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&伤口愈合／细胞划痕实验新方法－如何划出笔直均一的划痕
伤口愈合／细胞划痕实验新方法－如何划出笔直均一的划痕
作者 jj8879576
& &&&伤口愈合实验是体外研究细胞迁移的一个有用的实验。原理是人为的在铺板的单层细胞中制造一个空白的无细胞的地带，然后对这个无细胞地带的边缘的细胞进行观察；这些边缘的细胞会开始进行迁移活动，并且最终覆盖整个无细胞的区域，重新互相接触在一起。
传统实验方法
& &&&细胞在培养皿内贴壁后，使用移液枪的枪头在贴壁细胞的中间划过，人为造成一道伤口（划痕），之后定时测量划痕的宽度，进而得到伤口愈合的细胞迁移数据。
实验缺点：
1.手动划痕，不能保证每次划痕的一致；
2.有时候在划细胞的同时会刮坏一片细胞，对划痕的边缘的细胞造成机械损伤；
3.如果培养皿底部还有包被蛋白的话，枪头划过，很可能伤害到包被，进而影响到细胞迁移，结果便很难判断是哪个因素造成了决定性的影响。
4.定时测量划痕的宽度，计算划痕宽度随时间推移的变化；在选取划痕测量点时，不可避免地引入了主观误差（人为选取了迁移结果符合实验预期的点）；
& && & 综上，传统的伤口愈合方法总是重复性不佳，对于实验结果的阐述说服力不足。
& && & 下面分享一种新方法，轻松得到笔直均一的划痕！
& && & 使用伤口愈合插件制造笔直均一的划痕（图一）。
[img]http://www.thundersci.com/d/file/Applications1/Islet%20transplantation-03-30/175cefcfe6ac6fd414e40a23a6b8a57c.jpg[/img
实验方法& &&&
一.实验材料
1)细胞:& &&&MCF-7 (ATCC: HTB-22; DSMZ: ACC115)
2)实验耗材:& &ibidi 35 mm培养皿带伤口愈合插件(ibidi, 81176) ibiTreat
3)细胞培养基:&&RPMI (Sigma, R8758) + 10% FCS (Sigma, F0804)
4)细胞消化试剂:&&Trypsin-ETDA (Sigma, 59418C)
5)灭菌镊子
6)倒置显微镜，如果需要进行连续的观测最好搭配镜载加热孵育系统
二.实验步骤
1.铺细胞（图二）
为了获得更好的实验结果，在做实验之前最好进行一次预实验，以确定需要使用的细胞悬液的密度。我们建议，最好将细胞悬液密度调整为24小时后正好可以长满每个插件的小孔。
●将ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带撕除。
●准备细胞悬液，调整悬液浓度为3*105 cells/ml，这样24小时后，细胞能刚刚长满单个小孔。
●在ibidi细胞插件的每孔中加入70μl的细胞悬液。注意不要大力晃动培养皿。以防止细胞不均匀。
●在37。C培养箱中孵育24小时。
图二：A. 去除培养皿底部的保护胶带。B.C.在ibidi伤口愈合插件中加入细胞。
2.形成“划痕”
当所有细胞都贴壁并且刚刚长满的时候，就可以开始伤口愈合实验了。用镊子将伤口愈合插件提出，之后加入新鲜的培养基，或者在培养基中加入刺激剂，然后观察伤口愈合的情况。
●24小时后对细胞前一天种的细胞做镜检。细胞要贴壁并且是刚刚长满每个孔。长得过多移除插件时会带走很多细胞，长得过少，伤口愈合的效果很差。
●如图三所示，小心的用镊子夹住插件的一个角，将插件移除。
图三：用镊子移除插件
●移除插件后，要用显微镜检查是否形成合格的“划痕”（图四）。
●小心的清洗细胞，之后加入2ml培养基进行培养。
图四 笔直均一的划痕
3.采集并分析图像
一般伤口愈合实验都是采集一张“划痕”的初始图像，再在实验结束时候采集一张“划痕”愈合的图像。我们建议可以在这个过程多做几个时间点，这样可以观测到细胞迁移随时间的变化特征。
●在显微镜下选取能同时看到“划痕”和两边细胞的视野进行成像，“划痕”的方向最好在视野内为水平的或者垂直的。
●MCF-7细胞每半小时采集一张图片，一直持续到20小时。
●采用ibidi伤口愈合分析软件，统计细胞的覆盖面积，做出曲线图，可以看到在大约11个小时的时候，细胞基本就已经长满了，接下来几个小时细胞覆盖面积都不会发生变化（图五）。
图五(a)&&显微镜下观察细胞覆盖面积的变化
图五(b)&&细胞覆盖面积的数据统计
实验总结对比
1.本实验方法能得到重复性更好的划痕（图六）；
图六 通过计算划痕的面积可以看出，在多次实验中，枪头划痕（左图）制造的划痕面积数据波动大，重复性差；ibidi伤口愈合插件（右图）制造的划痕面积数据统一，重复性良好
2.不会刮坏细胞，也不会造成划痕的边缘的细胞有机械损伤；
3.不会伤害到培养皿底部的包被蛋白；
图一：左图表示枪头划过后，底部包被蛋白被划伤，细胞迁移结果受到底部不均一的影响。右图ibidi插件移除后底部的包被蛋白没有被破坏。
4.通过计算细胞覆盖面积得出细胞迁移结果，避免人为选取测量点，使数据更客观。1天内就能得到测量结果，实验分析更快更准确。
看上去很不错，哪里有的卖
这个插件是个什么东西，是不是普通的薄片就可以代替？
红果果的广告啊& & 这个东西得2000多一套吧
楼主，您好！非常感谢您的分享！想请教您如何用Image J软件分析实验结果？可以麻烦您教我吗？非常感谢！，这是我QQ号，期待，
