安捷伦安捷伦高效液相色谱仪仪1260进样品,没有峰出来,换了同种型号设备进样又有样品出峰,这是什么原因

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仪器名称:Agilent 1220 HPLC,安捷伦液相色谱仪
英文名称:Agilent 1220 Infinity LC,Agilent 1260 HPLC System
国产/进口:进口
产地/品牌:美国,安捷伦,Agilent,一体式液相色谱仪,二手HPLC
型号:Agilent ,Agilent &
参考报价:www.PuDi.cn
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本半年点击数:126
产品类别:
&全新Agilent 1220 /&1260 HPLC,安捷伦液相色谱仪
Agilent 1220 Infinity LC,Agilent&1260 Infinity,液相色谱仪
安捷伦Agilent 1220 Infinity 液相色谱系统是一款无限超值、高质量的液相色谱系统,适用于日常标准分析,使正常运行时间最长、维护最少、您的投资回报率最高。它可满足采用标准 HPLC 方法进行常规分析的小型和中型实验室的需要。Agilent 1220 Infinity 液相色谱系统优化了仪器性能,同时降低液相分析的复杂程度。 作为 1200 Infinity 系列产品的一员,它能为您提供行业领先仪器的优异品质和性能, 您可以选择轻松拥有、集成式、一体化三种配置。升级方式 && 硬件和软件 && 高度灵活,是一款面向未来的系统。
优化的常规分析效率 && 超乎寻常的准确度、卓越的精确性,适合您所有的日常分析应用,包括那些必须符合法规要求的分析应用
行业领先的质量和长期运行的 Agilent 1200 Infinity 系列的可靠性
具有竞争力的价格和较低的购置成本
每套系统的最终配置在出厂之前都经过了严格的测试,因此它们启动快速、无故障
硬件选择:单元泵或梯度泵、手动进样器或样品瓶自动进样器、柱温箱和可变波长检测器。选件:1200 系列示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器,或安捷伦 6000 系列单四极杆质谱仪
优化设计后的泵,最大压力高达 600 bar,充分显示了小颗粒填料色谱柱的分析能力和优势,从而优化了分离度并加快分析速度。
单元系统配置
& & & & & & & & & & & & & & & &梯度系统配置
手动进样器
手动进样器
自动进样器
可变波长检测器
可变波长检测器
可变波长检测器
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上海普迪生物技术有限公司
地&&址:上海市张江高科技园区蔡伦路720弄1号楼
电&&话:021-885860
服务热线:400-822-1170
上海普迪生物技术有限公司2010年注册成立于张江高科技园区,是一家专业从事生物化学试剂研发、生产、销售和技术服务的高科技生物技术公司。
公司主要业务包括DNA/RNA合成仪、基因测序仪、定量PCR仪、HPLC、LC/MS等实验室仪器、核酸合成试剂、HPLC高纯溶剂等,并提供核酸合成服务、全基因合成服务、基因测序服务等。
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安捷伦液相色谱仪的常见故障及解决方法
格图科技有限公司
安捷伦液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。由于安捷伦液相色谱仪HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。但是由于人员素质&样品的性质以及仪器本身等方面的原因,&常常出现这样那样的分析故障严重影响了正常的生产分析。所以掌握一种准确、快速的排除仪器故障的方法非常重要。
安捷伦液相色谱仪的常见故障及解决方法:
& 可能原因:(1).缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;
&&&&&&&&&&& (2).样品污染沉积;
&&& 处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下&降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,换成甲醇冲洗,接着用甲&醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子,再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
& 可能原因:(1).泵密封垫圈磨损;
&&&&&&&&&&& (2).大量气泡进入泵体。
&&& 处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
& 原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。
& 处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
& 可能原因:(1)、色谱柱被污染;
&&&&&&&&&&& (2)、柱头填料塌陷;
&&& 处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的&长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第&二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈&钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
5.重复性差
& 可能原因:(1)、进样阀漏液;
