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【求助】关于细菌的真空冷冻干燥方法
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这个帖子发布于4年零84天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
各位亲们，谁用过真空冷冻干燥仪保存过细菌，具体步骤是什么，求教！
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真空冷冻干燥法将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。操作步骤如下：好氧菌冷冻干燥管的制备1 安瓿管准备安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。2 保护剂的选择和准备保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度及pH值，以及灭菌方法。如血清，可用过滤灭菌；牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，一般在100℃间歇煮沸2-3次，每次10-30分钟，备用。3 冻干样品的准备在最适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期，进行纯度检查后（参见科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件《微生物菌种纯度检测技术规程》（试行）），与保护剂混合均匀，分装。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于108-1010个/ml为宜（以大肠杆菌为例，为了取得每毫升1010个活细胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升琼脂斜面两支）。采用较长的毛细滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物，应离心去除培养基，然后将培养物与保护剂混匀，再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。4 预冻一般预冻2小时以上，温度达到-20℃到-35℃左右。5 冷冻干燥采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。6 真空封口及真空检验将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。熔封后的干燥管可采用高频电火花真空测定仪测定真空度。7 保藏安瓿管应低温避光保藏。8 质量检查冷冻干燥后抽取若干支安瓿管进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。厌氧菌冷冻干燥管的制备主要程序与需氧菌操作相同，注意保护剂的选择和准备，保护剂使用前应在100℃的沸水中煮沸15分钟左右，脱气后放入冷水中急冷，除掉保护剂中的溶解氧。复苏方法—— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，—— 将安瓿管顶部烧热，—— 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，—— 用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养。参考http://www.china-cicc.org/preserve/index.htm
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丁香园准中级站友
年华无伤 各位亲们，谁用过真空冷冻干燥仪保存过细菌，具体步骤是什么，求教！ 这个还是与机器型号相关，找到操作老师问下。或是看下机器，找到相关的厂商咨询下。
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使用冻干机冻干菌种，根据无菌级别的要求，可以采用实验室冻干机配置多歧管和安瓿瓶适配器、穿墙式的多歧管，以及穿墙式的冻干设备，配备广口瓶和菌种管。具体操作，与冻干机的型号和配置有关。
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关于丁香园暴露在空气中的生锈铁丝上面有破伤风杆菌吗...
暴露在空气中的生锈铁丝上面有破伤风杆菌吗...
暴露在空气中的生锈铁丝上面有破伤风杆菌吗？不是说它厌氧吗，那就算是铁锈 暴露在空气中也不能存活把？
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医院出诊医生
擅长：小儿内科
擅长：外科
共5条医生回复
因不能面诊，医生的建议及药品推荐仅供参考
职称：护士
专长：泌尿生殖感染，肾结石，遗尿
&&已帮助用户：4183
问题分析：考虑你说的这种情况，首先你是被金属铁丝划伤了吗？一般情况下被金属划伤的伤口，建议还是需要及时注射破伤风的！意见建议：建议伤口每天都需要消毒处理，避免感染发炎，如果已经错过了破伤风注射的最佳时间的话，也不用太担心，好好处理伤口就可以了，希望我的回答能够帮助到你！
职称：护士
专长：胃溃疡性穿孔,胃出血,胆囊息肉静脉曲张
&&已帮助用户：10027
问题分析：你好，生锈铁丝才会用，因为破伤风杆菌是厌氧细菌，也就是说有氧气的地方就不会有破伤风杆菌，不过划伤之后，如果不透风的话，可能会有。意见建议：建议你还是到医院的感染科进行详细的咨询下医生比较好。
职称：药师
专长：药物过敏,感冒颗粒,金莲花胶囊,无极膏,三黄片,双...
&&已帮助用户：18422
问题分析：锈铁丝划伤皮肤，只要不是很深。用一般的抗菌消炎药物治疗即可，不会引发破伤风感染。其破伤风病原菌也不可能滋生。意见建议：一般来讲，细菌中的杆菌含有芽孢，环境即使在恶劣，芽孢不会死亡，但如果有适宜的生存环境，即可滋生。这也是为啥破旧生锈的铁钉扎伤皮肤过深会产生破伤风杆菌感染的原因。
职称：主治医师
专长：甲状腺疾病、乳腺疾病、胃、十二指肠溃疡，肠梗阻、肠...
