（No., No.)
背景与目的
细胞凋亡是所有组织用来去除受损或多余细胞的必要生理过程。在对恶性肿瘤的深
入研究中，人们发现正常上皮细胞的存活需要细胞外基质(ECM)的支持并给予存活信
号。若上皮细胞脱离了ECM ，细胞则会发生凋亡，这种形式的凋亡被称为失巢凋亡
(Anoikis) 。上皮来源的恶性肿瘤细胞发生转移的主要原因是由于迁移的过程中丧失了失
巢凋亡(Anoikis) 的特性。正是这一特性的丧失，使脱离了实体肿瘤的恶性细胞逃脱了发
生凋亡的命运而继续存活，并进一步发生迁徙、浸润，形成转移瘤和异位癌。这一过程
与胚胎着床发育的过程极其相似，发生这一现象的肿瘤细胞在一定程度上具有了与干细
胞类似的某些生物学特性。
干细胞特异性基因Oct-4 属于POU 转录因子家族，在维持干细胞的未分化状态和调
节干细胞的分化过程起着关键性作用。胚胎形成过程中，一旦Oct-4 基因表达异常，就
会影响胚泡内层细胞团发育，最终导致胚胎死亡。体外培养的细胞，通过单一因子Oct-4
基因的诱导表达，已成功转变为多能性干细胞。同时，Oct-4
基因在多种恶性肿瘤的起
源中起着一定作用。将Oct-4 基因导入3T3 细胞后，可以使部分细胞向恶性转化，并且
Oct-4 基因可能通过激活和上调其下游靶基因的表达，导致多种肿瘤的发生。
Survivin，凋亡抑制蛋白家族（IAP ）的一员，能够结合凋亡效应蛋白caspases 并调
节其功能，从而阻断凋亡过程。它在促进细胞增殖、抑制凋亡的平衡中起着重要的调控
作用，也是生殖细胞产生与增殖、肿瘤转移浸润过程中基质黏附、新血管生成、上调原
癌基因表达的重要调节因素，已成为靶向肿瘤基因治疗的重要目标之一。
现有实验证实：敲除survivin 基因可导致妊娠4～5 天后的小鼠胚胎死亡。在降低小
鼠胚胎细胞OCT-4 表达时，Survivin 基因启动子的活性会显著下降。而在肿瘤细胞株中
Survinvin 和Oct-4 之间的是否存在同样关系尚未有报道。本课题基于此，着重探讨肿瘤
细胞中Survinvin 和Oct-4 基因表达的调控机制。
方法与结果
本课题分为以下几部分研究内容：
研究一：腺病毒重组质粒pSurv-shRNA 的构建
方法：在腺病毒载体的基础上，引入Survivin基因启动子，构建的腺病毒 shRNA
载体，测序正确后，用293T细胞进行重组，TCID50法测定病毒滴度。
结果：重组腺病毒质粒pSurv-shRNA 经酶切、测序鉴定正确，重组病毒滴度达到后
续试验要求。
研究二：肝胆肿瘤细胞转录因子Oct-4 的表达对Survivin 抗凋亡作用的调控研究
方法：对临床原发性肝癌、胆囊癌、胆管癌标本Oct-4 和Survivin 的表达进行免疫
组化鉴定；进一步建立肝癌、胆囊癌、胆管癌细胞系EHBH-H1 、EH-GB1 和EH-CA1，
利用腺病毒携带Surv
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SIRT1在乳腺癌中的作用
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[1] Acta Neurochir Suppl. -4.
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