麻醉和镇痛药及人工胶体对Th细胞分化影响的研究工作汇报--《全国第一次麻醉药理学术会议暨中国药理学会麻醉药理专业委员会筹备会论文汇编》2010年
麻醉和镇痛药及人工胶体对Th细胞分化影响的研究工作汇报
【摘要】：目的:辅助性T细胞(helper T cell,Th)对机体免疫的平衡发挥重要作用。麻醉和镇痛药及人工胶体对Th细胞的影响文献较少,为此近年来本团队开展了此方面的研究工作。方法 :采集健康志愿者外周静脉血,分别对吗啡、芬太尼、曲马多、氯诺昔康、舒芬太尼、氯胺酮、丙泊酚、贺斯、佳乐施、万汶依据临床常用剂量设置不同血液稀释浓度,采用随机区组设计。用两种不同方法评估Th细胞的功能分化情况:(1)胞内细胞因子检测:将全血在体外用相应剂量的药物预先培养24h,然后加入刺激剂(氟波醇乙酯、离子霉素及蛋白质转运抑制剂),刺激4h,采用流式细胞技术测定每份样本中Th1及Th2细胞亚群比例,并计算Th1细胞与Th2细胞的比值(Th1/Th2)。(2)分离外周血单个核细胞(PBMCs),经药物预处理24小时后,加入刺激剂植物血球凝集素继续培养48小时,采用流式蛋白检测技术(CBA)检测培养上清中Th1(IFN-?、TNF-?、IL-2)及Th2(IL-4、IL-6、IL-10)型细胞因子的浓度。统计分析采用SPSS11.5软件,组间比较采用随机区组设计方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果:吗啡、芬太尼、曲马多、氯诺昔康均可引起Th0细胞向Th2方向分化,其作用强度依次为吗啡芬太尼曲马多氯诺昔康。舒芬太尼在低浓度时对Th0细胞分化无影响,随浓度增加呈现Th0细胞向Th2分化倾向。氯胺酮对Th1、Th2的分化均有抑制作用,其中抑制Th2明显,使Th1/Th2比值升高。丙泊酚在低、中浓度时对Th0细胞分化无明显影响,但高浓度时出现向Th1分化的倾向。在低浓度时,贺斯、万汶可促使Th细胞向Th1细胞分化,佳乐施作用不明显;在高浓度时,贺斯、万汶抑制Th2细胞的分化,佳乐施对Th1和Th2细胞的分化均呈抑制作用。万汶在两种浓度下均可促使Th1/Th2比值升高。结论:常用麻醉和镇痛药及人工胶体在以临床血药浓度体外培养条件下对Th细胞分化会产生一定影响。
【作者单位】：
【分类号】：R965
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400-819-9993体外研究丙泊酚、硫喷妥钠、咪唑安定对人静脉血辅助性T淋巴细胞分化的影响--《南京医科大学》2007年硕士论文
体外研究丙泊酚、硫喷妥钠、咪唑安定对人静脉血辅助性T淋巴细胞分化的影响
【摘要】：
CD4~+T(Th)细胞在细胞免疫和体液免疫中发挥中枢作用，Th1／Th2不平衡是某些疾病加深加重的根源。我们过去的研究发现镇痛药物吗啡、芬太尼、曲马多、氯诺昔康、舒芬太尼、氯胺酮对Th1／Th2平衡有着不同的影响。麻醉镇静药物在临床麻醉工作中广泛使用，但许多镇静药物尤其是新近使用的镇静药物对Th细胞分化的影响尚不得而知，有必要进行调查研究。
探讨临床不同浓度麻醉镇静药物丙泊酚、硫喷妥钠、咪唑安定对离体人静脉血辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的影响。
采集60例健康志愿者外周静脉血，随机区组设计，分批检测各实验药物对Th细胞分化的影响。参考临床各药物血药浓度分别设低、中、高3个浓度梯度组：丙泊酚组：1μg／ml(P1组)、4μg／ml(P2组)、16μg／ml(P3组)；硫喷妥钠组：4μg／ml(T1组)、20μg／ml(T2组)、40μg／ml(T3组)；咪唑安定组：50 ng／ml(M1组)、150 ng／ml(M2组)、500 ng／ml(M3组)；丙泊酚组加设其赋形剂对照组：0.1μl／m1(I1组)、0.4μl／ml(I2组)、1.6μl／ml(I3组)；同时设空白对照组(C组)。
采用两种不同方法评估药物对Th细胞的功能分化影响：(1)胞内细胞因子检测：体外全血培养，经药物预处理24 h后，加入淋巴细胞刺激剂氟波醇乙酯(PMA)、离子霉素(Ionomycin)及蛋白质转运抑制剂(Glogistop)培养4 h，流式细胞仪检测CD3~+ CD8~- IFN-γ~+或CD3~+CD8~-IL-4~+细胞的百分率变化。(2)细胞膜表面趋化因子受体检测：外周血单个核细胞培养，经药物预处理24 h后，加入刺激剂PHA继续培养48 h，用流式细胞仪检测CD3~+ CD4~+ CCR5~+ CCR3~-或CD3~+ CD4~+ CCR5~- CCR3~+细胞的百分率变化。用流式蛋白检测技术(CBA)检测培养上清中Th1型(IFN-γ、TNF-α、IL-2)及Th2型(IL-4、IL-6、IL-10)细胞因子的浓度。统计分析采用SPSS11.0软件，组间比较采用随机区组设计方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