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【整理总结】伤口愈合/细胞划痕实验新方法分享
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这个帖子发布于4年零354天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。
基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。特点：1，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。2, 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞
迁移。3，与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。4，研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。传统实验方法实验步骤：1，培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。2，细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。3, 细胞铺满板底后，用1ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）4，吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。5，加入无血清培养基，拍照记录。6，将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。7，根据收集图片数据分析实验结果。德国IBIDI（易必迪）公司Culture Insert方法
1，准备细胞，培养液，culture Insert。2，如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。3，每隔4-6小时拍照记录。4，根据收集图片数据分析实验结果。
实验原理示意图参考文献：A Novel Sialyltransferase Inhibitor Suppresses FAK/Paxillin Signaling and Cancer Angiogenesis and Metastasis PathwaysJ. Y. Chen, Y. A. Tang, S. M. Huang, H. F. Juan, L. W. Wu, Y. C. Sun, S. C. Wang, K. W. Wu, G. Balraj and T. T. ChangCancer Research, 8/.CAN-10-1303总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：
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不知道邀请谁？试试他们
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xytianzhe 编辑于
发个操作视频，让大家看得更直观。不能上传此类型文件。需要的同学回复邮箱地址，发到邮箱给你们。
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Analysis Data Contains:Cell covered areaSpeed of closure (available ≥ 5 images)Acceleration characteristics (available ≥ 5 images)Overview chartCenter piece approximation (available ≥ 10 images)
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xytianzhe 编辑于
自己上传图片之后返回的实验结果。给出每张图片的细胞覆盖面积和划痕面积，一目了然。处理结果的速度也很让我惊喜。刚传上去没几分钟就收到邮件了，效率真的很高。除了划痕实验，这个网站还可以分析细胞趋化，血管生成这两个结果处理比较让我们头大的实验，有需要的同学可以试试哦。有图有真相
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关于丁香园吃什么有助于伤口愈合,长新肉_百度拇指医生
&&&网友互助
?吃什么有助于伤口愈合,长新肉
拇指医生提醒您：问题下方回答为网友贡献，仅供参考。
建议：葡萄糖 糖是人体主要的供能者，供给充足的能量是伤口愈合不可缺少的。在伤口愈合期可多吃含糖丰富的水果，既增加糖分，又能摄取足量的维生素。
蛋白质 饮食中增加蛋白质能促进伤口愈合，减少感染机会。含蛋白质丰富的食物有各种瘦肉、牛奶、蛋类等。
维生素A能够促进伤口愈合。它主要存在于鱼油、胡萝卜、西红柿等食物中。
维生素C可以促使伤口愈合。存在于各种蔬菜、水果中，大枣、辣椒是维生素C的宝库
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如何能让伤口愈合快一些?