&&已帮助用户：140690
问题分析：您好！破伤风杆菌属于厌氧菌，适宜在较深且污染较重或感染伤口内生长繁殖，暴露在空气 中的生锈铁丝上面不会有破伤风杆菌生长。意见建议：没必要必要紧张，只要伤口不深，用碘伏消毒，口服消炎药预防感染就可以。
职称：医师
专长：阑尾炎,甲状腺次全切除术,甲状腺肿瘤,腹壁疝,损伤...
&&已帮助用户：43193
问题分析：您好根据您的描述。 一般来说，暴露于空气中而生锈的铁丝上是没有破伤风杆菌的，因为破伤风杆菌属于套氧菌，只能生存于缺氧的环境中，如泥土内，而对于暴露于空气中的物体上是难以存活的。意见建议：鉴于上述情况，暴露于空气中的生锈铁丝上一般是没有破伤风杆菌的。
问标题：被生锈铁丝挑破皮没流血，会...
职称：医师
专长：胃溃疡性穿孔,肠粘连,疝气
&&已帮助用户：63031
病情分析： 你好，你的这种损伤出现破伤风的可能性非常小，几乎不存在。意见建议：破伤感染必须具备二个条件，一个是无氧的伤口环境，二是有破伤风感染。你的处理是及时正确的。这种伤口小而且浅，不可能形成无氧的环境，因而不会引起破伤风感染。但由于皮肤有损伤，有可能引起常见的感染，因而必须对伤口做认真的消毒处理。
问溃疡面暴露在空气中会如何
专长：甲亢、肿瘤科痛风
&&已帮助用户：229465
你好口腔中也是存在杀菌系统的所以一般的细菌在口内不会过度的繁殖但是又不会全部杀干净毕竟口腔不是密闭的环境即使房间有细菌也在可控制的范围内即使接触溃疡问题不会太大生锈的铁丝在超时环境下才可能会有破伤风杆菌在家里的话干燥没事口腔环境的话在前面是有氧的环境但是在后面扁桃体角落牙龈角那里是缺氧的所以牙龈炎用的是专治厌氧菌感染的甲硝锉部位不一样菌群不一样祝你降
问脚被生锈的铁丝扎的挺深
职称：医师
专长：冠心病,慢性肺源性心脏病,心绞痛,心肌梗死,急性心功能不全
&&已帮助用户：562
问题分析：你好，因为铁丝扎到的伤口太小，伤口的清理是很困难的，所以伤口里面一般都会有一些残留物，这就会容易引起发炎、化脓等情况。意见建议：根据你的情况，估计伤口已经发炎了，建议服用头孢克洛抗感染治疗；如果伤口出现化脓，必要时需切开排脓。祝早日康复。
问被生锈的铁丝戳了一下，没出血，要打破伤风针吗？
职称：医师
专长：内科、消化内科
&&已帮助用户：134226
你好， 最好是注射。
生锈的铁丝一般带有破伤风杆菌。
问#儿时疑惑#手划破了，从地上弄点土盖上搓一搓就能止血吗？
职称：医师
专长：内科常见疾病
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病情分析：你好，对于你的情况是可以止血的，但是容易感染
意见建议：
问破伤风是厌氧菌感染，＂伤口大要打＂这句话都说得出来...
职称：医师
专长：四肢骨折、颈肩腰腿痛
&&已帮助用户：15925
病情分析： 这句话要这样理解，伤口深的，伤口外口又比较小的不清洁的伤口最容易感染破伤风。其实，现在开放性外伤一般医生都要求打破伤风的。但是对于浅表的伤口，一般是不会感染破伤风的，还有就是接触伤口的东西也不一定都会沾有破伤风杆菌，但为了防止万一，对于开放性伤口医生都要求打破伤风抗素血清。意见建议：希望上面的解释你能看明白 ，伤口太脏，建议最好还是要打防破伤风针的。
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评价成功！厌氧菌遇到空气会死吗?_百度知道
厌氧菌遇到空气会死吗?
厌氧菌遇到空气会死吗?为什么？（要说明原因）
会死的，看一下网上摘录你就会理解:厌氧菌（anaerobicbacteria）是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，而不能在空气（18%氧气）和（或）10％二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。　　厌氧菌尚无公认的确切定义，但通常认为这是一类只能在低氧分压的条件下生长，而不能在空气（18%氧气）和（或）10％二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。按其对氧的耐受程度的不同，可分为专性厌氧菌、微需氧厌氧菌和兼性厌氧菌。
大多数会的，但也有少数的厌氧菌存活下来，但是其生长会受到抑制。
有些是有氧气就会死的有些并不一定是死而是抑制了细菌了生长
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