求助一个一体屏幕手工分离方法法

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-03-22 12:30 标签： 腹直肌分离锻炼方法
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【求助】有关物质方法，解决一个同分异构体的分离
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这个帖子发布于6年零44天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做一个制剂的有关物质的方法，原料供应商质量标准上用的是C8,250mm*4.6mm，5um的色谱柱，流动相：95%ACN，流速：0.5ml/min条件下在主峰RRT0.9处能分离到S-异构体，且与主峰分离度达到1.5。可是我们在重复的时候，无论如何也看不到那个所谓的异构体，如图1，后来我换条件，将条件改成：C18，150mm*4.6mm，3um色谱柱，流动相：95%乙腈流速：0.3ml/min能看到 如图2的色谱图可是这个样子，离分开差得远。怎么样才能做到分离度达到1.5呢？请高手指点。
不知道邀请谁？试试他们
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feixue810316 这个没有做过的只能靠，一般的摸索方法来探讨。首先除非你这个药品本身的溶解性问题，否则流动相没有必要非要用95%的乙腈，来做。有机相比例过大，留下的调整空间就小了。建议你降低流动相的比例，如果峰型靠后，可以考调节流速来调整。首先可以先考察柱温的影响，一般考察到45℃没有明显变化，也就不用考察了。二来，既然是异构体，即使是差向的异构体，单纯只靠乙腈水的比例可能也无法有效分离。建议加入缓冲盐来考察，无非磷酸盐，乙酸盐，离子对。这样就很有可能还好考察缓冲盐pH的影响。这都是一系列的优化。另外，建议最好能拿到那个异构体的纯品，来定位，优化方法，这样目标会更明确。其实，真正的流动相是这样的，Buffer（950mlACN+50ml水+1mlTFA）：水=95：5，我试过降低有机相比例，但分离效果不明显，反而流速的影响更大。柱温是30度，按照以前的经验，柱温越低，分离度会更好，原料药质量标准上柱温是30度，所以，柱温也就没有往上考察。这个API是印度的，我们也准备跟他们沟通，问他们用的是什么色谱柱，包括异构体对照品的事，但是不知道能不能沟通成。
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cappucino008 你买原料厂家没有DMF吗。就算没有也应该从他们索要全套的technical package。这是原料厂家的义务，必须要提供的。上面应该列出详细的分析步骤，具体的柱子型号和厂家，还因该附测试图谱。有一个API厂家过来的Master Copy，里面有API所有质量标准的测试方法，但是对于有关物质测定方法，只写了色谱柱规格，并没有写牌子厂家等信息，也没有图谱，所以现在导致我们在重复的时候遇到困难了。DMF厂家会给你吗？
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hyuke 从你的色谱图来看，这个化合物极性非常弱，也难怪人家用C8柱了，你可以看看用C18出峰有多晚！这么弱的极性流动相用高比例乙腈很正常，标准写错的可能性也很小。但有一点注意，他的流动相里加三氟乙酸了，你加了吗？如果加了，那就想办法跟印度人联系色谱柱的事情吧（如果标准被USP或者EP收载，很多情况都可以直接查到色谱柱，尤其是EP的）。最后，如果联系不上，就多试几根C8柱，C18就算了，出峰太晚。对于C8，根据我的经验，推荐你试一下菲罗门的Luna C8（2），这根柱子的立体选择性很强。谢谢！你分析的很对，这个化合物极性是非常弱，所有的药典里面均未收录这个化合物。流动相里我也加了三氟乙酸的，可能还是C8的品牌跟他用的不一样。其实我一直不明白，为什么都是C8，却能有那么大差别，他能使分离度达到1.5以上，我们却连分开的迹象都看不见，对于色谱柱填料这方面的信息，了解不多。
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关于丁香园求助一个物质分离鉴定的方法（官能团，碎片，单_百度知道
求助一个物质分离鉴定的方法（官能团，碎片，单
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它利用混合液体或液-固体系中各组分沸点不同。4、层析：也叫柱色谱，是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来，使低沸点组分蒸发，再冷凝以分离整个组分的单元操作过程，是蒸发和冷凝两种单元操作的联合。2、重结晶：重结晶是将晶体溶于溶剂或熔融以后，又重新从溶液或熔体中结晶的过程。重结晶可以使不纯净的物质获得纯化，或使混合在一起的盐类彼此分离、萃取：萃取是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的单元操作。其中它是物理化学作用的结果。3常见的提取分离的方法有：1、蒸馏
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请问哪位大侠养过人外周血T、B淋巴细胞？想寻求一下T、B淋巴细胞的分离方法，哪种方法是目前常用方法且分离得到的细胞纯度高？必有重谢！
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活细胞不着色。计数200个淋巴细胞.　离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank&#39。方法:　　1.　在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。　　2.　取肝素抗凝静脉血与等量Hank&#39，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。　　5，加入5倍以上体积的Hank&#39。中层为淋巴细胞分离液，在上。　　3，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟，还含有血小板。　　4.　用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中。计算出活细胞百分率;s液或RPMI1640;s液，下层主要为红细胞和粒细胞;s液或RPMI1640充分混匀.　末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，纯度在90％以上，收获率可达80～90％，活细胞百分率在95％以上目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞，单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带(如下图)，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。　　单个核细胞浓度(细胞数／1毫升细胞悬液)＝　　　　　　　　　4个大方格内细胞总数　　　　　　　　　──────────　×　104×2(稀释倍数)　　　　　　　　　　　　　　4　　6.　细胞活力检测：死的细胞可被染成兰色。　　　　　　　　　　　　　活细胞数　　　　　活细胞百分率＝──────　×100％　　　　　　　　　　　　　总细胞数　　用本法分离PBMC
齐氏生物的试剂盒一般都会有详细步棸方法都差不多，关键自己实际操作还得摸索，费时费力，建议你直接买试剂盒，而且售后服务很周到
网上的方法都一样，照着做，效果不是很好，可以借鉴一下卖细胞的公司，注意点很重要，推荐齐氏生物的，你是哪个区域就直接找哪个区域的经理就行，服务态度不错哦。希望能帮到你
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