&&&&&&&&&&& (2)、加样针不到位;
&&&&&&&&&&& (3)、液量不足;
&&& 处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态&转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未&用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
&6.其他原因及处理方法
可能的原因
基线噪声大
随机性- 污染物积聚冲
冲洗柱;净化样品;使用HPLC&级溶剂
连续性- 检测器灯故障
更换紫外灯(寿命为1000&小时)
偶然性- 外部电气干扰
使用LC&系统专用稳压器
样品量过大
进样量应为流动相进样量的1/6
样品量过大
进样量应为流动相进样量的1/6
进样溶剂过强
使用较弱的进样溶剂或流动相
更换并使用0.5&&m&孔隙率的在线过滤器
柱有空隙或气沟
用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱
进样器流路不通畅
更换进样器转子
柱头有空隙
使用填料或玻璃珠填充柱顶部
柱上样品超载
使用更高负载量的固定相 增加色谱柱内径 减少样品量
单峰- 存在干扰性组分
净化样品;预分离
开始出双峰
请参见双峰
存在未扫的死体积
减少接头的数量 确保进样器密封垫紧密 确保接头正确固定
碱性化合物- 硅醇相互作用
换成聚合物固定相
碱性物质- 硅醇相互作用
使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺
硅胶基- 柱降解
使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻
进样量过大
降低进样溶剂的强度以集中溶质
进样阀中的峰扩散
在进样前/后引入气泡以减少扩散
数据系统的采样速率过低
检测器时间常数低
调节时间常数使之与峰宽匹配
流动相粘度过高
检测器池容积过大
使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器)
注射器体积过大
减少进样量
保留时间长
使用梯度洗脱或较强的流动相
单向阀泄漏
泵密封垫泄漏
更换泵密封
过滤样品;在线过滤器;过滤流动相
过滤样品;在线过滤器;过滤流动相
水/有机系统- 缓冲液沉淀
测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性
保留超出总渗透体积
体积排阻- 特异性相互作用
添加流动相改性剂或更改溶剂
保留时间不断变动
柱温不断变化
使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定
平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或等度洗脱流动相起变化
确信在溶剂改变或梯度结束后至少10&个柱容积通过色谱柱
流动相组分选择性蒸发
减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相
缓冲能力不足
用&20 mM&浓度的缓冲液
在线流动相混合不一致
保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对
冲洗色谱柱以去除污染物
最初几次进样& 吸附在活性部位
用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状态
保留时间逐渐缩短
流速在增加
检查泵以确保正确;否则需重调
柱上进样超载
键合固定相的流失
保持流动相pH&值在2-8.5&间
保留时间逐渐增加
流速在减慢
解决液流中的漏液现象,更换泵密封垫,检查泵的涡流和气泡
硅胶填料的活化点
使用流动相改性剂
键合固定相的流失
保持流动相pH&值在2-8.5&间
流动相组成在变化
确保流动相容器盖好
硅胶填料的活化点
流动相中加竞争碱
硅胶填料的活化点
固定相用更高覆盖度的填充料
灵敏度问题
峰位于检测器线性范围之外
稀释或浓缩使之处于线性区内
最初几次进样&样品在样品池或柱中被吸附自动进样器 流路阻塞
用浓样品处理样品池/柱
自动进样器流路阻塞
检查流量情况,确保无阻塞现象
进样器样品定量管未充满
确保样品池中已充满样品
在样品制品时有关的样品流失
用内标法在制备样品,优化样品制备方法
柱平衡时间减慢(离子对现象)
长链离子对试剂平衡时间慢
使用较短的烷链试剂
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进口安捷伦岛津液相色谱价格当前位置:&&>>&&>>&
安捷伦高效液相色谱仪这价格绝了
以Agilent&1200型液相色谱仪为例按最简单配置:脱气机+四元泵+VWD检测器+手动进样器大约22万左右赠送电脑+打印机+培训名额。额外加装模块:柱温箱2万,自动进样器12万。一整套的安捷伦高效液相色谱仪这价格绝了。不过安捷伦的耗材还是比较贵的,如小进样瓶,保护滤头(白头),试剂入口过滤器,光源灯(紫外,复合光)等。具体的话可以打安捷伦官网上的800电话问一下。&
安捷伦高效液相色谱仪这价格绝了。说起Agilent&1200型液相色谱仪,其操作规程如下:
建立Agilent 1200高效液相色谱仪的操作规程,保证其正确使用。
Agilent 1200高效液相色谱仪的操作与维护。
操作人员和责任人员对本规程的实施负责。
G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器(DAD)、GB16A 柱温箱和一套Agilent 1200 CHEMSTATIONS 软件(软件光盘与说明书原件由工程部保存),打印机。
4.2 在线清洗
若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时,必须要进行在线清洗过程。首先配制好10%异丙醇溶液,经0.45μm有机膜抽滤后,装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内,调整流量为2~3滴/分钟,10%异丙醇溶液必须每周更新。
