蛋白质的结晶_图文_百度文库
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蛋白质的结晶
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求解：蛋白纯化中结晶的常用哪几种方法？他们的使用优势和劣势？
提问时间： 06:29:22
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蛋白酶抑制
破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。大豆分离蛋白的提取方法 大豆分离蛋白的提取方法 大豆的蛋白含量较高而且营养丰富，一般含蛋白30%&&50%。大豆蛋白含有8种人体必需氨基酸，且比例比较合理，只是赖氨酸相对稍高，而蛋氨酸和半胱氨酸含量较低。大豆分离蛋白主要由11S球蛋白（Glycinin）和7S球蛋白（&-con-glycinin）组成，大约占整个大豆籽粒贮存蛋白的70%。大豆分离蛋白在提取、加工和贮运过程中会发生物理和化学变化，这些适当的改变可以提高大豆蛋白在食品中应用的功能特性。将脱脂豆粕与蒸馏水以1:10的比例混合，用NaOH调整混合物的pH为7&&9，充分搅拌浸提碱溶大豆蛋白，离心分离，用稀HCI调整上清液的pH值为4.5&&4.沉淀出蛋白质，离心分离，沉淀重新溶于pH7.0&&8.0的NaOH溶液中，喷雾或冷冻干燥即得大豆分离蛋白，其蛋白含量可达90%以上，得率24%&&38%。双极膜由3层组成：阴离子交换膜和阳离子交换膜以及阴阳离子交换膜中间的亲水层。它是根据表面活性的差异，来分离和纯化物质的手段，被广泛应用于环境保护、生物工程、冶金工业及医药工业等许多途径，该技术也是分离和浓缩蛋白质及酶的一条有效途径。
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您可能有同感的问题【求助/交流】做一个蛋白质晶体的成本是多少？_百度知道
【求助/交流】做一个蛋白质晶体的成本是多少？
我们老板在美国的时候做一个蛋白花了六年时间，花了大概几十万美金吧。
容易一点的蛋白，一套做下来周期是 30-90天，花费数万。
困难一点的，比如膜蛋白，做出来就是NSC的文章，据说施一公他们每年买去垢剂的钱就是上百万。
我说的是X-ray。核磁没做过，具体不清楚。段家一凡(站内联系TA)自己顶一顶，希望多讨论讨论月月大可(站内联系TA)偶在生物物理所做结构做了快两年，简单说一下我的看法吧
想做结构一般的具有两个条件：
1、软件：是否具备结构生物学知识。包括晶体学内容和后期结构修正的基础。这需要有很多专业软件去运算。软件的使用和参数的评估是结构修正中最重要的工作。
2、硬件：包括蛋白质纯化、结晶条件搜索、晶体优化和最后的衍射。这都需要配套的仪器和试剂。很多试剂适合长期做的买，单独做一次买一个kit太亏，kit也太贵。
然后我们来看你的蛋白。
首先建议在pdb数据库中比对一下，看看有没有同源蛋白结构已经被解析了。不见得是新家族功能上就全新，可能核心区域很相似。
蛋白小是件好事，一般来说小的会比大的容易一些。
长晶体一般需要大量高纯度的具备生物活性目的蛋白，能不能获得如此高要求的蛋白是第一道门槛。
过了这一关能不能长出晶体又是一关，有些人做的顺利几周就能过了这一关，我属于不顺的人，做了一年多还没能长出来晶体。
然后是晶体长出来后能不能筛选出来适合衍射条件的晶体又是一个难度，同样看运气了。
晶体可以衍射以后确定相角还是一个难度，如果有同源度较高的蛋白，那么用分子置换法能确定，如果没有使用重原子或者硒代甲硫氨酸了。
最后是解结构了，还是运气，顺了那么三两下就出来，不顺…………
我只对X-ray了解这么多，NMR不了解，请其他人介绍吧。
钱没法给你估计。
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Jena Bioscience GmbH是来自多特蒙得的Max-Planck-学院的分子生理学科学家在1998年建立的，公司位于德国的耶拿市。科学家们25年来潜心研究致力于为生命科学领域开发创新型试剂和技术。
自创办起，公司已发展为拥有超过7500个产品库存的全球性的试剂供应商，客户遍布在50个国家。Jena Bioscience为以下客户群提供产品：
1. 大学，工业，政府，医学院的研究实验室
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Jena Bioscience产品包括核苷，核苷酸和类似物，重组蛋白&蛋白生产系统，生物大分子结晶试剂，并为分子生物学和生物化学提供定制服务。所有产品都是按照DIN ISO 9001标准生产的。
了解蛋白质及其复合物的完整、精确和实时的三维结构是结构生物学也是生命科学迫切需要解决的问题，而筛选可结晶的条件是获得蛋白质晶体的主要瓶颈之一。公司提供特殊试剂用于晶体筛选，晶体优化和定相。使得获得一高分辨率蛋白结构从几年减少到几天的时间。
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