悬浮细胞爬片片如何使用？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-03-28 05:27 标签： 细胞爬片
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细胞爬片制备详细过程
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细胞爬片、甩片的制备
细胞爬片、甩片的制备
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(一)细胞爬片的制备
(1)如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取，以防破裂。为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多，可以将它们放于专用的金属支架上，然后高压消毒。如果需要的数量更大，则可将其放在耐热的容器中，干烤2小时。
(2)在无菌状态下，把干燥的玻片放于适当的培养皿中。盖玻片可以用金属镊子镊取，圆形盖玻片可以放在24孔培养板的孔中，直径90mm的培养皿能够放入10-15张盖玻片，或者放入一张标准的载玻片。
(3)将悬浮的细胞放入组织培养皿中，培养至少24小时，让细胞贴附在玻片上。要想得到一个较好的结果，在加细胞时，密度应低，以防细胞密度过高。 (4)如果细胞数目有限，可把细胞悬液直接滴在玻片上，静置4小时后再轻轻加入培养液。通过这种方式，大部分细胞将粘附于玻片上，然后再培养约24小时，使细胞适当扩增。此时，取出载玻片或盖玻片可进行固定。
(二)细胞甩片的制备
(1)用PBS洗涤细胞(400×g离心5min)，并重悬于PBS中。调整浓度至1×106 /ml～2×106 /ml；
(2)将载玻片固定于甩片机的转头上，然后加入0.1ml细胞悬液；
(3)迅速使离心力达到1200×g，离心5～10min； (4)使玻片上单层细胞在空气中干燥15～20min。此时，细胞可进行固定。
相关实验方法
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DXY All Rights Reserved.细胞爬片使用前如何处理？_百度知道
细胞爬片使用前如何处理？
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师兄用的晶安生物12孔板细胞爬片是处理好的，拆开即用。
采纳率：60%
将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍，放在饭盒或者培养皿（一定是玻璃的哦，要不然就„„）中烘干后进行高压消毒。
1.取干净的盖玻片（剪去一角，以作为正反的标记）若干，用洗衣粉轻轻擦洗后烤干（注意轻柔，不要留下明显痕迹，方便以后观察细胞）。2.硫酸重铬酸钾过夜。3.取出盖玻片后，用自来水反复冲洗20遍。4.用一蒸水漂洗10分钟，三蒸水冲洗3遍。5.晾干后泡纯酒精过夜（主要是脱脂，也可用95%酒精），用镊子夹出（不能用手去接触玻片，否则应重新泡酒精脱脂），蒸馏水清洗后自然晾干（烤干容易使玻片留下水迹，而晾干的则清新干净）。6.高温高压消毒。
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细胞爬片免疫组化染色操作步骤
细胞爬片免疫组化染色操作步骤
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取出细胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。
蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。
打孔液浸泡 5 分钟。
蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。
注：第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原，检测细胞膜抗原时不用。
正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗体同源动物血清)处理，37 ℃，15 分钟。
附：正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制)：按 1:20比例，用PBS配制，每张切片需要量按 50 μl+5 μl (10%抛洒量) 计算。
滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37 ℃ 2 小时(也可置于 4 ℃冰箱过夜) 。
PBS：5 分钟，2 次(置于摇床) 。
滴加生物素化的二抗，37℃，40 分钟。
PBS：5 分钟，2 次(置于摇床) 。
滴加三抗 (SAB 复合物) ，37 ℃，40 分钟。
PBS：5 分钟，2 次(置于摇床) 。
DAB 显色，镜下观察，适时终止(自来水冲终止) 。
附：DAB 的配制储备液(DAB 25 mg/ml)的配制：DAB 250 mg + PBS 10 ml，待完全溶解后分装成 1 ml，100 μl，50 μl ，20 μl 等，-20 ℃，冻存。② 工作液：DAB 储备液 20 μl + PBS 1000 μl + 3% H2O2 5 μl。
自来水(细水)充分冲洗。
苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗。
自来水冲洗返蓝，15 分钟。
梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟。
二甲苯透明：I ，II (二甲苯)各 5 分钟
封片：加拿大树胶(或中性树胶)封片。
相关实验方法
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