接通电源,打开计算机,等计算机启动成功后,含四元泵的Agilent 1200高效液相色谱仪系统:从上到下,依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。约30秒钟后,各部件自检完毕,进入待机状态,指示灯为黄色或无色。
双击桌面上的Instrument 1 Online,计算机进入工作站的Method and Run Control操作界面。
画面如下所示。
4.4 安捷伦高效液相色谱仪这价格绝了,色谱条件的设定
4.4.1 方法的编辑
● 在method and run control 状态下,单击“method”选择“edit entire method”,请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。
● 进入method information 在method comments 中输入方法的名称及相关描述,参数设置完毕后单击OK。
● 进入泵参数设置画面,设置泵流速(ml/min),流动相组成,冲洗梯度,停针时间等,参数设置完毕后单击OK。
● 进入column thermostatted method 编辑状态,选择柱温箱温度,设置完毕单击OK。
● 进入VWD编辑状态,选择方法中所需波长、峰宽、响应时间等,参数设置好单击OK。
● 进入signal details 编辑画面,选择下拉菜单中的VWDIA 进行参数设定,点击“DAD”图标,点击“Setup DAD Signals”,在“Signals”下方的空白处输入所需的检测波长,并在前面的方框里画“√”设置完毕单击OK。
● 进入编辑积分表画面,对所需积分的峰斜率、峰宽、峰高、峰面积、肩峰等参数进行设定,设定完毕后单击OK。
● 进入specify report 编辑画面,单击screen 前的方框,设置报告。使其输出结果到屏幕,在calculate 选项中选择percent,在report style 选项中选择short, 单击singnal options 设置打印信号范围,单击OK。
● 进入时间编辑,在data acquisition 和standard data analysis 的复选框中打×,选择好后单击OK,则方法编辑完毕。
● 在method and run control 状态下,单击method,选择save method as 选项,编辑方法名存储。
4.4.2 进样操作
4.4.2.1 调用方法
进入method and run control 状态下,单击选择method 选项,单击load method 选择所要使用的方法。此时系统将根据所选择的方法进行相应的设置。开始前请根据方法对相应的参数例如:泵参数、自动进样器参数、自动进样器恒温器参数设定、柱温箱参数设定、检测波长设定等进行验证是否与方法设置中的一致。
4.4.2.2 自动进样序列的设定
a 单个样品进行分析
在命令栏“Run control”下,选择“SampleInfo……”或单击快捷操作的“一个小瓶”图标,然后单击样品信息栏内的小瓶,选择“Sample Info……”,即打开了样品信息页面,可输入操作者(Operator Name)、数据存贮通道(Subdirectory)、进样瓶号(Vial)、样品名(Sample Name)等信息,单击“OK”,即完成。
b 多个样品连续进行分析
● 编辑新序列:在命令栏“Sequence”下,选择“New Sequence”;然后再在命令栏“Sequence”下,选择“Sample Parameters”,可输入操作者(Operator Name)、数据存贮通道(Subdirectory)等信息;然后再在命令栏“Sequence”下,选择“Sequence Table”或单击快捷操作的“三个小瓶”图标,单击样品信息栏内的样品盘,选择“Sequence Table”,即进入连续进样序列表的编辑,可输入进样瓶号(Location)、样品名(Sample Name)、方法名(Method Name)、进样次数(Inject/Location)、进样体积(Inject Volume)等信息,单击“OK”,即完成。
● 调用已有序列:在命令栏“Sequence”下,单击“Load Sequence” 或直接单击快捷操作的“Load Sequence”图标(左边一文件夹,右边三个小瓶),选定文件名,单击“OK”即可。在对“Sequence Table”改动过后,切记要在“Sample Parameters”中改变保存路径,否则可能会覆盖以前的图谱。
● 指定样品进样:在命令栏“Sequence”下,选择“Partial Sequence”,选中要进的样品瓶号,单击“Run Sequence”,单击“Yes”即可。
4.4.2.3 进样序列的保存
在命令栏“Sequence”下,单击“Save Sequence”或单击快捷操作的“Save Current Sequence”图标(左边一软盘,右边三个小瓶);在path下选择保存路径,在此路径下选择subdiectory输入新文件名,单击“OK”,即完成。
4.4.2.4 平衡柱子
调用相应方法后,将流速改为0ml/min ,待界面变为绿色后,控制面板上显示”ready”,单击控制面板上的"on",再将泵流速慢慢上升至所需流速。此时系统开始按照所设定的方法平衡柱子。
4.4.2.5 HPLC自动进样
在色谱图中可选择"Change"改变所要检测的波长,"Balance"使基线归零,"Adjust"使横纵坐标适应图谱,对于自动进样系统将自动平衡。等仪器准备好,基线平稳,直接点击“START”图标。
4.5 数据分析
4.5.1 谱图的调用
