求助，关于DGGE制胶鞋子脱胶是质量问题吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-03-22 21:11 标签： 鞋子开胶是质量问题吗
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DGGE（变性梯度凝胶电泳）制胶器问题
最近在做DGGE，制胶器明显出问题啦，是手动的那种，高浓度的都推进去一大截了，低浓度的才开始注入，同样，高浓度的都完了，低浓度的还有好多呢，制出来的变性梯度不行啊，有没有虫友碰见过这种情况？
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引用回帖:: Originally posted by xiadongliang at
注射器 老化了，不好使了。
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我刚买过。 在哪买的呢？方便告诉我一下么，我着急要买，先谢谢了！！
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【答案】应助回帖
苏运芳(金币+1): 谢谢。
手动的制胶器， 是不是卡的地方有问题了？
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调节卡子的高度就可以了。
裸奔进行时...
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DGGE跑胶问题，跑不开请大家指教一下，谢谢啦
这是我最近做DGGE的图，我传几个图，你帮我看看吧，不知道是不是胶配的有问题，还是pcr产物不好，我配胶，去离子甲酰胺是上海生工的，尿素是索来宝的，电压70-90，时间14-11h，胶8%，梯度一般是40-60%，30-60%一直跑不开，很郁闷，请指导一下，谢谢啦
2& &这个情况太诧异了，搞不懂
3& &这个怎么跑不开
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引用回帖:: Originally posted by 摇呀摇 at
19/1e/.gif如果270bp的话8%还是合适的，按说小片段跑出来应该非常漂亮的，而且条带多。DGGE制胶是很关键的，一定要注意，能不能跑好，就看这块胶了。另外，如果你制胶没问题，那么就要考虑PCR ... 怎么看不到你的图片啊，有可能是我配100%胶的时候不准确吧，20mL 40%丙烯酰胺+2mL 50倍的TAE+40mL去离子甲酰胺+42g尿素&&加水至100mL& & 我是在45℃以下，加热溶解的，再定容至100mL，不知道可以不，还有不知道你平时的6倍的buffer和pcr产物的上样量各是多少，我有时是10+20& &有时10+30，不知道你平时是多少啊，还有我们这边蒸馏水坏了，现在洗胶用的是买的桶装纯净水，不是道有没有影响。
有奋斗有人生
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【答案】应助回帖
★ 感谢参与，应助指数 +1Ljyshmily: 金币+1, ★有帮助, 这我知道，我的片段是270的，用的是8%的
首先得确认一下，你的片段是多大的，如果在500bp左右，应该用6%胶浓度，8%的话确实跑不开的。
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ Ljyshmily: 金币+3, ★★★很有帮助, 我的片段是270的，用的是8%的，我制胶的过程有时候梳子底部，是有气泡，也没怎么注意，下次我灌胶的时候注意一下试试，我打算在P一下，再看看，如果不行的话，纯化试试，我做的是沼液污泥中的古菌基因分析，按理来说菌应该很多，因该是没跑开的缘故吧！
16:54:14小丹木木: 金币+2, 鼓励应助
还有，还得再补充一下，看你第一张图片中条带有明显的弯曲，有两种可能，一是你插梳子的时候梳子底部有气泡，导致你的胶孔不平，二是你的胶制作的梯度不均匀，看你各泳道之间水平性较好，应该不是凝胶过快的原因，那可能就是你灌胶速度过快了。另外，如果排除制胶的原因，那么就是你PCR退火温度过低，导致非特异性条带过多，因此跑出来后条带不清晰。还有个问题，你是做的环境基因组吗，问什么条带这么少？
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&如果270bp的话8%还是合适的，按说小片段跑出来应该非常漂亮的，而且条带多。DGGE制胶是很关键的，一定要注意，能不能跑好，就看这块胶了。另外，如果你制胶没问题，那么就要考虑PCR了，退火温度是否合适，引物选择的对不对，体系合理不合理，这些都要注意，另外根据我的经验，其实DGGE不用纯化的。。。，给你看一张我跑的图片，没经过纯化的。
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求助,DGGE切胶后问题
第一次发帖~请大家多多关照~
做DGGE真菌
引物用的FUNG-GC、NS1，结果应该是200多bp
跑DGGE前PCR结果如图最右边两道，得到了目的条带。
之后DGGE切胶，然后再PCR结果发现们没有得到想要的条带，只有一条100多bp的条带了~
请问这是为什么
传不了图片~囧~
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