丙泊酚药物组：(1)胞内细胞因子检测：与C组比较，P3组的Th1亚群比例以及Th1／Th2比值显著升高(P＜0.05)；P1组、P2组、P3组之间比较，P3组的Th1亚群比例以及Th1／Th2比值比P1组显著升高(P＜0.05)。(2)细胞膜表面趋化因子受体检测：与C组比较，P3组的Th1亚群比例以及Th1／Th2比值显著升高(P＜0.05)；P1组、P2组、P3组之间比较，P3组的Th1亚群比例比P1组显著升高(P＜0.05)。(3)细胞培养上清中细胞因子浓度检测：P3组的Th1型(IFN-γ、TNF-α、IL-2)和Th2型(IL-4、IL-6、IL-10)细胞因子水平均较C组、P1组和P2组显著升高(P＜0.05)，P1和P2组的IFN-γ水平也较C组显著升高(P＜0.05)。
丙泊酚赋形剂组：(1)胞内细胞因子检测：与C组比较，I3组的Th2亚群比例显著降低(P＜0.05)。(2)细胞膜表面趋化因子受体检测：与C组比较，I3组的Th1、Th2亚群比例显著降低(P＜0.05)；I1组、I2组、I3组之间比较，I3组的Th1亚群比例比I1组显著降低(P＜0.05)。(3)细胞培养上清中细胞因子浓度检测：I3组的IL-2水平较C组、I1组和I2组显著升高(P＜0.05)。
丙泊酚组与其赋形剂组比较：(1)胞内细胞因子检测：P3组较13组，Th1、Th2亚群显著升高(P＜0.05)。(2)细胞膜表面趋化因子受体检测：P3组较I3组，Th1亚群比例以及Th1／Th2比值显著升高(P＜0.05)。(3)细胞培养上清中细胞因子浓度检测：P3组较I3组，Th1型(IFN-γ、TNF-α)和Th2型(IL-4、IL-6、IL-10)细胞因子水平均显著升高(P＜0.05)。
硫喷妥钠组：(1)胞内细胞因子检测：与C组比较，T2、T3组的Th1亚群比例以及Th1／Th2比值显著降低(P＜0.05)；T1组、T2组、T3组之间比较，T2、T3组的Th1亚群比例比T1组显著降低(P＜0.05)。(2)细胞膜表面趋化因子受体检测：与C组比较，T2组的Th1亚群比例显著降低(P＜0.05)，T3组的Th1亚群比例以及Th1／Th2比值显著降低(P＜0.05)；T1组、T2组、T3组之间比较，T3组的Th2亚群比例比T1组显著降低(P＜0.05)。(3)细胞培养上清中细胞因子浓度检测：与C组比较，T1组的TNF-α水平显著降低(P＜0.05)，T2组的TNF-α、IL-2和IL-10水平显著降低(P＜0.05)，T3组的IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-10水平显著降低(P＜0.05)。与T1组比较，T2组的IL-2和IL-10水平，T3组的TNF-α、IL-2和IL-10水平显著降低(P＜0.05)。与T2组比较，T3组的TNF-α和IL-10水平显著降低(P＜0.05)。
咪唑安定组：(1)各药物浓度组胞内细胞因子检测和细胞膜表面趋化因子受体检测均未见明显差异(P＞0.05)。(2)细胞培养上清中细胞因子浓度检测：Th2型细胞因子，M3组的IL-4和IL-6水平较C组、M1组和M2组显著升高(P＜0.05)；M3组的IL-10水平较M1组显著升高(P＜0.05)。Th1型细胞因子，TNF-α和IL-2水平随着M浓度的增加呈现先升高后降低的趋势；与C组比较，M1组的TNF-α和IL-2水平显著升高(P＜0.05)；与M1组比较，M2、M3组的TNF-α和IL-2水平显著降低(P＜0.05)。
(1)丙泊酚随着浓度的增加，Th细胞呈向Th1漂移的趋势；Th1和Th2各型细胞因子均呈升高的趋势，提示丙泊酚不抑制Th细胞。该作用源于丙泊酚药物本身，并不是其赋形剂。
(2)硫喷妥钠使得Th0细胞向Th2方向分化。同时，随着药物浓度的增加，Th1和Th2各型细胞因子呈不同程度降低的趋势，提示硫喷妥钠对Th细胞存在抑制作用。
(3)咪唑安定对Th细胞分化无明显影响。Th1型细胞因子(TNF-α、IL-2)随着药物浓度的增加呈现先升高后降低的趋势，Th2型细胞因子随着药物浓度的增加呈现升高的趋势，提示在所研究的浓度范围内，咪唑安定可以发挥保护细胞免疫的功能。
【学位授予单位】：南京医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2007【分类号】：R96
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