单击桌面上的Instrument 1 offline 打开命令窗口,单击Data Analysis此时在当前窗口左侧将出现磁盘中所保存的文件,在下拉菜单中找到所需要分析的文件并双击打开。或在Instrument 1 online 窗口中点击Data Analysis 按照上述程序操作画面中即出现所调用的色谱图。
4.5.2 积分
先调用所要分析的色谱图,调出后系统将根据方法中所设定的积分选项进行积分。如欲对其中某些参数进行修改,可在命令栏“Integration”下,选择“Integrate Events”或单击快捷操作的“Edit/Set Integration Events Table”图标,此时,在屏幕下方左侧出现积分参数表,右侧为积分结果,在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数,在命令栏“Integration”下,选择“Integrate”或单击快捷操作的“Integrate Current Chromatogram”图标(左边有∫,右边两个峰),仪器即按照新设定的积分参数重新积分,完成后,单击积分参数表上方“Exit and save events to method”的快捷图标(右下角带勾),保存所作的参数修改并退出。
4.5.3 谱图优化
从“Signals”菜单中选择“Signals Options”,如下图所示。从“范围(Ranges)” 中选择“满量程(Full)” 或“自动量程(Auto Scale)” 及合适的时间范围(Time Range)或选择“自定义量程(Use Ranges)” 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。点击“ OK”。
4.6 打印报告
在命令栏“Report”下,选择“specify Report”或单击最右侧快捷操作的“Specify Report Calculation and Print Style” 图标(右下角带叉的报告),根据实际要求选择报告的格式和输出形式等,单击“OK”,即完成。
关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统。
退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机。
关闭Agilent 1200各模块电源开关。
4.8 &Agilent 1200 LC维护保养
4.8.1 色谱柱用完后,柱内应充满溶剂,两端封死(如乙腈/甲醇适于反相色谱柱,正相色谱柱用相应的有机相)。
4.8.2 流动相使用前必须过滤,纯缓冲盐溶液有效期应不超过7天,有机相溶液有效期不应超过1个月。
4.8.3 带seal-wash的 1200,要配制90%水+10%异丙醇,开启seal-wash清洗泵,溶剂不能干涸。
4.8.4 应每周检查溶剂瓶中的溶剂过滤器是否堵塞,堵塞后的处理法方法:将过滤头从组件中取下,在浓硝酸(35%)中浸泡1h,然后用二次蒸馏水冲洗干净。
4.8.5 Agilent 1200LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相,及时合理的维护非常重要,方法如下:
4.8.5.1 流动相使用前请必须脱气、过滤。
4.8.5.2 使用缓冲盐时,要加在线Seal-wash选项。
4.8.5.3 关机前,用 100%的乙腈冲洗系统20分钟,然后关泵,(适于反相色谱柱,正相色谱柱用适当的溶剂冲洗)。
4.8.5.4 及时更换Purge Valve内的过滤芯。(当打开Purge Valve时,压力高于10bar,表明过滤芯已堵)。
4.8.5.5 使用合适的密封圈。
4.8.6 使用梯度比例时要注意事项:
4.8.6.1 当盐溶液与有机溶剂溶液混合时,盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶,而不会出现沉淀。但是在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,阀A接水相/盐溶液,D接有机溶剂,此法连接可有效使盐回落到盐溶液中,并被溶解。若颠倒过来,盐可能落在有机溶剂中,出现问题。
4.8.6.2 当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时,推荐将缓冲盐通道接在A通道上,有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上;定期用水冲洗所有的通道,以除去阀口上可能出现的盐沉淀。
4.8.7 在线真空脱气机使用注意事项:
4.8.7.1 第一次使用,要用随仪器附带的注射器抽满脱气机腔体;更换不同类型的溶剂时,要先抽空,再抽满。
4.8.7.2 不用的通道要充满溶剂或密闭起来。
4.8.8 更换色谱柱时要注意事项:
  在使用HPLC时,应特别注意“柱外效应”对分析结果的影响,由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低。为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果,仪器的流动相管路连接非常重要,一般Agilent 1200LC 在第一次安装时,均有受过专业培训的安装工程师负责安装,各种接头会处理的非常完美。客户只需在更换色谱柱时注意接头处理就可以了,一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头,柱子出口为不锈钢卡套接头或PEEK管线手拧街头,当完成第一次安装后,不锈钢卡套已固定死,当接不同的柱子时,要注意柱子接头处的形状和长度,否则会产生一个非常大的死体积。
安捷伦高效液相色谱仪这价格绝了,在使用Agilent 1200型高效液相色谱仪时,务必做好使用记录,便于后期跟进:
Agilent 1200型高效液相色谱仪仪器使用记录
色谱柱类型
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