来源： 百济药房药讯
作者：百济动态
发布时间： 3:07:00
　　导读：皮肤受伤之后，伤口处理的及时正确，对伤口愈合起到了一个重要的作用。那么，想要让伤口愈合得快一些，有什么方法呢？下面百济护理师将为大家详细介绍一些，可以让伤口愈合得快一些的方法。
　　伤口愈合是指组织对创伤的反应和修复过程。现代研究表明，伤口愈合是一个复杂但有序进行的生物学过程，了解其过程和机理有助于护士决定如何处理伤口和选择最佳的伤口护理方法。从理论上说，伤口愈合可分为3个阶段：炎症期或称渗出期；纤维组织增生期（简称增生期）；形成修复期（简称修复期）。临床实践中又分别简称未清创期、肉芽期和上皮形成期。
　　要想伤口愈合快，受伤者要有好心态.伤口愈合是一个非常复杂的过程，受到很多因素的影响，心理状态也是影响伤口愈合的因素，受伤者有一个好的心态，也能促进伤口愈合。&& 现代伤口护理理论认为：伤口是局部的，但影响是身心整体的。伤口作为一个心理应激源可引起伤者不同程度的心理反应，如伤口疼痛引起的恐惧、紧张、焦虑心理，担心伤口能否如期愈合及是否会留下瘢痕影响功能及美观等。心理学家认为，适度的心理应激反应有助于调动机体免疫系统的功能，但若心理反应过于强烈或担忧、焦虑、恐惧、悲观等负性心理明显时。则会一直机体的免疫功能。已有研究表明，强烈的心理反应和负性心理可导致儿茶酚胺释放，微血管收缩，伤口局部血氧供应减少;同时，肾上腺素，肾上腺皮质激素、生长激素水平升高，可刺激糖原异生，对抗胰岛素作用，从而使血糖升高，并破坏白细胞功能而影响伤口愈合。
　　英国的Anon对&有心理应激&13人的伤口与&无心理应激&13名受伤者的伤口做了观察，结果表明，心理紧张组的伤口愈合时间平均为49天，而对照组平均为39天，两组差异显著。此外，检测两组伤口患者血中的白介素I&浓度，结果心理紧张组的白介素I&明显低于对照组，提示心理紧张对有机免疫系统功能会产生不良影响，导致伤口延迟愈合。尽管负性心理因素导致伤口延迟愈合的研究才刚刚起步，但对伤口护理已具有明确的指导意义，在进行伤口局部护理的同时应做好心理护理，让受伤者以积极的心态配合伤口处理。能够促进伤口愈合过程。
　　伤口愈合是一个多种细胞和分子相互作用的结果，其过程分为若干阶段且不断变化，了解此过程和愈合中的生理学知识，将有助于护士针对不同个体、不同伤口，制订和实施综合性的伤口护理计划，消除不利因素对伤口愈合过程的影响，充分理由可用资源并调动病人的潜能参与伤口愈合过程，对伤口愈合起到积极的促进作用
　　：要想伤口愈合快，伤者要有好心态。我们重视受伤的心理状态，及时发现受伤者的F情绪进行针对性心理护理，使其身心愉快，树立继续治疗的信心，积极配合治疗护理，促进伤口愈合。
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